Fiche technique

Prlvement de moelle osseuse

Tatiana Vinardell* Florent David**
* DVM, IPSAV, MSc, PhD Trinity Centre for Bioengineering, Trinity College Dublin, Dublin 2, Ireland Veterinary Nursing, School of Veterinary Medicine, University College Dublin, Belfield, Dublin 4, Ireland ** DVM, MSc, Dipl. ACVS & ECVS, ECVDI Assoc., Dipl. ACVSMR Large Animal Surgery, Veterinary Clinical Studies, School of Veterinary Medicine, University College Dublin, Belfield, Dublin 4, Ireland.

La moelle osseuse dite rouge est localise dans les os courts et plats tels que le sternum, les ctes et les os du bassin, alors que la moelle osseuse dite jaune se situe dans la cavit mdullaire des os longs [1]. La moelle osseuse rouge est un tissu conjonctif compos de macrophages, de cellules graisseuses, de cellules souches msenchymateuses et de cellules hmatopotiques qui fournissent les futures cellules sanguines [1, 2]. Les cellules souches msenchymateuses sont dites pluripotentes car elles ont la capacit de se diffrencier en cellules osseuses, cartilagineuses ou adipeuses [2]. Dans un souci duniformiser les mthodes de caractrisation de cellules souches msenchymateuses quines, une dfinition a t propose rcemment : une cellule souche msenchymateuse quine est dfinie comme une cellule qui a le pouvoir dadhrer au plastique, qui est pluripotente et qui exprime les antignes de surface CD38, CD29, CD44 et CD90, mais qui nexprime pas les antignes CD14, CD79 et MHC-II (CD, cluster differenciation ; MHC, major histocompatibility complex ) [3]. Actuellement, plusieurs laboratoires europens comme Vet Cell, EqStem ou

encore 2F Stemcells proposent, de manire commerciale, un service dextraction et de mise en culture de cellules souches msenchymateuses partir dun prlvement de moelle osseuse ralis par le vtrinaire. Cette fiche technique prsente les diffrentes techniques dextraction de moelle osseuse effectues communment par le praticien.

> Site de prlvement

Les cellules de la moelle osseuse chez le cheval sont prleves au niveau du sternum et moins frquemment la tubrosit coxale du pelvis. La technique de ponction au sternum est ralise couramment en pratique vtrinaire quine, mais des complications trs srieuses peuvent survenir, comme la ponction cardiaque iatrognique et la pneumo-pricardite [6]. Un article rcent a dcrit la troisime sternbre comme tant lendroit le plus scuritaire pour raliser une ponction, car elle est large et se situe cranialement lapex du cur [5].

midine 5 10 g/kg par voie intraveineuse) qui sont ventuellement associs des opiacs (butorphanol 5 15 g/kg par voie intraveineuse). Un tord-nez peut tre utilis. Un carr de 10 10 cm est tondu en regard de la troisime sternbre et une chographie peut tre ralise pour localiser le site de prlvement. Pour lchographie, de leau chaude, puis du gel chographique sont appliqus sur une zone caudalement au coude. Une palpation des sternbres est ralise, puis le positionnement est confirm laide dune sonde chographique de 5 10 MHz. Deux sternbres et un espace intersternbral sont alors localiss (photos 1a 1c) [4]. Le site peut tre signal avec un marqueur de bureau de type Tipp-Ex, du ct o loprateur va se positionner [6]. Enfin le site est nettoy puis prpar strilement.

> Technique de prlvement

Une anesthsie locale sous-cutane est effectue au site de ponction, dans le plan mdian et juste en arrire du coude avec 5 ml de lidocane 2 % et une aiguille de 21 G. Une incision cutane avec un scalpel n 11

> Prparation
Une sdation lgre du cheval est requise base d2-agonistes (dto-

1a Photos 1a 1c.

1b

1c

Reprage chographique des sternbres et des espaces intersternbraux cartilagineux (1a). Images chographiques du sternum en coupe longitudinale (1b) et transverse (1d). Notez les espaces intersternbraux (flches vertes) et la troisime sternbre o laiguille de Jamshidi doit tre insre (flches blanches). Clich : T.Vinardell et F. David.

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ou 15 est ralise quelques minutes plus tard pour faciliter lintroduction de laiguille de biopsie mdullaire de type Jamshidi (photos 2a et 2b). Avant de commencer la procdure, il convient de sassurer que le cheval ne soit pas trop tranquillis car une chute pendant la procdure avec laiguille de Jamshidi en place pourrait avoir des consquences dsas-

treuses. Laiguille prsente un diamtre de 11-12 G. Elle est introduite dans le plan mdian jusqu ce que le contact avec los soit obtenu. Un assistant doit tre positionn en avant du cheval et regarder vers larrire. Il indique loprateur si laiguille est bien oriente dans le plan mdian (photos 3a 3c). Dans le cas contraire, la position est modifie et

2a Photos 2a et 2b.

2b

Aiguille de biopsie mdullaire de type Jamshidi 11 G (Mila). (2a) Stylet coupant avec verrouillage ( gauche), aiguille sans stylet ( droite). (2b) Aiguille de Jamshidi complte avec garde en forme de poigne pour permettre loprateur dappliquer une pression importante et contrle pour faire pntrer laiguille progressivement travers la partie osseuse de la sternbre. Clich : F. David.

lassistant confirme que la nouvelle angulation est optimale. Laiguille est ensuite avance de 1,5 2 cm travers los cortical de la sternbre dans la cavit mdullaire. Comme le sternum prsente une crte sternale assez saillante cranialement, il est facile de glisser de part et dautre de celle-l. Si besoin, laiguille est repositionne et il convient de vrifier avec laide de lassistant que langulation dans le plan mdian est maintenue. Il est important de garder un doigt 2 cm de la peau une fois que laiguille est en contact avec los pour pouvoir arrter le mouvement et prvenir une pntration intrathoracique [4]. Une fois laiguille introduite dans la sternbre, le stylet de laiguille est retir et une seringue strile de 30 ml remplie au pralable de 5 000 UI dhparine ou dun anticoagulant quivalent est connecte laiguille de Jamshidi. Laspiration de moelle osseuse est gnralement lente et une succion ngative assez importante est ncessaire pour initier laspiration. Entre 20 et 30 ml de moelle osseuse sont prlevs par cheval (photo 4). Une seconde seringue peut tre utilise si besoin.

3a Photos 3a 3c.

3b

3c

Insertion dune aiguille de Jamshidi au niveau du sternum. Le cheval est plac dans un travail et se tient au carr. Laiguille est introduite 5 cm caudalement au coude dans le plan mdian, verticalement (3a). Il est difficile dvaluer par le ct la verticalit de linsertion. Un assistant situ lavant du cheval est dune aide prcieuse pour corriger la position de laiguille avant quelle soit introduite plus profondment (3b : position incorrecte ; 3c : position correcte). Clich : F. David.

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Une fois laspiration termine, la seringue est dconnecte, le stylet repositionn et laiguille retire. Le contenu de la seringue est mlang doucement plusieurs fois pour obtenir une distribution homogne dhparine dans lchantillon puis le tout est transfr dans un contenant strile. Une compresse strile est applique localement pour effectuer une compression au site de ponction pendant quelques minutes si un saignement est observ. La plaie cutane nest pas suture. Un bandage adhsif (Primapore ou quivalent) est mis en place ou un peu de spray/onguent antiseptique est appliqu localement une fois le saignement sous contrle. Lutilisation de lchographie pour reprer le site de ponction nest pas obligatoire mais est recommande, particulirement chez les jeunes chevaux dont la taille des sternbres est encore relativement petite par rapport au cartilage de croissance autour qui sossifie progressivement avec lge. Il est donc assez facile dintroduire laiguille dans un espace intersternbral cartilagineux et de ne pas rcolter de moelle osseuse. Si cest le cas et que laiguille a t introduite sur plus de 2 cm une fois le contact osseux obtenu, il convient de retirer laiguille et de lintroduire plus cranialement ou caudalement par rapport la position de dpart. Continuer introduire laiguille dorsalement sans la repositionner augmente le risque dinsertion intrathoracique et de complications srieuses.

toire est recommande pour limiter la douleur lie la procdure. Un repos de 48 heures est prconis, mais, dans la grande majorit des cas, le cheval est dj au repos pour laffection primaire. Bien que les complications soient rarissimes, la plaie doit tre observe durant les 5 7 jours qui suivent la procdure et le box doit tre nettoy frquemment pour sassurer dune bonne hygine. La temprature rectale est contrle matin et soir pendant 5 jours, en mme temps que le confort respiratoire. Si le cheval prsente de la fivre, de labattement, des difficults respiratoires, ou des anomalies au niveau de la plaie (gonflement, coulements, douleur), une rvaluation est vivement conseille dans les plus brefs dlais. Mme si, dans la grande majorit des cas, le cheval est au repos pour la lsion traite laide des cellules souches, les chevaux qui restent lexercice ne doivent pas tre sangls pendant les 7 jours qui suivent le prlvement. Si de la douleur persiste au site de ponction aprs 7 jours, un repos supplmentaire est indiqu.

Photo 4.

Aspiration de moelle osseuse laide dune aiguille de Jamshidi au niveau du sternum. Linsertion de laiguille est ralise assez caudalement et peut tre risque dans des mains inexprimentes car le sternum devient de plus en plus fin ce niveau et la pointe du cur se trouve juste dorsal au sternum. Une approche plus craniale est dfinitivement plus sre. Clich : T.Vinardell.

> Autres techniques de prlvement

Il existe dautres sites de prlvement de la moelle osseuse comme la tubrosit coxale du bassin (moins riche en cellules souches par rapport au sternum chez les chevaux dge mr), la rgion proximale du tibia ou de lhumrus. La tubrosit coxale est le deuxime site le plus couramment utilis. La ponction est ralise au tiers ventral de laile iliaque, 4 cm mdialement la tubrosit coxale (photo 5) [7]. La ponction peut ventuellement tre effectue entre les bords dorsal et ventral du tuber coxae chez les chevaux dge mr o le tuber coxae nest plus recouvert de cartilage.

Photo 5.

> Gestion aprs prlvement

Il convient de vrifier que la couverture antittanique est jour et, dans le cas contraire, un srum antittanique est administr. Une dose danti-inflamma-

Aspiration de la moelle osseuse dans la tubrosit coxale avec une aiguille de Jamshidi. La tubrosit coxale est indique par le scotch blanc des fins didactiques. Laiguille est insre dorsalement la tubrosit, 4 cm mdialement et dans son tiers ventro-caudal. Clich : F. David.

Rfrences
1 - Barone R. Structure des os. Dans : Anatomie compare des mammifres domestiques : ostologie. Ed. Vigot, Paris. 1999:1:49-62. 2 - Caplan AI. Mesenchymal stem cells. J. Orthop. Res: official publication of the Orthopaedic Research Society. 1991;9:641-650. 3 - De Schauwer C, Meyer E, Van de Walle GR, Van Soom A. Markers of stemness in equine mesenchymal stem cells: a plea for uniformity. Theriogenol. 2011;75:1431-1443. 4 - Desevaux C, Laverty S, Doize B. Sternal bone biopsy in standing horses. Vet. Surg. 2000;29:303-308. 5 - Kasashima Y, Ueno T, Tomita A et coll. Optimisation of bone marrow aspiration from the equine sternum for the safe recovery of mesenchymal stem cells. Equine Vet. J. 2011;43:288-294. 6 - Taylor SE, Clegg PD. Collection and propagation methods for mesenchymal stromal cells. Vet. Clin. North Am. Equine Pract. 2011;27:263-274. 7 - Toupadakis CA, Wong A, Genetos DC et coll. Comparison of the osteogenic potential of equine mesenchymal stem cells from bone marrow, adipose tissue, umbilical cord blood, and umbilical cord tissue. Am. J. Vet. Res. 2010;71:1237-1245.

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