SYNTHSE

mdecine/sciences 1997 ; 13 : 777-89

Rgulation de la contraction
du muscle lisse
Abdellatif Fattoum

Il est tabli depuis longtemps que la phosphorylation spcifique, dpendante du complexe Ca2+-calmoduline, des
chanes lgres rgulatrices (LC20) de la myosine par la
kinase correspondante (MLCK) reprsente un vnement
initiateur capital dans le dveloppement de la force
contractile du muscle lisse. Actuellement, on dmontre que
le filament fin naturel possde galement la proprit de
moduler la vitesse de raccourcissement de la fibre musculaire en agissant sur le complexe acto-myosine par lintermdiaire de protines de dcouverte rcente, fortement
lies lactine, telles que la caldesmone et la calponine.
Lintervention alterne des deux systmes de rgulation,
lun au niveau des filaments pais et lautre au niveau des
filaments fins, pourrait expliquer certaines proprits du
latch-bridge, phnomne caractristique du maintien dun
tat contract en phase tonique, propre au muscle lisse, et,
plus particulirement, au tissu vasculaire, observ lors de
la baisse du niveau de phosphorylation de la myosine.

a contraction musculaire est

une proprit physiologique
fondamentale de la matire
vivante et la transduction de
lnergie par le systme universel de lacto-myosine ATPase est
une des questions les plus attractives
de la biologie moderne. Lintrt
pour la contractilit musculaire et
cellulaire a connu la fin de notre
sicle un essor considrable. Aprs
les annes 1950-1960 o le dveloppement de la recherche sur le muscle
stri squelettique sest fortement
consolid, on assistait tout au long
des annes 1970-1980, grce
lapport grandissant dune technologie de plus en plus fine, un avancement rapide des travaux sur le
muscle lisse. Lutilisation conjointe
de la microscopie lectronique et de

L
ADRESSE
A. Fattoum : directeur de recherche lInserm.
Centre de recherches de biochimie macromolculaire, Cnrs-UPR 9008, Inserm
U. 249, universit de Montpellier I, route de
Mende, BP 5051, 34033 Montpellier Cedex,
France.

TIRS PART
A. Fattoum.
m/s n 6-7, vol. 13, juin-juillet 97

la diffraction des rayons X dans lanalyse des structures subcellulaires,

ainsi que ltude biochimique et physico-chimique de plusieurs macromolcules biologiques rcemment purifies partir de ce muscle, ont
donn une nouvelle dimension
lapprhension de ses proprits
mcaniques et de leur fonction.
De lamibe lhomme, la manifestation de tout mouvement ncessite la
conversion de lnergie chimique en
nergie mcanique qui met en uvre
linteraction de deux protines
majeures, lactine et la myosine et
lhydrolyse rapide par cette dernire
dune liaison phosphate contenue
dans la molcule dadnosine 5-triphosphate (ATP) fortement nergtique. Au cours de la contraction
musculaire, il y a formation de ponts

777

RFRENCES
1. Small JV, Frst DO, Thornell LE. The
cytoskeletal lattice of muscle cells. Eur J Biochem 1992 ; 208 : 559-72.
2. North AJ, Gimona M, Cross RA, Small JV.
Calponin is localized in both the contractile
apparatus and the cytoskeleton of smooth
muscle cells. J Cell Sci 1994 ; 107 : 437-44.
3. Mabuchi K, Li Y, Tao T, Wang CLA.
Imminocytochemical localization of caldesmon and calponin in chicken gizzard
smooth muscle. J Muscle Res Cell Motil 1996 ;
17 : 243-60.
4. Eldin P, Cornillon B, Mornet D, Lger J.
Une nouvelle jeunesse pour les myosines.
Med Sci 1995 ; 11 : 1005-16.
5. Yanagisawa M, Hamada Y, Katsuragawa Y,
Imamura M, Mikawa T, Masaki T. Complete
primary structure of vertebrate smooth
muscle myosin heavy chain deduced from
its complementary DNA sequence. Implications on topography and function of myosin. J Mol Biol 1987 ; 198 : 143-57.
6. Babji P, Kelly C, Periasamy M. Characterization of a mammalian smooth muscle myosin heavy chain gene : complete nucleotide
and protein coding sequence. Proc Natl
Acad Sci USA 1991 ; 88 : 10676-80.
7. Messer NG, Kendrick-Jones J. Molecular
cloning and sequencing of the chicken
smooth muscle myosin regulatory light
chain. FEBS Lett 1988 ; 234 : 49-52.
8. Tan JL, Ravid S, Spudich JA. Control of
nonmuscle myosins by phosphorylation.
Annu Rev Biochem 1992 ; 61 : 721-59.
9. Allen BG, Walsh MP. The biochemical
basis of the regulation of smooth-muscle
contraction. Trends Biochem Sci 1994 ; 19 :
362-8.
10. Herman IM. Actin isoforms. Curr Op Cell
Biol 1993 ; 5 : 48-55.
11. Smillie LB. Tropomyosin. In : Barany M.
ed. Biochemistry of smooth muscle contraction.
New York : Academic Press, 1996 : 63-75.
12. Marston SB, Redwood CS. The molecular anatomy of caldesmon. Biochem J 1991 ;
279 : 1-16.
13. Bartegi A, Fattoum A, Kassab R. Crosslinking of smooth muscle caldesmon to the
NH2-terminal region of skeletal F-actin. J
Biol Chem 1990 ; 265 : 2231-7.

778

transversaux intermolculaires entre

les ttes globulaires de la myosine et
les monomres polymriss de
lactine avec le glissement des filaments fins sur les filaments pais. Le
cycle dattachement-dtachement des
ttes de myosine le long du filament
dactine obit des exigences conformationnelles locales transitoires de
ces deux protines, modulables par
une multitude de stimulus (mtabolites locaux, effecteurs chimiques ou
hormonaux) en rapport avec un cortge de protines spcifiques dites
associes lactine (tropomyosine, actinine, filamine, gelsoline, profiline, caldesmone et calponine).
La complexit histologique et
lhomognit relative du tissu musculaire lisse (vasculaire, gastro-intestinal, respiratoire, uro-gnital), la purification et la caractrisation encore
inacheves de protines qui seraient
impliques dans la machinerie
contractile font que le mcanisme
(ou les mcanismes) de rgulation et
de contrle de ce muscle nest pas
encore bien tabli, compar celui,
beaucoup mieux connu, du muscle
stri (squelettique et cardiaque).
Dans cette revue, nous nous proposons de regrouper et danalyser les
donnes actuelles sur ce sujet.

Ultrastructure du muscle
lisse et organisation
des protines contractiles
Les vaisseaux sanguins, la trache, les
bronches, le larynx, lestomac, lintestin, les sphincters, la vessie, lutrus
contiennent une proportion plus ou
moins importante de muscle lisse. Ce
sont souvent des organes creux vasculaires ou viscraux ayant laptitude de
se contracter afin de saccommoder
de leur contenu et de le propulser de
plus en plus loin. Ils sont sous le
contrle du systme neurovgtatif et
jouent un rle primordial dans divers
processus physiologiques vitaux :
pression artrielle, pristaltisme, parturition, miction... Lexpulsion du
nouveau-n au cours de laccouchement, le rle sibilant de lasthmatique et le spasme des artres coronaires ne sont autres que des
manifestations de la contractilit des
cellules musculaires lisses qui constituent la paroi de lutrus, des voies
respiratoires et des vaisseaux sanguins. Relativement peu diffren-

cies, ces cellules sont mononucles, gnralement fusiformes et

orientes paralllement les unes par
rapport aux autres avec des extrmits pointues et parfois bifides. De
tailles trs variables, elles sont 30 fois
plus longues dans la paroi utrine
(500 m) que dans les capillaires sanguins, mais toujours nettement plus
courtes que celles du muscle stri qui
peuvent atteindre plusieurs centimtres de long. Elles sont associes
entre elles par une charpente de tissu
conjonctif renfermant essentiellement du collagne et de llastine. La
grande plasticit du tissu musculaire
lisse rend plus difficile ltude de son
organisation spatiale et de son dynamisme, notamment au niveau de ses
diffrentes structures contractiles qui
demeurent pour la plupart dentre
elles aujourdhui encore peu explores. Cest dans les annes 1970,
quont t clairement identifies
lintrieur du tissu musculaire lisse
des vertbrs trois structures filamenteuses morphologiquement et fonctionnellement diffrentes : les microfilaments, les filaments intermdiaires
et les microtubules avec un diamtre
caractristique correspondant 8,
10, et 25 nm respectivement. Lorganisation irrgulire (absence darrangement priodique) de ces fibres diffre de celle ordonne et cristalline
que lon rencontre dans la cellule du
muscle stri. Les filaments de muscle
lisse sont regroups autour de corps
denses (aux lectrons) disperss
lintrieur de la cellule et renfermant
notamment de l-actinine. Ces corps
sont comparables aux stries Z du sarcomre de muscle squelettique et
constituent des structures dynamiques responsables de la physionomie priphrique de la cellule et de
sa motilit. Certains de ces corps sont
associs au cytoplasme, dautres sont
fixs sur des plaques denses, sorte de
jonctions de type plaques adhrentes, situes la face interne de la
membrane plasmique et qui servent
de points dattache aux extrmits
croissance rapide des filaments
dactine [1]. Les plaques denses
alternent au niveau du sarcolemme
avec des rgions riches en invaginations ou caveolaes, vritables rserves
du calcium et sites exclusifs de localisation de la dystrophine qui sy
exprime dune manire particulirement discontinue. Des tudes immum/s n 6-7, vol. 13, juin-juillet 97

nocytochimiques ont montr que la

cellule du muscle lisse contient deux
classes principales de filaments fins
rparties en deux domaines cytoplasmiques structuralement distincts : un
domaine (ou appareil) contractile
qui renferme actine, myosine et caldesmone, et un domaine cytosquelettique, dpourvu de myosine et de caldesmone mais contenant actine,
filaments intermdiaires (desmine) et
filamine. La calponine, une autre protine majeure du filament fin, a t
localise en partie au niveau de lappareil contractile, mais aussi et surtout,
dans diffrentes rgions du cytosquelette, corps denses et plaques adhrentes, structures proches de la membrane cellulaire [2, 3]. Comprendre
aujourdhui le mcanisme molculaire
de contrle de la vasomotricit, par
exemple, revt un intrt primordial
dans le cadre des recherches sur les
maladies cardiovasculaires, principales
causes de morbidit et de mortalit
dans les pays industrialiss.
Proprits du filament pais
Myosine
Les filaments pais sont constitus
principalement de myosine. Dans le
muscle lisse la myosine (56 M) possde peu prs les mmes proprits
physico-chimiques que son quivalent du muscle squelettique
(0,18 mM) : coefficient de sdimentation, poids molculaire et configuration en tte de flche caractristique
du complexe rigor form en prsence
de F-actine. Au point de vue biochimique, la molcule de myosine est
un complexe htrohexamrique
non covalent constitu de deux
chanes lourdes de 220 kDa environ
chacune, associes au niveau de leurs
ttes globulaires deux paires de
chanes lgres : la LC20 de poids
molculaire 20 kDa, phosphorylable,
dite chane rgulatrice, et la LC17 de
poids molculaire 17 kDa, dite
chane essentielle (figure 1).
La chane lourde de la tte globulaire
ou S1, de poids molculaire 95 kDa,
est constitue de trois segments 25, 50
et 20 kDa connects par deux
squences courtes sensibles aux protases et formant des boucles flexibles
la surface de la protine. Elle renferme les deux sites ncessaires sa
fonction motrice : celui de lhydrolyse
de lATP proche de la jonction aminom/s n 6-7, vol. 13, juin-juillet 97

Myosine
Mromyosine lgre
(110 nm)

Mromyosine lourde
(45 nm)
S2

S1

LC 20
(P)
Tropomyosine (TM)

Calponine (CaP)

Actine

LC 17

Caldesmone (CaD)

Figure 1. Reprsentation schmatique du filament fin : filament dactine et

protines rgulatrices associes en prsence dune molcule de myosine du
filament pais.

terminale 25-50 kDa et celui de linteraction avec lactine non loin de la

jonction 50-20 kDa [4]. Les deux types
de chanes lgres sont localiss du
ct carboxy-terminal du S1, trs
proches lune de lautre. Lautorgulation de la tte globulaire ncessite
lintgrit structurale de la jonction
entre le S1 et la queue fibrillaire
(S1/S2). De plus, la corrlation entre
la molcule de myosine, sa fonction
enzymatique et la stabilit des filaments quelle forme travers les
divers tissus musculaires lisses, phasique (viscral, par exemple) ou
tonique (vasculaire, par exemple)
devient plus complexe par la prsence
de plusieurs isoformes prsentant des
variations structurales situes dans des
rgions diffrentes, tant sur la chane
lourde que sur la chane lgre. A la
diffrence de ce que lon observe
dans le muscle squelettique o les isoformes de chanes lourdes sont
codes par une famille multignique,
la diversit des chanes du muscle lisse
est principalement engendre par
pissage alternatif. Il a t rapport
que linsertion de sept acides amins
au niveau de la jonction 25-50 kDa de
la tte de myosine de lintestin rduit
laffinit de lADP et acclre sa libration du cross-bridge. On connat
depuis peu la squence nuclotidique
complte de la chane lourde de myosine de gsier de poulet, de lutrus

de lapin [5, 6] et de la chane lgre

rgulatrice du gsier de poulet [7].
Dans le muscle lisse, les filaments de
myosine sont plus longs que ceux du
muscle stri (2,2 m au lieu de
1,5 m), avec une forme atypique et
une structure labile. Lultracentrifugation analytique a montr que les
molcules de myosine du muscle lisse
peuvent se prsenter sous deux
formes monomriques en quilibre,
remarquablement interconvertibles
et qui sdimentent des vitesses diffrentes. A pH et force ionique physiologiques et en prsence dATP-Mg, il
y a prdominance de la conformation
compacte 10S replie au 2/3 sur ellemme avec une queue en pingle
cheveux et incapable dinduire la formation des filaments et donc dinteragir avec lactine. La phosphorylation
des chanes lgres rgulatrices provoque lextension de la queue de la
molcule et la myosine passe de la
forme 10S enzymatiquement inerte
(turnover de lATP-Mg : 0,2-0,5 ms)
une forme 6S active, plus allonge,
capable de polymriser en filaments
stables mme en prsence de fortes
concentrations de nuclotide. Les
deux formes 10S et 6S semblent correspondre respectivement ltat de
relaxation et de contraction musculaire. Cette transition conformationnelle se localise essentiellement la
jonction S1/S2 de la molcule. Elle

779

RFRENCES
14. Mezgueldi M, Derancourt J, Calas B,
Kassab R, Fattoum A. Precise indentification
of the regulatory F-actin-and calmodulinbinding sequences in the 10 kDa carboxylterminal domain of caldesmon. J Biol Chem
1994 ; 269 : 12824-32.
15. Mak AS, Carpenter M, Smillie LB, Wang
JH. Phosphorylation of caldesmon by
p34cdc2 kinase. Identification of phosphorylation sites. J Biol Chem 1991 ; 266 : 19971-5.
16. Takahashi K, Nadal-Ginard B. Molecular
cloning and sequence analysis of smooth
muscle calponin. J Biol Chem 1991 ; 266 :
13284-8.
17. Represa A, Tabelsi-Terzidis H, Plantier
M, Fattoum A, Jorquera I, Agassandian C,
Ben-Ari Y, Der Terrossian E. Distribution of
caldesmon and of the acidic isoform of calponin in cultured cerebellar neurons and
in different rigions of the rat brain : an
immunofluorescence and confocal microscopy study. Exp Cell Res 1995 ; 221 : 333-43.
18. Maguchi M, Nishida W, Kohara K,
Kawano A, Kondo I, Hiwada K. Molecular
cloning and gene mapping of humain basic
and acidic calponins. Biochem Biophys Res
Commun 1995 ; 217 : 238-44.
19. Mezgueldi M, Mendre C, Calas B, Kassab R, Fattoum A. Characterization of the
regulatory domain of gizzard calponin :
Interaction of the 145-163 region with Factin, calcium-binding-proteins and tropomyosin. J Biol Chem 1995 ; 270 : 8867-76.
20. El-Mezgueldi M, Strasser P, Fattoum A,
Gimona M. Expressing functional domains
of mouse calponin : Involvement of the
region around alanine 145 in the actomyosin ATPase inhibitory activity of calponin.
Biochemistry 1996 ; 35 : 3654-61.
21. Frid MG, Schekhonin BV, Koteliansky
VE, Glukhova MA. Phenotypic changes of
human smooth muscle cells during development : late expression of heavy caldesmon
and calponin. Dev Biol 1992 ; 153 : 185-93.

780

est induite par une phosphorylation

cooprative, mais non ordonne des
deux chanes lgres rgulatrices et
exerce une grande influence sur les
proprits enzymatiques et biologiques de la myosine, ainsi que sur sa
susceptibilit protolytique. Seule la
forme phosphoryle peut tre active
par lactine et la dphosphorylation
par une phosphatase spcifique
conduit la disparition des structures
filamentaires et linactivation du systme actomyosine-ATPase. La phosphorylation qui agit directement sur
ltape cintique limitante de lhydrolyse de lATP (ADP.Pi ADP + Pi)
induit lenchanement ractionnel
qui aboutit au travail mcanique du
glissement filamentaire. A ltat phosphoryl, la myosine peut, dans des
essais de motilit in vitro, dplacer
lactine une vitesse denviron
1 m/s 30. La phosphorylation de
la myosine du muscle lisse et des cellules non musculaires [8, 9] joue
donc un rle capital dans la rgulation dpendante du Ca2+ de lactivit
contractile dont le mcanisme, connu
depuis longtemps et gnralement
bien accept, sera discut plus loin.
Proprits du filament fin
Actine
Support mcanique de la contraction,
lactine est une protine ubiquitaire
dcouverte il y a plus de 50 ans et prsente dans toutes les cellules eucaryotes animales et vgtales. Partie
intgrante du cytosquelette sous-membranaire, lactine est un composant
majeur du filament fin qui reprsente
30 % 50 % des protines myofibrillaires totales, selon leur source. La
molcule dactine est forme dune
seule chane polypeptidique de 41 872
Daltons, soit 375 acides amins. Elle
est extrmement conserve au cours
de lvolution et ses proprits fondamentales (polymrisation, activation
de la myosine...) sont dune constance
remarquable quelle que soit son origine. La plupart des eucaryotes suprieurs possdent diverses isoformes
dactine codes par de multiples
gnes [10]. Lactine du muscle lisse se
distingue par la prdominance de sa
forme dans les cellules parenchymateuses (intestin, bronches, appareil
gnital) et de sa forme dans le
muscle vasculaire (aorte). Les diffrents types de muscles lisses peuvent

aussi contenir les formes et de

nature cytoplasmique. Au cours du
dveloppement des cellules du muscle
lisse, on assiste la diminution graduelle de lexpression de lisoforme
paralllement laugmentation de
celle de l ou de la -actine. On ne
connat pas encore la fonction exacte
de ces diverses isoformes qui se distinguent, entre autres, par leur point isolectrique et leur spcificit dexpression selon le tissu concern. Elles
pourraient correspondre certaines
compartimentalisations de lactine
dans ses interactions avec les protines associes. Outre lactine, protine majoritaire (0,9-1,6 mM au lieu
de 0,7 mM in situ pour le muscle squelettique), le filament fin du muscle
lisse est constitu de tropomyosine, de
caldesmone et de calponine en quantit relativement importante (figure 1).
Il est en revanche totalement dpourvu du complexe ternaire, troponines I, T et C, constituant essentiel
du filament fin du sarcomre qui
rgle dune faon dpendante du Ca2+
le couplage contraction-relaxation
dans les muscles squelettique et cardiaque. Cette particularit reprsente
une diffrence majeure entre muscle
stri et muscle lisse. Du fait de
labsence de ce complexe, la rgulation calcique au niveau du filament
pais a t longtemps la seule voie
rgulatrice envisage.
Tropomyosine
La tropomyosine (TM) du muscle lisse
(0,15-0,27 mM) constitue, comme
dans le muscle stri (0,1 mM), lun des
principaux composants du filament
fin avec une stchiomtrie estime in
vivo une molcule de tropomyosine
pour 7 monomres dactine. Fine et
allonge (42 x 2 nm) la protine de
masse molculaire 76 kDa est forme
de deux chanes polypeptidiques hlicodales non phosphoryles et
(dsignes parfois et ) associes en
double hlice dans un rapport 1:1 et
ayant 284 rsidus chacune ; lisoforme
prsente une plus grande mobilit
en gel dnaturant (sodium dodcyl
sulfate). A ltat natif, les chanes sont
assembles presque exclusivement en
htrodimre . On connat la
squence complte en acides amins
de chacune des deux sous-units [11].
Comme son homologue squelettique,
la tropomyosine lisse est capable, en
prsence de fortes concentrations de
m/s n 6-7, vol. 13, juin-juillet 97

cations divalents, de former in vitro

des paracristaux avec des priodicits
trs caractristiques visibles au microscope lectronique. En outre, elle
peut dans un systme enzymatique
hybride dactomyosine remplacer la
tropomyosine squelettique et se fixer
avec la mme affinit que celle-ci la
troponine-T. Ltude structurale paracristalline a rvl que les molcules
de tropomyosine possdent une polarit et qu faible force ionique le
dimre polymrise par recouvrement
dune dizaine dacides amins appartenant chacune de ses deux extrmits amino- et carboxy-terminales. Le
dimre est dispos le long dun sillon
central troit flanqu des deux brins
torsads du filament dactine. A ltat
polymrisant, les molcules de tropomyosine du muscle lisse augmentent
fortement la viscosit du milieu et ont
tendance sagrger. Des tudes biophysiques ont montr que ces mmes
molcules sont plus rigides et moins
stables que leurs homologues du
muscle stri. Enfin, si lon connat,
la faible rsolution de 9 , la structure
des cristaux de la tropomyosine du
muscle stri forms en prsence de
spermine, on ignore presque tout de
celle du muscle lisse. Lassociation
tte queue des sous-units successives est considre comme lune des
proprits fondamentales du systme
de rgulation de la contraction musculaire. Avec une constante apparente
de dissociation de 1 4 x 106 M,
lassociation tropomyosine-actine est
cooprative, ce qui confrerait aux
filaments fins leur rigidit et leur stabilit. Si, dans le muscle stri, la tropomyosine joue, en association avec le
complexe troponine, un rle primordial dans la rgulation de la contraction, sa fonction dans le muscle lisse
dpourvu de troponines est sujette
controverse. Elle pourrait intervenir
au niveau de lactivit Mg-ATPasique
de la myosine dont elle potentialise
lexpression, contribuer la protection et au renforcement de la stabilit
du filament fin ou encore la modulation de la rponse au flux calcique
transmembranaire de certaines protines spcifiques particulirement
abondantes dans le muscle lisse.
Caldesmone
La caldesmone (CaD) a t dcrite il y
a une quinzaine dannes comme une
protine liant lactine et la calmodum/s n 6-7, vol. 13, juin-juillet 97

line. Elle est constitue dune seule

chane polypeptidique trs sensible
aux protases mais ayant la proprit
de rsister la dnaturation par la chaleur (5 min 95 C) et les acides et
dinhiber lactivit de lactomyosineATPase. Isole pour la premire fois
partir du gsier de poulet, la caldesmone a t ensuite identifie dans
tous les types de tissus musculaires
lisses de vertbrs et dinvertbrs et
dans un grand nombre de cellules
non musculaires. Lisoforme non musculaire (L et L) possde une dltion (exclusion de lexon 3b) de
232 acides amins (rsidus 171-480
de la squence de caldesmone de
gsier de poulet) correspondant au
domaine-2 central de son homologue
musculaire (h et h) et la masse
molculaire calcule daprs lanalyse
des squences dADN complmentaire est, respectivement, de 60 kDa
et 87 kDa. Les deux isoformes musculaire et non musculaire proviennent
de lpissage alternatif de lARNm
transcrit partir dun seul gne
denviron 14 exons pour la caldesmone humaine. Le changement dans
lexpression isotypique et la conversion dune forme en une autre
seffectuent au cours de la diffrenciation cellulaire du muscle et de sa
modulation phnotypique. Relativement abondante dans le muscle lisse
(10-12 M), la caldesmone est un
composant multifonctionnel intrinsque du filament fin. Elle est phosphorylable, se lie la Ca2+-calmoduline, la tropomyosine et la myosine
et peut dissocier le complexe de la
profilactine (complexe stable de profiline et dactine G) et induire la polymrisation de lactine G (actine globulaire) en absence de tout autre agent
polymrisant. Les tudes biophysiques
ont montr que la caldesmone est une
molcule asymtrique (74 x 1,9 nm) et
flexible constitue de 4 grands
domaines structuraux distincts. Cette
structure fine et trs allonge renferme en son milieu une rgion -hlicodale rigide constitue dune dizaine
de motifs rptitifs dacides amins
trs chargs permettant la molcule
de stendre paralllement la tropomyosine, le long du sillon de la double
hlice du filament fin en couvrant 10
14 protomres dactine (figure 1).
Llectromicrographie du complexe
naturel caldesmone-tropomyosine-Factine ne laisse apparatre aucune pro-

jection latrale et des modles darrangement de la caldesmone le long du

filament fin dactine ont t proposs.
Lhydrolyse mnage de la caldesmone conduit la formation de plusieurs fragments peptidiques notamment le fragment de 25 kDa (Phe
581-Pro 756 dans la squence de la caldesmone de poulet) qui constitue
lextrmit carboxy-terminale de la
molcule ou domaine-4. Ce segment
de la molcule est bien conserv dans
toutes les isoformes et renferme les
sites de fixation de la calmoduline, de
lactine, de linhibition de lactomyosine-ATPase et ceux de la phosphorylation [12-15] (figure 2A). La proximit
de la Cys-580 de la caldesmone et de la
Cys-374, le pnultime rsidu de la
partie carboxy-terminale de lactine, a
t aussi rapporte. Par sa rgion
NH2-terminale ou domaine-1 (rsidus
1-170), la caldesmone se fixe au segment S2 de la myosine.
Calponine
La calponine (CaP) est une protine
monomrique de 34 kDa localise au
niveau du filament fin et isole pour
la premire fois en 1986 partir du
gsier de poulet et de laorte de
buf. Elle doit son nom sa capacit
dinteragir avec la calmoduline et sa
ractivit immunologique croise
avec la troponine T du muscle squelettique. Exprime essentiellement
dans le muscle lisse o elle est prsente une concentration molaire
relativement leve (100-150 M) par
rapport celle de la caldesmone
(10 M) et de la calmoduline (30 M)
mais proche de celle de la tropomyosine, la calponine se trouve en quantit beaucoup plus faible dans la plupart des cellules non musculaires o
elle est reprsente par une isoforme
appele calponine acide. Comme la
caldesmone, la calponine est stable
haute temprature avec, en revanche,
la capacit particulire de se renaturer aprs dnaturation par lure.
Elle est implique activement dans la
rgulation dpendante du Ca2+ de la
contraction du muscle lisse par son
pouvoir inhibiteur de lactivit ATPasique de lactomyosine sans affecter
ltat de phosphorylation de la myosine. La squence nuclotidique
complte des deux isoformes
(292 acides amins, masse molculaire = 32,3 kDa) et (252 acides amins, masse molculaire = 28,1 kDa) de

781

A Caldesmone
CaM site 1

Site de fixation (actine) et

d'inhibition (ATPase)

CaM site 2

MWEKGNVFS......NKETAGLKVGVSSRINEWLTKTPEGNKSPAPKPSDLRPGDVSGKRNLWEKQSVEKPAASSSK......L......P

659

692

722

756

RFRENCES
22. Hai CM, Murphy RA. Ca2+, cross-bridge
phosphorylation, and contraction. Annu
Rev Physiol 1989 ; 51 : 285-98.

23. Hemric ME, Freedman MV, Chalowich

JM. Inhibition of actine stimulation of skeletal muscle (A1)S-1 ATPase activity by caldesmon. Arch Biochem Biophys 1993 ; 306 : 3943.

B Calponine

24. Marston SB, Fraser IDC, Huber PAJ.

Smooth muscle caldesmon controls the
strong binding interaction between actintropomyosin and myosin. J Biol Chem 1994 ;
269 : 32104-9.
25. Mani RS, Kay CM. Calcium binding proteins. In : Barany M, ed. Biochemistry of
smooth muscle contraction. New York : Academic Press, 1996 : 105-16.
26. Adam LP, Hathaway DR. Identification
of mitogen-activated protein kinase phosphorylation sequences in mammalian h-caldesmon. FEBS Lett 1993 ; 322 : 56-60.
27. Katayama E, Scott-Woo G, Ikebe M.
Effect of caldesmon on the assembly of
smooth muscle myosin. J Biol Chem 1995 ;
270 : 3919-25.
28. Yin HL, Albrecht JF, Fattoum A. Identification of gelsolin, a Ca2+-dependent regulatory protein of actin gel-sol transformation, and its intracellular distribution in a
variety of cells and tissues. J Cell Biol 1991 ;
91 : 901-6.
29. Lamb Ned JC, Fernandez A, Mezgueldi
M, Labb JP, Kassab R , Fattoum A. Disruption of the actin cytoskeleton in living nonmuscle cells by microinjection of antibodies
to domain-3 of caldesmon. Eur J Cell Biol
1996 ; 69 : 36-44.
30. Warren KS, Lin JLC, Wanboldt DD, Lin
JJC. Overexpression of human fibroblast
CaD fragment containing actin-binding,
Ca2+-CaM-binding and tropomyosine-binding domains stabilizes endogenous tropomyosin and microfilaments. J Cell Biol 1994 ;
125 : 359-68.
31. Vibert P, Craig R, Lehman W. Threedimensional reconstruction of caldesmoncontaining smooth muscle thin filaments. J
Cell Biol 1993 ; 123 : 313-21.
32. Gusev NB, Pritchard K, Hodgkinson JL,
Marston SB. Filamin and gelsolin influence
Ca2+ sensitivity of smooth muscle thin filaments. J Muscle Res Cell Motil 1994 ; 15 : 67281.
33. Haeberle JR. Calponin decreases the
rate of cross-bridge cycling and increases
maximum force production by smooth
muscle myosin in an in vitro motility assay. J
Biol Chem 1994 ; 269 : 12424-31.

782

Domaine-1

Domaine-2

Domaine-3

Domaine-4

AEKQQRRFQPEKLREGRNI
1

52

145 153

163

292

Caltropine/CaM/TM
(site 1)

Sites de fixation (actine) et

d'inhibition (ATPase)

Sites de phosphorylation
(Ser 175/Thr 184)

Caltropine/CaM/TM
(site 2)

Domaine rgulateur

Figure 2. Diagramme illustrant (A), le domaine-4 de la caldesmone de gsier

de poulet (rsidus 659-756) avec localisation des sites de fixation de la calmoduline et de lactine et dinhibition de lactomyosine-ATPase. Le site de fixation
du domaine S2 de la myosine se situerait sur le domaine-1 (rsidus 1-170) ; (B),
la calponine du muscle lisse avec la localisation de ses dterminants structuraux et fonctionnels essentiels. Code une lettre des acides amins : A : Ala ;
C : Cys ; D : Asp ; E : Glu ; F : Phe ; G : Gly ; H : His ; I : Ile ; K : Lys ; L : Leu ; M : Met ;
N : Asn ; P : Pro ; Q : Gln ; R : Arg ; S : Ser ; T : Thr ; V ; Val ; W : Trp ; Y : Tyr.

la calponine de gsier de poulet a t

dtermine [16]. Les deux variantes
possdent en commun la partie
amino-terminale (rsidus 1-216) mais
diffrent par une dltion de
40 acides amins du ct carboxy-terminal de la forme . La calponine
prsente trs peu danalogie structurale avec la caldesmone. Elle possde
cependant une analogie forte (69 %
de rsidus conservs dont 49 % de
rsidus identiques) avec la SM22,
protine extraite du muscle lisse dont
la fonction est encore inconnue. Une
lgre analogie a t releve entre le
domaine rgulateur (rsidus 144-182)
de la calponine et la rgion inhibitrice
(rsidus 94-124) de la troponine I du
muscle stri ainsi quune similitude de
squence avec le segment 24-50 de la
protine Ras p21 qui renferme le site
de fixation de la protine activatrice
de la GTPase. La calponine muscu-

laire de 34 kDa a un point isolectrique de 9,9 qui lui donne un caractre basique contrairement au caractre acide (Pi = 5,2) de lisoforme
36 kDa que nous avions identifie
rcemment dans le systme nerveux
central des mammifres, les neurones
hippocampiques et les cellules gliales
en culture [17]. La forme basique et
la forme acide prsentes dans les tissus humains sont issues de deux gnes
diffrents localiss respectivement sur
les chromosomes 19p13.1-13.2 et
1p21-22 [18]. La transition des 2 isoformes a lieu au cours de la modulation phnotypique des cellules musculaires lisses vasculaires.
La molcule de calponine est flexible,
de forme ellipsode (16,2 x 2,6 nm),
capable de se lier fortement lactine
lisse, en labsence comme en prsence
de tropomyosine (Kd = 4,6 x 108 M),
induisant des changements conform/s n 6-7, vol. 13, juin-juillet 97

mationnels au niveau des protomres

dactine qui se dissocient alors des
ttes de myosine. Dans des conditions
physiologiques de force ionique
(> 110 mM) la stchiomtrie de
linteraction est de 1 calponine pour
2 monomres dactine. Au-del de
30 % de saturation en calponine, les
filaments dactine forment des faisceaux quelle que soit la force ionique
utilise. La prsence dATP diminue
fortement la constante dassociation
mais ne change pas la stchiomtrie.
La calponine, ajoute au complexe
actine-caldesmone, entre en comptition avec la caldesmone et provoque
son dplacement. Lanalyse des proprits du fragment chymotryptique
22 kDa amino-terminal de la calponine
et des recombinants sauvages substitus ou dlts ou encore des peptides
synthtiques couvrant la majeure partie de cette rgion a montr que le
domaine rgulateur de la protine se
situe au niveau dune squence minimale de 19 rsidus (Ala-145-Ile 163)
au sein de lune des deux rgions les
plus exposes de la molcule. Ce segment qui renferme les sites de reconnaissance de lactine, de la calmoduline, de la caltropine et de la
tropomyosine, est localis proximit
des rsidus Ser 175 et Thr 184, sites
majeurs de phosphorylation in vitro
par la PKC et/ou la calmodulinekinase II [9, 19] (figure 2B). On notera
aussi le rle crucial du motif VKYAEK*
dans le pouvoir inhibiteur de lactivit
ATPasique du complexe actomyosine
puisque sa dltion entrane labolition totale de cette fonction [20].
Au cours du dveloppement embryonnaire, la calponine et la caldesmone87 kDa sont synthtises relativement
tard par rapport aux autres protines
contractiles (desmine, tropomyosine,
-actine, myosine, MLCK et filamine)
constituant ainsi des marqueurs spcifiques de la diffrenciation structurale
du muscle lisse [21].

Mcanismes de rgulation
de lactivit contractile
du muscle lisse
Rgulation lie au filament pais
La contraction du muscle lisse (et des
cellules non musculaires) est rgle
au niveau du filament pais par la
* Val-Lys-Tyr-Ala-Glu-Lys.
m/s n 6-7, vol. 13, juin-juillet 97

phosphorylation spcifique et rversible des chanes lgres 20 kDa de la

myosine sous le contrle dune calciprotine, la calmoduline, et de deux
enzymes, une ATP-myosine phosphotransfrase, et une phosphatase [8, 9].
La calmoduline (CaM) est une protine acide ubiquitaire et multifonctionnelle de 16,7 kDa, extrmement
conserve au cours de lvolution et
dont limportance rside dans son
rle de relais essentiel du message calcique dans un trs grand nombre de
processus biologiques, dont la
contraction musculaire, la motilit cellulaire, le transport axonal, la maturation miotique, etc. Comme la troponine C, la calmoduline possde
plusieurs domaines en boucle fixant
dune faon ordonne et squentielle
lion calcium ncessaire sa fonction
de rgulation et dactivation. La fixation rversible du Ca2+ sur la molcule
induit un changement conformationnel de celle-ci, fait augmenter son
contenu en hlice et exposer une
rgion hydrophobe qui devient le site
privilgi dinteraction de plusieurs
protines cibles ayant une trs forte
affinit pour la calmoduline. La plus
importante de ces protines au niveau
du muscle lisse demeure la kinase des
chanes lgres de la myosine
(MLCK), une chane polypeptidique
unique de 110 kDa qui se lie mole
mole la calmoduline (Kd = 10 9 M).
Laugmentation transitoire de la
concentration de calcium cytosolique
(500-700 nM) active la calmoduline
qui sassocie la MLCK pour former
un complexe ternaire actif 4Ca2+-CaMMLCK. Lorsque la srine 19, situe
dans la partie amino-terminale allonge et flexible de chacune des deux
LC20, est phosphoryle par la kinase
active, la myosine subit, probablement travers le domaine carboxy-terminal de la chane lgre rgulatrice,
un changement structural au niveau
de la jonction tte-queue qui se transmet au site ATPasique et affecte certaines tapes cintiques de lacto-myosine ATPase. A ltat phosphoryl, la
myosine est active par lactine et
induit la contraction. Cette raction
est rversible car, en absence de Ca2+,
la MLCK devient compltement inactive et une phosphatase endogne
spcifique (MLCP), insensible au calcium, hydrolyse alors le groupement
phosphoryl attach la chane
lgre, entranant la dphosphoryla-

tion de la myosine et linhibition de

son activit. A ltat dphosphoryl, la
myosine se dtache de lactine et le
muscle se relche. Par ailleurs, la
MLCK peut elle-mme tre le substrat
dune raction de phosphorylation
qui peut seffectuer via la sous-unit
catalytique de la kinase dpendante
de lAMP cyclique, ou protine kinase
A. Lorsque la MLCK du muscle lisse
est phosphoryle, son affinit pour la
calmoduline chute, le complexe actif
4Ca2+-CaM-kinase ne peut plus se former et la cellule se relche. La stimulation adrnergique via les rcepteurs
peut donc rduire la rponse
contractile dans le muscle lisse. Ce
modle de rgulation, largement
admis, est illustr dans la figure 3.
Rgulation lie au filament fin
La phosphorylation exclusive des
sous-units LC20 de myosine est
certes un vnement initiateur capital
dans la rgulation de ltat contractile
du muscle lisse mais ce processus ne
peut lui seul couvrir et expliquer
toutes les proprits biochimiques et
physiologiques de la contraction de
ce muscle, et plus particulirement
laspect tonique prolong de celle-ci
aprs dphosphorylation de la myosine. Il semble de plus en plus vident
que la relaxation du muscle lisse est
plutt lie une perturbation de
linteraction de lactine avec la myosine et que le cycle contractionrelaxation ne peut tre le rsultat
exclusif dun mcanisme de phosphorylation-dphosphorylation des
chanes lgres de la myosine.
Compar la fixation directe du Ca2+
sur le systme tropomyosine/troponine du muscle stri o le passage de
linformation est instantan, le processus de phosphorylation dans le muscle
lisse est relativement lent. Il est gnralement compatible avec lintervalle
de temps (quelques centaines de millisecondes) ncessaire au dveloppement dune tension maximale peu
prs gale celle obtenue dans le
muscle squelettique. Bien que laffinit de lactine pour la myosine soit
presque la mme dans les deux types
musculaires, la vitesse dhydrolyse de
lATP (Vmax ) au cours de la formation
du complexe actomyosine est 2 3
fois plus faible dans le muscle lisse o
les fibres sont spcialises dans la
contraction lente et soutenue requise

783

tion
xcita

Stimula

euse

(nerv

tion (ho

Membrane plasmique

[Ca2+] intracellulaire
Calmoduline (CaM)

RFRENCES

4Ca2+

34. Kabsh W, Mannherz HG, Suck D, Pai

EF, Holms KC. Atomic structure of the
actin : DNase I complex. Nature 1990 ; 347 :
37-44.
35. Shirinsky VP, Biryukov KG, Hettasch JM,
Sellers JR. Inhibition of the relative movement of actin and myosin by caldesmon and
calponin. J Biol Chem 1992 ; 267 : 15886-92.

Relchement

37. Bogatcheva NV, Gusev NB. Interaction

of smooth muscle calponin with phospholipids. FEBS Lett 1995 ; 371 : 123-6.

Myosine dphosphoryle
non activable par l'actine

39. Matsumura F, Yamashiro S. Tropomyosin in cell transformation. Cancer Rev 1986 ;

6 : 21-39.
40. Takahashi K, Takagi M, Ohgami K,
Nakai M, Kojima A, Nadel-Ginard B, Shibata N. Inhibition of smooth muscle cell
migration and proliferation caused by transfection of the human calponin gene is associated with enhanced cell-matrix adhesion
and reduced PDGF responsiveness. Circulation 1993 ; 83 : I-174.
41. Romero F, Dusanter-Fourt, Fischer S. La
protine Vav, une mosaque de domaines
de signalisation. Med Sci 1997 ; 13 : 629-38.
42. Goetinck S, Waterston RH. The Caenorhabditis elegans muscle-affecting gene unc87 encodes a novel thin filament-associated
Protein J Cell Biol 1994 ; 127 : 79-93.
43. Rubbia L, Gabbiani G. Phnotype des
cellules musculaires lisses artrielles et athrosclrose. Med Sci 1989 ; 5 : 389-95.
44. Appelman HD, Helwig EB. Gastric epithelod leiomyoma and leiomyosarcoma
(Leiomyoblastoma). Cancer 1976 ; 38 : 708-28.
45. Borohn RJ, Levine EJ, Olson JO, Mendell JR. Gastric hypomotility in Duchenne
muscular dystrophy. N Engl J Med 1988 ;
319 : 15-8.
46. Corvol P. Lendothlium, plaque tournante de la vasomotricit et de la trophicit
de la paroi artrielle. Med Sci 1993 ; 9 : 1031-3.
47. Hamet P, Hadrava V, Kruppa U, Tremblay J. Facteurs de croissance et prolifration du muscle lisse vasculaire dans lhypertension et le diabte. Med Sci 1989 ; 5 :
654-61.

Adnylyl cyclase

Protine kinase A
inactive
MLCK non
R C
AMPc
ATP
phosphoryle
trs active
forte affinit
pour la CaM
R - AMPc
C Protine kinase A
active
Phosphorylation des LC20 #0
P MLCK phosphoryle
peu active
faible affinit
pour la CaM

4Ca2+

36. Nagumo H, Sakaruda K, Seto M, Sasaki

Y. Phosphorylation of calponin by PKC is
blocked by F-actin in vitro. Biochem Biophys
Res Commun 1994 ; 203 : 1502-7.

38. Novy RE, Lin JLC, Lin JJC. Characterization of cDNA clones encoding a human
fibroblast caldesmon isoform and analysis of
caldesmon expression in normal and transformed cells. J Biol Chem 1991 ; 266 : 1691724.

784

rmonale

Contraction

ATP

Relchement

P
P
Myosine phosphoryle
activable par l'actine
ADP + Pi

Myosine agrge

MLCP (active en absence de Ca2+)

Figure 3. Reprsentation schmatique du mcanisme de rgulation dpendante de la myosine de la contraction-relaxation du muscle lisse. La contraction et la relaxation du muscle lisse dpendent de la phosphorylation de la
chane lgre de la myosine. Celle-ci est rgle par une kinase spcifique
MLCK (myosin light chain kinase) et une phosphatase spcifique MLCP
(myosin light chain phosphatase). Laugmentation transitoire de la concentration de calcium cytosolique active la calmoduline qui sassocie la MLCK
pour former un complexe ternaire actif 4Ca2+-CaM-MLCK (situation 1) : la
chane lgre de la myosine sera phosphoryle et la fibre musculaire se
contractera. Lactivit de la MLCK peut, par ailleurs, tre inhibe par sa
propre phosphorylation sous leffet de la protine kinase A active, par
exemple, par la stimulation adrnergique (situation 2) : la MLCK ne peut plus
former de complexe avec Ca2+ et calmoduline. La dphosphorylation de la
myosine par la MLCP ne sera pas suivie dune nouvelle phosphorylation.
et sont respectivement les sous-units rgulatrice et catalytique de la protine kinase active par lAMP cyclique.

par leur fonction physiologique. En

effet, les viscres tels que lintestin ou
la vessie sont appels maintenir
constant leur tonus musculaire en
rponse la tension paritale que leur
impose le contenu des cavits quils
entourent. Cela se fait en consommant un minimum dnergie, nettement infrieure pour une mme tension dans le muscle lisse que celle
requise par le muscle squelettique.
Pour expliquer le maintien dun
niveau assez lev de production de
force au cours de la baisse de phosphorylation de la myosine, des mcanismes de rgulation supplmentaires
plus directs et ayant une trs forte sensibilit au calcium ont t postuls. Ils

seraient responsables du contrle de

la formation des cross-bridges dphosphoryls, caractriss par un faible
taux de cyclage et dnomms latchbridges. Ce phnomne est mcaniquement similaire ltat de catch quon
observe dans le muscle stri (dit cliquet) des mollusques et qui permet
la coquille de ces invertbrs de se
maintenir ferme avec une dpense
infime dnergie. Les latch-bridges sont
des ttes de pont faiblement verrouilles qui, en se dtachant trs lentement de lactine, conserveraient suffisamment dnergie pour maintenir
une force contractile leve en dpit
dune baisse la fois de la concentration du calcium cytosolique, de la
m/s n 6-7, vol. 13, juin-juillet 97

phosphorylation de la myosine, de la
vitesse de cyclage du cross-bridge et de
la consommation dnergie [22].
Lorsque le Ca2+ libre dans le cytosol
retrouve son niveau normalement bas
correspondant ltat de repos (120240 nM) et que la myosine dphosphoryle arrive se dissocier totalement de lactine, le muscle se relche
compltement. La formation du latchbridge serait donc une phase intermdiaire cl du systme contractile lisse,
rgle par des protines dpendantes
du Ca2+capables de moduler les interactions actine-myosine indpendamment de la phosphorylation de la
chane lgre de la myosine LC20.
Parmi les nouvelles protines sensibles au Ca2+ et physiquement associes au filament fin naturel, la caldesmone et la calponine sont, dans ltat
actuel de nos connaissances, les deux

candidats potentiels pour un tel processus de rgulation.

La caldesmone
Histologiquement la caldesmone a
t localise exclusivement dans le
domaine de lactine et de la myosine
et sa fonction serait dassurer la rgulation du systme actomyosine du
muscle lisse en inhibant lactivit MgATPasique du complexe actomyosine
sans modifier le niveau de phosphorylation des chanes lgres de la myosine. Toutefois son mode daction
inhibiteur nest pas entirement clair.
Pour certains, la caldesmone agirait
en rduisant, par bloquage strique,
linteraction de lactine avec la myosine-ATP et la myosine-ADP.Pi, et
serait donc capable de dplacer de
manire comptitive le complexe de
liaison faible myosine-ATP de lactine

Filament d'actine

tape d'inhibition
par la Caldesmone

en prsence ou en absence de tropomyosine [23] ; pour dautres, au

contraire, la caldesmone altrerait,
en prsence de tropomyosine, la
vitesse de certaines tapes cintiques
de lactomyosine-ATPase aprs la liaison de la tte globulaire de myosine
lactine [24]. Son action au niveau de
ltape de formation de lADP-Pi
semble en effet diminuer la vitesse de
lhydrolyse de lATP (Vmax), et donc la
libration du phosphate inorganique,
sans affaiblir la fixation de la myosine
lactine (KATPase). Cest dailleurs par
un mcanisme similaire qui affecte
ltat catalytique de la raction que le
systme troponine-tropomyosine
assure la rgulation de la contraction
des muscles squelettique et cardiaque
chez les vertbrs (figure 4).
Linhibition de lactomyosine-ATPase
par la caldesmone peut tre leve

Interaction faible

(K ATPase)

S1 de myosine

ADP
Pi

ADP
Pi

Complexe ATP.Mg
NH2
C

et
O-

O-

P
O

OO

OO

P
O

O-

Contraction soutenue

ATP

N
OCH2

O
H

OH

Adnine

Ribose

OH

HO

HO

Adnine

(V max)

Dtachement
rapide

Bilan ractionnel de
son hydrolyse par la
myosine

Mg2+

OO

P
O
(ATP)

OO

Myosine
O- + H

OH

Ribose

O-

P
O

ATP

ADP

OO

P
O
(ADP)

tape d'inhibition par le

complexe TM-TN (muscle stri),
par la Calponine et par la
Caldesmone (muscle lisse)

OO- + H O

Pi (production de force)

O- + H

O
(Pi)

Interaction forte

ADP

Figure 4. Cycle gnral dhydrolyse de lATP-Mg par la myosine et tapes particulires contrles par les protines
associes au filament fin dans le muscle lisse. tape 1 : interaction de lintermdiaire S1-ADP.Pi avec lactine et formation du complexe de liaison faible Actine-S1-ADP.Pi. tape 2 : conversion du complexe faiblement li Actine-S1ADP.Pi en complexe fortement li Actine-S1-ADP ; la libration du Pi est couple la production de la force contractile. Cette tape peut tre inhibe par le complexe tropomyosine-troponine dans le muscle stri et par la calponine
et la caldesmone dans le muscle lisse [24]. tape 3 : libration de lADP et liaison de lATP pour produire le complexe
transitoire Actine-S1-ATP. tape 4 : dissociation du complexe Actine-S1 et retour ltape 1. La caldesmone, par son
aptitude se lier la fois lactine et la queue fibrillaire de la myosine, empcherait cette dissociation et formerait
ainsi une tension soutenue de la fibre sans dpense dnergie [23]. KATPase : constante daffinit de la myosine pour
lactine. Encadr : raction dhydrolyse de lATP par la myosine.
m/s n 6-7, vol. 13, juin-juillet 97

785

786

aprs association de celle-ci la calmoduline sature en calcium. Cette

ractivation ATPasique peut avoir
lieu avant mme que le complexe
actine-caldesmone ne soit totalement
dissoci. La prsence, ct du site
rgulateur situ sur le domaine-4 de
la caldesmone, dun deuxime site de
plus faible affinit, permet la liaison
dune seconde molcule de calmoduline, favorisant la dissociation du
complexe actine-caldesmone [14].
On remarquera, cependant, que la
forte quantit de calmoduline ncessaire pour dtacher compltement la
caldesmone de lacto-tropomyosine
nest pas physiologique (excs
molaire de 25 fois) et que dautres
protines dpendantes du Ca2+ pourraient tre plus efficaces dans la leve
ou la perturbation de laction inhibitrice de la caldesmone. Ces protines
peuvent agir, soit directement en se
fixant sur la caldesmone, soit indirectement en induisant lagrgation des
filaments dactine, rprimant ainsi
leffet inhibiteur de la caldesmone.
Parmi ces calciprotines, on retrouve
la protine S-100 et la caltropine.
Cette dernire (10 mg/350 g de tissu
frais) est un dimre de masse molculaire 21 kDa ltat natif, capable de
fixer 2 moles de Ca2+ par sous-unit.
La caltropine se lie mole mole la
caldesmone, dans une rgion proche
de la Cys-580, affecte sa conformation
et affaiblit fortement son interaction
avec la myosine et lactine, restaurant
la totalit de lactivit actomyosine
ATPasique. Laffinit de la caltropine
pour la caldesmone (Kd = 2 x 107 M)
est au moins 10 fois suprieure celle
de la calmoduline et le complexe
Ca2+-calmoduline/caldesmone peut,
cet gard, perdre toute signification
biologique [25]. Lactivit inhibitrice
de la caldesmone peut aussi tre abolie par sa propre phosphorylation au
moyen de diverses kinases cellulaires
(figure 5). En effet, in vitro, la caldesmone isole constitue un excellent
substrat pour les protines kinases C
et A, la Ca2+-CaM kinase II, la casine
kinase II, la MAPK (mitogen-activated
protein kinase) et la p34 cdc2 kinase
[15, 26]. La casine kinase II a t
aussi identifie comme une kinase
endogne majeure de la caldesmone
aprs stimulation de laorte de mouton par divers antagonistes (phorbol
dibutyrate, par exemple). Lincorporation du phosphate se fait de prf-

rence sur des squences Ser/Thr-Pro

du domaine carboxy-terminal
proches des sites de lactine et de la
calmoduline confins dans la
squence Asn 675-Trp 722 [14]. La
phosphorylation de la caldesmone
par la PKC entrane une baisse de
laffinit de celle-ci pour lactine et la
leve de linhibition de lactivit actomyosine-ATPase. Quant la phosphorylation catalyse par la casine
kinase II, elle seffectue sur la Ser 73
et la Thr 83 de lextrmit amino-terminale de la molcule proche du site
de liaison de la myosine. La phosphorylation de la caldesmone par la
casine kinase II ne dissocie pas la
caldesmone de lactine mais abolit
son interaction avec la myosine, permettant la caldesmone de moduler
sa capacit de pontage des filaments
fins et pais. Le S2 de la myosine et la
rgion 1-12 de lactine sont des sites
privilgis de fixation de la caldesmone et linhibition de lactomyosine-ATPase pourrait bien sexpliquer
par le blocage de laccs direct de la

myosine la rgion amino-terminale

de lactine dont les charges ngatives
semblent indispensables lactivation
de la myosine Mg-ATPase. De plus, la
capacit de la caldesmone dassembler et de stabiliser des filaments de
myosine dphosphoryle en prsence
de Mg-ATP [27] qui expliquerait la
dtection possible de la forme 6S
dans le muscle au repos, ou de ponter simultanment les filaments fins
(actine) aux filaments pais (myosine) via ses deux extrmits aminoet carboxy-terminales, devrait jouer
un rle essentiel dans ltat de latch
en imposant aux lments filamenteux de la cellule une orientation spatiale particulire conduisant plus
defficacit dans lactivit contractile
du muscle lisse en rponse une stimulation hormonale ou nerveuse.
La signification biologique de linteraction caldesmone-tropomyosine est
toujours mal comprise. Des tudes
effectues in vitro et in vivo ont montr que ce complexe augmente laffinit de chacune des deux compo-

Esters de phorbol

Protine kinase C

MAPK active

Protine kinase II
dpendante de Ca2+ - CaM
Protine kinase
dpendante de l'AMPc
Casine kinase II
p34 cdc2 kinase

Phosphorylation

TM

TM

CaM (ou Caltropine)

Ca2+/CaM (ou Caltropine)

Ca2+ > 10-6M

ou phosphorylation
A

CaD
(et/ou CaP)

A
Ca2+ < 10-6M
ou dphosphorylation

Myosine
inactive

Myosine
active

Relaxation

Contraction

CaD
(et/ou CaP)

Figure 5. Mcanisme de rgulation de la contraction du muscle lisse par les

protines associes au filament fin dactine. La caldesmone assure la rgulation du systme actomyosine du muscle lisse en inhibant lactivit MgATPasique du complexe actomyosine ; cette inhibition est leve aprs son
association la calmoduline (ou la caltropine) sature en calcium. Elle peut
aussi tre abolie par la phosphorylation de la caldesmone par diverses
kinases cellulaires. La MAPK (protine kinase active par mitogne) a t
identifie dans le tissu musculaire lisse et son activation via une cascade
denzymes induirait la phosphorylation in vivo de la caldesmone. CaM : calmoduline ; CaD : caldesmone ; CaP : calponine ; TM : tropomyosine ; A : actine.
m/s n 6-7, vol. 13, juin-juillet 97

santes pour lactine, assignant aux

microfilaments une plus grande protection contre leffet de fragmentation possible des protines spcifiques
telles que la gelsoline dont nous
avions montr la prsence en quantit
importante dans le muscle lisse
[28, 29]. La stabilisation renforce des
microfilaments observe lors de la surexpression de la caldesmone dans les
fibroblastes confirme le rle structural
que pourrait avoir la caldesmone dans
les cellules musculaires et non musculaires [30]. Il a t suggr quin vitro
la tropomyosine influence nettement
la fonction de la caldesmone, probablement en favorisant, partir dun
site fort de contact entre lactine et la
caldesmone, la propagation du signal
inhibiteur de celle-ci le long du filament fin travers plusieurs monomres dactine. La reconstruction tridimensionnelle des filaments fins du
muscle lisse a en effet montr que la
prsence de caldesmone peut affecter
la position de la tropomyosine et son
mouvement par rapport lactine,
expliquant sa capacit de moduler
lactomyosine-ATPase et de rgler
ltat contractile du muscle autrement
que par simple encombrement strique [31]. Ce changement de conformation peut tre bloqu et linhibition leve par la fixation dune
quantit stchiomtrique de Ca2+CaM. Cependant, la neutralisation
complte de laction de la caldesmone sur lactine ncessite un excs
molaire trs lev de calmoduline
moins que dautres facteurs protiques, filamine et/ou gelsoline, puissent contribuer la potentialisation in
vivo de leffet de la Ca2+-CaM dans la
dissociation du complexe et la leve
totale de linhibition [32].
La calponine
Comme la caldesmone, la calponine
est capable dinhiber en solution lactivit Mg-ATPasique de lactomyosine
du muscle lisse, mais aussi dinduire
des changements conformationnels au
sein de lactine F (actine filamenteuse) et de stopper, au cours dessais
de motilit effectus in vitro, le mouvement des filaments dactine sur la
myosine phosphoryle [33]. Linteraction de la calponine avec le segment
carboxy-terminal (rsidus 326-355) de
lactine rvle par pontage chimique
la carbodiimide suggre une liaison
spcifique du domaine inhibiteur de
m/s n 6-7, vol. 13, juin-juillet 97

la calponine (rsidus 145-163) cette

rgion particulire de lactine o la
squence Pro 332-Glu 334 a t prsente comme un point de contact
majeur dans linterface actine-tte de
myosine [4, 19]. Lassociation hydrophobe de la calponine avec cette
rgion rendrait bien compte de son
aptitude dissocier le complexe rigor
actine-S1 et inhiber lactomyosineATPase en bloquant ltape cintique
de transition du complexe faible
actine-S1-ADP.Pi vers le complexe fort
actine-S1-ADP. Le site dancrage de la
calponine sur la portion carboxy-terminale de lactine [19] est trs loign
dans la squence de lactine de celui
de la caldesmone : celui-ci se situe sur
la partie amino-terminale de lactine
[13], et reprsente aussi le site de
reconnaissance des complexes intermdiaires S1-nuclotides [4]. Ces
deux sites sont nanmoins spatialement trs proches lun de lautre au vu
de la structure tridimentionnelle de la
molcule dactine [34]. A linverse de
la caldesmone dont laction inhibitrice
est gradue (car dpendante de la
concentration de la caldesmone) et
renforce par la prsence de la tropomyosine (il faut 5 10 fois plus de caldesmone en absence de tropomyosine), la calponine semble agir sur le
mouvement de glisse du filament
dactine, dune faon tout ou rien
et indpendamment de la tropomyosine, probablement en inhibant une
tape dcisive au sein du cycle ATPasique de la myosine [35].
La calponine ne fixe pas directement
le calcium, mais leffet inhibiteur
quelle exerce sur lactomyosineATPase peut tre lev comme dans le
cas de la caldesmone par un ajout
substantiel de Ca2+-CaM ou dune
quantit stchiomtrique de caltropine [19, 25]. La phosphorylation
rapide de la calponine observe au
cours de la contraction du muscle de
la trache ou de lestomac, marque
par voie mtabolique au 32Pii et stimule par le carbachol ou lendothline-1, suggre la prsence dans ces
tissus dun systme de rgulation
longtemps controvers, celui de la
phosphorylation/dphosphorylation
in vivo de la calponine. Une protine
phosphatase endogne du type 2A
qui dphosphoryle rapidement et
spcifiquement la calponine a mme
t purifie [9]. Cependant, Nagumo
et al. ont dmontr rcemment que

la prsence de lactine F empche la

phosphorylation in vitro de la calponine [36]. Il est donc difficile dimaginer quin vivo la calponine se laisse
phosphoryler avant sa dissociation
pralable de lactine. La question de
la signification physiologique de la
phosphorylation de la calponine
demeure donc pose.
Enfin, des auteurs avaient suggr la
prsence dun mcanisme supplmentaire de contrle de la phase
soutenue de la contraction artrielle
li lactivation de la PKC suivie de la
phosphorylation de plusieurs protines appartenant au domaine cytosquelettique filamine-actine-desmine . Lorganisation structurale du
rseau filamentaire intermdiaire
rend compte des tensions mcaniques exerces par les mouvements
tissulaires et permet de maintenir la
cohsion des cellules musculaires au
cours de la contraction. La phosphorylation in vitro de la desmine provoque le dsassemblage des filaments
intermdiaires et lon postule quin
vivo ce phnomne de dissociation
serait responsable de grands changements dans la configuration de ces
structures filamentaires, produisant
ainsi la tension leve qui se manifeste au cours de la contraction prolonge du muscle artriel au prix
dune dpense dnergie minime. Par
ailleurs, la localisation de la calponine,
la fois dans le domaine contractile
et, une concentration plus leve
dans le domaine cytosquelettique de la
cellule, favoriserait lintervention de
cette protine dans le mcanisme
dpendant du Ca2+ de la glation in
situ des filaments dactine par la filamine. En outre, linteraction in vitro
de la desmine avec la calponine a t
observe (nos travaux en cours et communication personnelle de Gusev
NB). Ce rle modulateur de la viscolasticit du cytosquelette serait plus
difficile pour la caldesmone dont la
distribution est limite au seul
domaine contractile, dpourvu de filamine et de desmine [2, 3]. Plus que la
caldesmone, la calponine semble donc
pouvoir exercer un double rle : structural au niveau de la rorganisation du
cytosquelette, notamment dans les tissus non musculaires, et fonctionnel,
dans le maintien de la tension observe in vivo au cours de la contraction
isotonique du muscle lisse. Enfin, la
calponine arbore au niveau de sa

787

rgion amino-terminale de 13 kDa un

site fort dinteraction avec les phospholipides [37]. Toutes ces interactions renforcent lide dune participation active de la protine dans la
perturbation de la bicouche lipidique,
la transmission du signal et lancrage
des filaments dactine au niveau de la
membrane cellulaire, au mme titre
que dautres protines associes
lactine telles que l-actinine, la vinculine et la filamine.

Quelques aspects
de la pathologie
du muscle lisse

788

Laltration du systme filamentaire

travers des changements dans
lexpression, lorganisation ou lactivation de protines contractiles qui le
composent (caldesmone, tropomyosine, calponine, desmine ou lisoforme de lactine lisse) constitue un
aspect important du processus de
transformation dans une cellule.
Laction cooprative stabilisatrice et
protectrice de la caldesmone et de la
tropomyosine vis--vis du filament fin
dactine, par exemple, est considre
comme critique pour lintgrit structurale du cytosquelette et la chute
simultane du taux de synthse de ces
deux protines dans des cellules cancreuses provoquerait la rorganisation des microfilaments observe au
cours de la transformation cellulaire
[38, 39]. De plus, Takahashi et al. [40]
avaient dcrit rcemment la calponine
comme un important facteur de
contrle dans la prolifration cellulaire. En effet, la transfection du gne
de la calponine dans des cellules artrielles en culture, inhibe remarquablement leur hyperplasie. Cette proprit
dun gne suppresseur de tumeur
serait lie lanalogie de squence qui
existe entre la partie fonctionnelle
amino-terminale de la calponine et
une rgion dune protine code par
loncogne Vav [41]. Les rsultats rapports par ces auteurs soulignent
quune rduction dans lexpression de
la calponine serait un vnement-cl
dans le dbut et la progression de
lathrosclrose et que la transfection
gnique de la calponine humaine
pourrait se rvler un moyen thrapeutique efficace contre la restnose.
Par ailleurs, la mutation de la protine
unc-87 de C. elegans qui possde cinq
copies dun motif rptitif conserv de

30 acides amins de la rgion carboxyterminale de lisoforme -calponine

humaine engendre une paralysie musculaire chez lanimal [42]. Les activits prolifratives, migratoires, synthtiques et de diffrenciation des
cellules musculaires lisses, ainsi que la
dsorganisation de larchitecture
cytosquelettique de ces cellules, peuvent tre lorigine de plusieurs affections plus ou moins graves telles que
la formation des plaques athromateuses, les anmies hmolytiques ou
encore les tumeurs bnignes (hyperplasie myode, liomyomes) ou
malignes (liomyosarcomes) quon
rencontre gnralement au niveau de
lestomac, du larynx et de lutrus
[43, 44]. Les troubles de la motricit
gastro-intestinale relevs chez des
enfants atteints de myopathies de
Duchenne ou de Becker se manifestent par le ralentissement du transit
d probablement labsence de la
dystrophine et/ou une perturbation
dans lagencement et la stabilisation
des glycoprotines associes situes au
niveau des caveolaes et qui seraient
impliques dans le renforcement de la
membrane plasmique et le contrle
de lhomostasie calcique [45].
Labsence de dystrophine dans les
vaisseaux sanguins denfants myopathes ne semble pas, en revanche,
entraner de troubles vasculaires car
lutrophine, plus abondante que la
dystrophine dans ces tissus ltat normal, jouerait un rle compensatoire
dans le maintien de lintgrit membranaire et dventuels phnomnes
de transmission de signaux. Dans un
tat physiologique normal, la tonicit
vasculaire et la trophicit de la paroi
artrielle sont modules par des substances vasoactives relaxantes
(monoxyde dazote, par exemple) ou
contractantes (endothline, par
exemple) [46]. Cependant, le mcanisme de latch contraction qui caractrise cette tonicit ltat de repos
musculaire impliquerait une multitude de protines dpendantes du
Ca2+. Cela explique leffort considrable consenti ces dernires annes
pour tenter de comprendre ce nouveau systme de rgulation musculaire
qui ncessite, dans un premier temps,
lidentification et lanalyse des diffrents constituants myogniques potentiellement responsables du remaniement fibreux de la paroi artrielle et
de son hypertrophie. Ainsi, aux fac-

teurs gntiques et de croissance qui

contribuent activement la multiplication anormale des cellules du muscle
lisse vasculaire et au dsquilibre de
lhomostasie de leur paroi [47], doit
sajouter leffet des composants protiques de structure qui, une fois
dstabiliss, pour quelque raison que
ce soit, induisent un dsordre cytosquelettique qui pourrait tre fatal.
La diversit histologique du muscle
lisse, labsence de troponines (protines rgulatrices-cls dans le muscle
stri) et la complexit du mode
daction des vagues calciques transmembranaires en relation avec des
protines intracellulaires cibles font
que malgr des progrs substantiels
enregistrs ces dernires annes, tant
sur le plan de la biochimie que de la
biologie molculaire et de la gntique des principales protines du systme contractile musculaire, on commence peine dchiffrer le code
dont sest dot ce tissu pour exprimer
et rgler ses performances mcaniques. La dissection de la dynamique
structurale et fonctionnelle des macromolcules biologiques seules ou en
interactions avec dautres facteurs et la
dtermination de leur rle physiologique passe imprativement par la
mise en uvre dune varit de techniques complmentaires sophistiques
englobant la cristallographie, la spectroscopie RMN haut champ, la synthse peptidique, la modlisation
molculaire, la mutagense dirige et
la transgnse. Cette dernire reprsente lun des dfis majeurs de
demain auquel nous nous efforons
de rpondre ds prsent dans notre
laboratoire. Comprendre les mcanismes fondamentaux qui rgissent la
contractilit musculaire et ses altrations pourrait terme permettre llaboration de thrapeutiques originales
dun grand nombre de maladies
humaines : asthme, diabte, hypertention, athrosclrose, infarctus...

Remerciements
Lauteur remercie tous ses amis et collaborateurs de lquipe transduction dnergie et
plus particulirement R. Kassab, P. Travo et
J. Demaille pour les critiques et suggestions
apportes au cours de la rdaction du manuscrit. Les travaux mentionns dans cette revue
ont bnfici du soutien financier du Cnrs, de
lInserm et de lAFM (Association franaise
contre les myopathies).
m/s n 6-7, vol. 13, juin-juillet 97

Summary
Contractile events in smooth muscle cells
Muscle contraction is driven by a cyclical interaction between the globular
head domain of myosin and the actin filament, coupled to the breakdown
of ATP. In vertebrate smooth muscle, it is generally accepted that actomyosin ATPase and consequently tension generation are regulated primarily by
the reversible phosphorylation of the 20 kDa myosin light chain. However,
current studies have suggested that the simple on/off system based on myosin phosphorylation is not sufficient to explain all the aspects of the
contractile activity of smooth muscle, specifically as concerns the tonic responses in the slow cycling, termed latch-bridge , characteristic of sustained isometric force production. Today, it is thought that caldesmon and
calponin, two thin-filament proteins discovered in the 1980s, are the two
major elements required in the mechanism of Ca2+-dependent tension
maintenance without detectable elevation in phosphorylation, especially in
vascular smooth tissue. Both of these proteins can bind to all the major
proteins that make up the actomyosin system (actin, myosin, tropomyosin,
etc.) and inhibit the actin-activated Mg-ATPase activity of myosin. This inhibitory action can be reversed upon their interaction with EF-hand Cadependent proteins such as calmodulin, caltropin and S-l00, or through
changes in their phosphorylation state. Further, investigations of the properties of caldesmon and calponin in vitro and in vivo have led to the
conclusion that these proteins are likely to be involved in an actin-linked
Ca2+-sensitive secondary regulatory process operating in the smooth muscle
contractility mechanism, independent of the well established myosin phosphorylation system. The interplay between the thick and thin filamentbased regulatory systems may explain some of the properties unique to
smooth muscle cells, in particular the phenomena of the latch state.

Q
uelle mdecine demain,
et pour quels malades ?
Que penser des progrs rcents,
par exemple dans le domaine
de la mdecine prdictive,
des thrapies gniques,
des interventions sur lembryon
humain ? Quelles en seront
les consquences pour lhomme
et la socit ? Pourra-t-on
longtemps rsister la tentation
de leugnisme ? Autant
de questions cruciales
sur lesquelles Axel Kahn
livre ses rflexions dhomme
de science critique.

Bayard ditions
Sciences Mdecine
ISBN 2.227.13700.1
125 FF
m/s n 6-7, vol. 13, juin-juillet 97

Mdecin gnticien,
directeur de recherche
lInserm, Axel Kahn est
membre du Comit national
consultatif dthique et,
depuis plus de dix ans,
rdacteur en chef de la revue
mdecine/sciences.
Dominique Rousset est
journaliste et anime
en particulier lmission
Enjeux internationaux
sur France Culture.

789