UNIVERSITE D’ANTANANARIO

FACULTE DES SCIENCES

DEPARTEMENT DE PHYSIOLOGIE
ANIMALE ET DE PHARMACOLOGIE

Laboratoire de Pharmacologie Générale,

de Pharmacocinétique et de Cosmétologie

LPGPC
MEMOIRE
Pour l’obtention du
DIPLOME D’ETUDES APPROFONDIES

OPTION : PHARMACOLOGIE

Évaluation DE L’Activité
ANTIULCEREUSE DE HMA-FHM/
VHM / 119002/ M12 CHEZ LE RAT

Présenté par :

RAMAHANDRINORO Toky Victoire

Maitre - ès – Sciences

Soutenu publiquement le 23 Avril 2014

Devant les JURY composé de :

Président : Mme RANDRIANAVONY Patricia Maitre de conférences

Rapporteur : Mr RANDIMBIVOLOLONA Fanantenanirainy Professeur Titulaire

Examinateurs : Mr RANDRIANTSOA Adolphe Professeur Titulaire

Mr RAFATRO Herintsoa Professeur

Nom : RAMAHANDRINORO
Prénoms : Toky Victoire
Date et lieu de naissance : 03 juin 1989 à Soavinandriana
Adresse : lot IPT 256B Antanety Bemasoandro Itaosy
Téléphone : +(261)33 06 087 34
Adresse électronique : vickaela@gmail.com

Évaluation DE L’Activité
ANTIULCEREUSE DE HMA-FHM/
VHM / 119002/ M12 CHEZ LE RAT

Promotion : 2012-2013
Option : PHARMACOLOGIE
Rapporteur : Professeur RANDIMBIVOLOLONA Fanantenanirainy
Laboratoire : Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique
et de Cosmétologie
Département de Physiologie Animale et de Pharmacologie
B.P. : 8357
E-mail : frandimbi@gmail.com
Faculté des Sciences
Université d’Antananarivo
 REMERCIEMENTS

En guise de ce mémoire de fin d’études, je tiens à exprimer ma

profonde gratitude et mes sincères remerciements à :

Monsieur le Professeur RANDIMBIVOLOLONA Fanantenanirainy,

pour son accueil dans son laboratoire et ses consignes astucieux dans

ce premier pas de recherches. Merci pour les encadrements.

Mes respects.

Madame le Docteur RANDRIANAVONY Patricia, pour les

encadrements, les conseils et la sympathie qu’elle m’a accordée. Mille

mercis ! Soyez rassurée, vos engagements ne seront pas une entreprise

vaine.

Monsieur le Professeur RANDRIANTSOA Adolphe, d’avoir accepté

comme examinateur et juge de ce travail. Merci également pour les

savoirs que vous m’avez transmise.

Monsieur le Professeur RAFATRO HERINTSOA, d’être présent et

disponible pour juger ce mémoire malgré vos occupations.

Monsieur RAMAHAROBANDRO Norbert qui nous a autorisés à

effectuer nos études in vitro à la chaîne dans la salle de Travaux

Pratiques auquel il a été responsable.

Monsieur ALAIN LOISEAU, directeur du SOTRAMEX, pour nous

avoir fourni HMA.

Monsieur le Docteur RANDRIA José Narcisse qui nous a empruntés

certains matériels nécessaire à l’élaboration de cette étude.

Tous les enseignants qui nous ont transmis leurs savoirs et leurs

connaissances et ont contribué à notre formation.

L’équipe de la promotion ILO qui m’a aidée à avoir une vision

large au cours de l’élaboration du présent travail.

Je présente également ma reconnaissance envers mes parents et ma

famille de m’avoir soutenue tout le long de mon cursus.

A tous ceux qui ont contribué de près ou de loin à la réalisation de ce

travail, mes respectueuses considérations.

UN GRAND MERCI A TOUS !

 TABLE DES MATIERES
TABLE DES MATIERES .......................................................................................................... i

LISTE DES TABLEAUX......................................................................................................... iii

LISTE DES FIGURES ............................................................................................................. iv

SIGLES ET ABREVIATIONS.................................................................................................. v

INTRODUCTION ..................................................................................................................... 1

MATERIELS ET METHODES ................................................................................................ 4

I-ETUDE CHIMIQUE ........................................................................................................... 4

1) Le produit testé .............................................................................................................. 4

2) Criblage phytochimique: ............................................................................................... 4

II-ETUDE BIOLOGIQUE ..................................................................................................... 6

1) Animaux d’expériences : ............................................................................................... 6

2) Mode d’administration des produits .............................................................................. 6

3) Etudes in vivo ................................................................................................................ 6

a) Etudes préliminaires .................................................................................................. 6

b) Etude de l’effet antisécrétoire de HMA ..................................................................... 7

c) Etude de l’effet mucoprotecteur de HMA ................................................................. 8

d) Etude de l’effet cicatrisant de HMA sur l’ulcère au niveau de la muqueuse

gastrique ......................................................................................................................... 9

4) Etudes in vitro.............................................................................................................. 10

a) Etude de l’effet de HMA vis-à-vis de l’acétylcholine ............................................. 11

b) Etude de l’effet de HMA vis-à-vis de l’histamine ................................................... 13

5) Recherche des effets indésirables ................................................................................ 13

6) Analyses statistiques .................................................................................................... 14

RESULTATS ........................................................................................................................... 15

I PARTIE CHIMIQUE ....................................................................................................... 15

i
 1) Les familles chimiques contenues dans HMA ............................................................ 15

II PARTIE BIOLOGIQUE ................................................................................................. 15

1) Modèles in vivo ........................................................................................................... 15

a) Effet antisécrétoire de HMA .................................................................................... 15

b) Effet mucoprotecteur de HMA ................................................................................ 16

c) Effet cicatrisant de HMA-FHM/VHM/119002/M12 ............................................... 19

2) Modèles in vitro ........................................................................................................... 22

a) Effet de HMA vis-à- vis de l’Acétylcholine ............................................................ 22

b) Effet de HMA-FHM/VHM/119002/M12 vis-à- vis de l’Histamine ....................... 24

3) Les effets indésirables ................................................................................................. 26

DISCUSSION .......................................................................................................................... 27

CONCLUSION .......................................................................................................................... 30

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES ...................................................................................... 31

ii
 LISTE DES TABLEAUX

Tableau I : Méthodes utilisées lors du criblage phytochimique .................................... 5

Tableau II : Résumé des volumes et des concentrations d’acétylcholine injectés dans

la cuve à organe. .......................................................................................................... 12

Tableau III : Les familles chimiques contenues dans HMA ....................................... 15

Tableau IV: Protection de la muqueuse face aux dommages induits par l’éthanol
absolu ........................................................................................................................... 19

Tableau V : CE50 et effet maximal de l’Acétylcholine en absence ou en présence de

HMA ............................................................................................................................ 23

Tableau VI: CE50 de l’Histamine et Emax en absence ou en présence de différentes

concentrations de HMA........................................................................................................25

iii
 LISTE DES FIGURES

Figure 1: Libération des neuromédiateurs responsables de la sécrétion de H+.............. 2

Figure 2 : : Appareil de mesure de pH d’une solution ................................................... 8

Figure 3 : Kymographe utilisé pour les études in vitro :............................................. 11

Figure 4 : Variation du pH du suc gastrique des animaux issus de different lot ........ 16

Figure 5 : Estomac d’un rat normal (non exposé à l’alcool) et hyperhémies au niveau
de la muqueuse gastrique des rats issus des différents lots.......................................... 17

Figure 6: Variation de la surface des hyperhémies dans la muqueuse gastriques des

animaux des différents lots. ......................................................................................... 18

Figure 7 : Evolution de la cicatrisation de lésions au niveau de la muqueuse gastrique

des rats issus des différents lots.. ................................................................................. 20

Figure 8: Variation de la cicatrisation des lésions de la muqueuse gastrique des

animaux des différents lots .......................................................................................... 21

Figure 9 : Contraction du fundus isolé provoquée par l’acétylcholine en absence ou en

présence de HMA ........................................................................................................ 23

Figure 10: Contraction du fundus isolé provoquée par l’histamine en présence ou en

absence de HMA .......................................................................................................... 25

iv
 SIGLES ET ABREVIATIONS

Ach : Acétylcholine

AINS : Anti-inflammatoire Non Stéroïdien

CaCl2 : Chlorure de Calcium

CE50 : Concentration efficace de l’agent spasmogène donnant la moitié de l’effet

maximal

Coll. : Collaborateurs

Emax : Effet maximal

e.s.m : Erreur standard à la moyenne

g : Gramme

h : Heure

H+ : Ion hydronium

His : Histamine

HCl : Acide chlorhydrique

K+ : Ion potassium

KCl : Chlorure de potassium

LPGPC : Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique

et de Cosmétologie

M : Concentration molaire

mg/ml : Milligramme par millilitre

mg/kg : Milligramme par kilogramme

min : Minute

MgCl2 : Chlorure de Magnésium

v
mm2 : Millimètre carré

n : Nombre d’animaux utilisés

NaCl : Chlorure de sodium (sel)

NaHCO3 : Bicarbonate de sodium

NaH2PO4 : Dihydrogenophosphate de sodium

p : Degré de signification

pH : Potentiel d’hydrogène

Réf : Produit de Référence

SOTRAMEX : SOciété de TRAnsformation Malgache et d’EXportation.

% : Pourcentage

vi
INTRODUCTION
 INTRODUCTION

Depuis la nuit des temps et à travers le monde, les plantes ont occupé une place
importante dans la vie de l’Homme, particulièrement, pour des fins thérapeutiques. Elles
produisent et contiennent une variété de substances chimiques que notre corps aura toujours
besoin (MADHU C. et coll., 2012). Ses pouvoirs thérapeutiques étaient connus par nos
ancêtres et nos parents de façon empirique (N’GUESSAN K. et coll., 2009).
Pour traiter, soulager et prévenir les maladies, des études scientifiques ont été menées pour
authentifier leur utilisation conduisant à des synthèses ou à des hémi-synthèses de nouvelles
molécules pour les préparations pharmaceutiques (MADHU C. et coll., 2012). Dans les pays
en développement, la population recourt à la médecine traditionnelle pour les besoins en santé
de base, y compris les troubles gastriques (MARSLIN G.et coll., 2013). Depuis, les
traitements de cette maladie se sont orientés vers les plantes alimentaires comme le
gingembre (ZHONGGHI W. et coll., 2011), les graines de soja (ALADA A. et coll., 2005), la
patate douce (VANDANA P. et MADHAV S., 2012), le tamarin (RAJA N.R.L. et coll.,
2008).

L’ulcère gastro-intestinal constitue un des problèmes majeurs des troubles digestifs

(JYOTIG. et coll., 2012). C’est une maladie qui est considérée actuellement comme un des
fléaux du 21ème siècle (IYYAM P.S., 2010). Il existe plusieurs types d’ulcère, le plus connu
est celui affectant le système gastro-intestinal (KUMAR M.S., 2012) qui peut être gastrique,
duodénal ou les deux à la fois (IYYAM P.S. et coll., 2010).
L’ulcère est une désintégration d’un tissu de la peau, des yeux ou de la muqueuse et se
présente sous forme d’une plaie ouverte (PUROHIT A.P. et KUSHWAHA R., 2013). C’est
une érosion ou une discontinuité macroscopique de l’épithélium normal (KUMAR M.S. et
coll., 2011). Dans le tractus gastroduodénal, il se traduit par une perte de substance de la
paroi digestive et peut atteindre la couche musculaire (MARSLIN G. et coll., 2013).

L’estomac sécrète un suc gastrique de pH acide suite à une stimulation des récepteurs des
cellules pariétales dont les neuromédiateurs responsables sont : l’acétylcholine, l’histamine et
la gastrine (Figure1) (KONTUREK S.J. et coll., 2003). Cette stimulation aboutit à une
activation de l’enzyme H+/K+ ATPase après une cascade de réactions chimiques au niveau

1
cellulaire, libérant par la suite l’ion H+ dans la lumière gastrique en échange avec l’ion K+
(SUNIL K. et coll., 2012). L’histamine, libérée par les cellules entérochromaffines like
(CEL), active les récepteurs histaminiques type 2 notés RH2 et contribue également à la
libération de la gastrine. L’acétylcholine libérée par les fibres post-ganglionnaires du nerf
vague se fixe sur les récepteurs muscariniques type 1 noté RM1. Ce neuromédiateur stimule
également la libération de l’histamine par les cellules entérochromaffines like (SUNIL K. et
coll., 2012).
La libération de ces médiateurs dépend des facteurs exogènes tels que l’état comportemental
de l’individu, une alimentation malsaine, un environnement inapproprié pour l’organisme
comme le froid, etc.… (IYYAM P.S. et coll., 2010).

Figure 1: Libération des neuromédiateurs responsables de la sécrétion acide

(http://hepatoweb.com/DES/exposes/DES04_2006_VALLOT/Secretion_acide.pdg)

L’étiologie de l’ulcère gastroduodénal repose principalement sur le déséquilibre entre

les facteurs protecteurs et les facteurs agresseurs au niveau de la muqueuse gastrique et
duodénale (KHATTAB A.H. et coll., 2011). Ce trouble est en faveur des facteurs agresseurs
qui sont l’acide chlorhydrique (HCl) et la pepsine (ODE O.J. et coll., 2011).
Les cytoprotecteurs sont par ailleurs constitués par le mucus, l’ion bicarbonate (HCO3-), les
prostaglandines (GOEL R.K. et SAIRAM K., 2002) et l’intégrité des cellules de la muqueuse
gastrique (DIVAKAR M.C. et LAKSHMI D.S., 2011). D’autres facteurs comme le stress, le
tabac, l’alcool, l’indigestion, la prise répétitive des anti-inflammatoires non stéroïdien,

2
l’infection permanente due à Helicobacter pylori peuvent également contribuer à l’incidence
ulcéreuse (IYYAM P. S. et coll., 2010).

Les manifestations cliniques varient d’une personne à une autre mais les plus
communes sont les douleurs gastriques et/ou abdominales. Ces douleurs, plus accentuées la
nuit sont attribuées à des contractions involontaires des muscles lisses du tractus gastro-
intestinal. D’autres symptômes comme une sensation intense de faim même après avoir
mangé due à la présence de l’hyperacidité dans l’estomac et une diarrhée peuvent également
se produire (SIRISHA B. et SUBASH V., 2012). Quelques fois, les malades présentent une
perte de poids remarquable et d’appétit associée aux nausées et aux vomissements
(MARSLIN G. et coll., 2013).

Pour y remédier, des chercheurs ont proposé des traitements avec les antagonistes des
récepteurs H2 de l’histamine (ex : cimétidine), les antagonistes des récepteurs muscariniques
de l’acétylcholine RM1 (ex : pirenzépine), les analogues de la prostaglandine E1
(misoprostol), les inhibiteurs du pompe à protons (ex : oméprazole), les antibiothérapies (ex :
metronidazole) (IYYAM P.S. et coll., 2010).

L’objectif de cette étude est d’évaluer et de valoriser l’activité antiulcéreuse de HMA-

FHM/VHM/119002/M12. Des hypothèses ont été formulées sur la propriété antiulcéreuse que
ce produit pourrait avoir. S’il est un antiulcéreux, il pourrait diminuer l’acidité du suc
gastrique soit en inhibant la sécrétion de H+ (antisécrétoire) soit en neutralisant l’ HCl présent
dans la lumière gastrique (antiacide). Il pourrait également avoir une propriété
mucoprotectrice contre l’agression des agents ulcérants. Enfin, il pourrait accélérer la
cicatrisation des lésions au niveau de la muqueuse gastrique.

3
MATERIELS
ET
METHODES
 MATERIELS ET METHODES

I-ETUDE CHIMIQUE
1) Le produit testé

Le produit HMA-FHM/VHM/119002/M12 utilisé dans cette étude a été fourni par la

société SOTRAMEX qui a effectué les enquêtes ethnobotaniques dans la région Est de
Madagascar. L’utilisation traditionnelle de la plante à l’origine de ce produit est
principalement les troubles digestifs. Il a un pH neutre et se présente sous forme de poudre de
couleur marron claire, amère et hydrosoluble.

2) Criblage phytochimique:

Cette étude a pour but d’identifier les différentes grandes familles chimiques contenues
dans HMA. La présence d’une famille chimique se traduit par l’apparition des complexes
insolubles (réactions de précipitation) ou par des complexes solubles (réactions de coloration)
grâce aux réactifs spécifiques pour chaque famille (IGAN C. ,1982).
Les notations suivantes ont été utilisées :
(+) : présence de la famille à l’état de trace ;
(++) : Présence de la famille chimique à moyenne quantité ;
(+++) : Forte concentration de la famille chimique ;
Les espèces chimiques absentes dans HMA ne sont pas mentionnées

Le tableau n°I résume la manipulation pour cette étude :

4
Tableau I : Méthodes utilisées lors du criblage phytochimique (IGAN C., 1982).

TESTS REACTIFS OBSERVATIONS CONCLUSION

-Dragendorff (NO2)2BI/K -Précipitation jaune orangée

-Mayer HgCl/IK -Précipitation Blanc-cassé Alcaloïdes
-Wagner I2/IK -Précipitation jaune marron

-Précipitation verte Tanins Catéchiques

Coloration et Gélatine-NaCl+FeCl3 -Précipitation bleue noirâtre Tanins Galliques
précipitation

Mousse -Agitation -Persistance d’une mousse

(3cm d’épaisseur)
30 minutes après agitation Saponines

Hémolytique -Addition de -Décoloration du sang

quelques
gouttes de sang
dans HMA

Ammoniaque Fluorescence bleu à la lampe UV Coumarines

Wilstater -Ruban de -Coloration rouge Flavones
magnésium+HCl -rouge à pourpre Flavonols
concentré -Rouge violacée Flavanones ; Flavanols

-HCl Leucoanthocyanes
Bate-Smith concentré+chauffage -coloration rouge violacée
au bain marie Anthocyanes
-rouge

-NH4OH Phase alcaline rouge violacée Quinones

Acétone Trouble Polysaccharides

(goutte à goutte)

-Badjet -KOH+acide picrique -coloration orange -Stéroïdes lactoniques

-Kedde -KOH+réactif de -coloration violette -Glycosides Cardiotoniques

Kedde

-Libermann- -acétique Anhydre + -Anneau rouge -Triterpénoides

Burchard H2SO4
-coloration verdâtre - Stérols

5
II-ETUDE BIOLOGIQUE
1) Animaux d’expériences :

Des rats de race Wistar aussi bien mâle que femelle, âgés de 5 à 9 semaines et ayant
un poids moyen compris entre 150 et 225 grammes ont été utilisés. Ils ont été nourris avec la
provende LFL 1420 et ont eu accès à l’eau à volonté.
Les animaux ont été élevés dans l’animalerie du laboratoire de Pharmacologie Générale, de
Pharmacocinétique et de Cosmétologie, du département de Physiologie Animale et de
Pharmacologie, de la Faculté des Sciences, Université d’Antananarivo.
Au cours de l’expérience, tous les animaux ont été mis à jeun 24 heures avant la
manipulation mais ont eu accès libre à l’eau.
Pour les tests in vivo, les rats ont été divisés en 5 lots de 5 animaux. Le lot témoin a reçu de
l’eau distillée, le second lot a servi de référence et a été traité avec un des produits de
référence comme la cimétidine, l’oméprazole, le misoprostol et les trois autres lots ont été
traités avec HMA-FHM/VHM/119002/M12 à 50, 100 et 200 mg/kg.

2) Mode d’administration des produits

Lors des tests in vivo, les produits ont été administrés par gavage à raison de 10 ml/kg
(DIELH et HEINZ K., 2010) ou par voie intra-duodénale à un volume de 1ml pour un rat de
200 g. Pour les tests in vitro, l’organe a été incubé dans un bain contenant HMA dans une
cuve à organe isolé de 5 ml.

3) Etudes in vivo

a) Etudes préliminaires

Des études préliminaires ont été effectuées pour déterminer les doses actives de
HMA-FHM/VHM/119002/M12. L’éthanol absolu a été utilisé pour induire l’ulcère qui est
caractérisé par des hyperhémies au niveau de la muqueuse gastrique des rats (SHIRISHA B.
et SUBASH V., 2012). Les surfaces de ces hyperhémies ont été mesurées par planimétrie
directe. Les tests préliminaires ont montré que le produit est actif à partir de la dose de 50
mg/kg.

6
b) Etude de l’effet antisécrétoire de HMA-FHM/VHM/119002/M12

La genèse de l’ulcère est attribuée à l’hypersécrétion de l’ion H+ qui forme l’acide

chlorhydrique (KUMAR et coll., 2011).
Pour corriger ce trouble, des drogues classées dans le groupe des antisécretoires ont été mis
au point (LOICHOT C.et GRIMA M. 2005). Au cours de cette étude, l’objectif a été de
déterminer si le produit diminuerait l’acidité du suc gastrique en inhibant la sécrétion de cet
ion H+.

Des rats de race Wistar âgés de 7 semaines, ayant un poids moyen compris entre 180
et 200g ont été mis à jeun et ont eu de l’eau à volonté 24 heures avant la manipulation. Les
animaux ont été répartis au hasard en cinq lots de cinq rats (IYYAM P.S. et coll., 2010).
Puis, ils ont été anesthésiés par inhalation avec l’éther diéthylique. L’abdomen supérieur de
l’animal, entre les dernières côtes a été incisé transversalement. Une ouverture de 0,5 cm a été
effectuée afin que l’intestin ne déborde pas à l’extérieur (GOVIND P. et SAURABH J.,
2010). Le pylore a été identifié et ligaturé. Les produits ont été administrés par voie intra-
duodénale : le lot témoin a reçu de l’eau distillée; le lot de référence a reçu de la cimétidine
qui est un anti sécrétoire à 100 mg/kg (IYYAM P.S. et coll., 2010); les trois derniers lots ont
été traités avec HMA-FHM/VHM/119002/M12 aux doses de 50,100 et 200 mg/kg. Ensuite,
l’abdomen a été refermé et suturé; les animaux ont été laissés se rétablir.
Quatre heures après, tous les animaux ont été sacrifiés par inhalation d’éther. Une
laparotomie a été effectuée et le cardia, situé entre l’œsophage et l’estomac, a été ligaturé.
L’estomac a été prélevé et son contenu a été versé dans un tube à essai. Ce contenu a été
ensuite centrifugé à 2000 tours par minute pendant dix minutes et le surnageant a été
récupéré. L’acidité de ce surnageant a été mesurée avec un pH-mètre de modèle PIERRON®.
Le produit inhiberait la sécrétion acide si le pH du suc gastrique récolté augmente
tendant vers la neutralité.

7
 Boitier

Sonde

Figure 2 : pH mètre PIERRON® utilisé pour mesurer l’acidité du contenu gastrique des
animaux

c) Etude de l’effet mucoprotecteur de HMA-FHM/VHM/119002/M12

L’effet antiulcéreux de HMA-FHM/VHM/119002/M12 peut être dû à sa propriété de

protéger la muqueuse gastrique face aux agents agresseurs soit par une activation des
facteurs protecteurs soit par une formation de barrière protectrice (ADEBAYO G.G.I. et
coll., 2013).
Le but de cette manipulation a été de déterminer si HMA serait capable de réduire les
dommages provoqués par l’alcool sur la muqueuse gastrique.

La méthode expérimentale utilisée a été celle de SHIRISHA B. et SUBASH V. (2012).

Vingt-cinq rats Wistar âgés de 9 semaines pesant entre 170 et 225 g ont été répartis en 5 lots
de 5 rats et mis à jeun avec un accès libre à l’eau 24 heures avant la manipulation. Les
animaux ont reçu par voie orale de l’eau distillée pour le lot témoin, l’oméprazole (un
inhibiteur des pompes à protons) à 20 mg/kg pour le lot de référence (JYOYI G.et coll.,
2012), et HMA à 50, 100 et 200 mg/kg pour les animaux des trois derniers lots.

Une heure après, de l’éthanol absolu à raison de 1ml par rat de 200g
(NABAVIZADEH F. et coll., 2011) a été administré par voie orale chez tous les animaux.
Une heure après l’administration de l’éthanol, les animaux ont été sacrifiés; leurs estomacs
ont été prélevés et ouverts suivant la grande courbure puis rincés avec de la solution saline à
0,9 %. Pour chaque rat, l’estomac ainsi obtenu a été ensuite étalé sur une surface plane tout en

8
respectant la forme et la structure de l’organe afin de mesurer les surfaces des hyperhémies
par planimétrie directe.

Une diminution de la surface des hyperhémies a été considérée comme une activité
mucoprotectrice du produit.
L’indice de protection a été calculé pour estimer la propriété protectrice de HMA-
FHM/VHM/119002/M12 (CHEN H.S. et coll., 2005).

𝐼𝑈 (𝑡é𝑚𝑜𝑖𝑛)−𝐼𝑈 (𝑇𝑟𝑎𝑖𝑡é)
P= × 100
𝐼𝑈 (𝑡é𝑚𝑜𝑖𝑛)

Où IU représente la surface des hyperhémies et P le pourcentage de protection de la

muqueuse.

d) Etude de l’effet cicatrisant de HMA-FHM/VHM/119002/M12 sur l’ulcère au niveau de la

muqueuse gastrique

Un produit antiulcéreux peut favoriser la cicatrisation de l’ulcère de l’estomac

(GOVIND P. et SAURABH J., 2010). C’est la raison pour laquelle HMA-
FHM/VHM/119002/M12 a été étudié dans ce sens afin de déterminer si le produit serait
capable d’accélérer la cicatrisation d’une muqueuse ulcérée.
Vingt-quatre heures avant la manipulation, 25 rats de race Wistar âgés de 6 semaines
ayant un poids moyen compris entre 160 et 190 g ont été mis à jeun et ont eu accès à l’eau
librement. Les animaux ont été répartis en cinq lots de cinq rats (SAYANTI B. et SUBASH
V., 2007).
L’indométacine à une dose de 30 mg/kg (ODE O.J.et coll., 2011), un anti-inflammatoire non
stéroïdien capable de provoquer l’ulcère (WALLACE J.L., 2000), a été administré chez les
animaux tous les matins à la même heure pendant sept jours.
Quatre heures après l’administration de l’indométacine, le lot témoin a reçu de l’eau distillée,
le lot de référence a reçu du misoprostol à 1,43 µg/kg (SAYANTI B. et SUBASH V., 2007),
un analogue de prostaglandine obtenu par synthèse chimique et jouant un rôle important dans
la protection et la cicatrisation de la muqueuse gastrique (HARSHALDA T. et coll., 2011).
Les trois autres lots ont été traités avec 50, 100 et 200 mg/kg de HMA. Tous ces produits ont
été également administrés à raison de 10 ml/kg pendant sept jours (DIELH et HEINZ K.,

9
2010). Au septième jour, les animaux ont été sacrifiés et leurs estomacs ont été prélevés,
rincés et étalés sur une surface plane afin de mesurer la surface de la lésion avec la méthode
planimétrie directe.

4) Etudes in vitro

L’acétylcholine et l’histamine contribuent dans le mécanisme de la sécrétion acide et dans la

contraction des muscles lisses gastriques qui est un symptôme de l’ulcère gastroduodénal
(YASSIN N.A.Z. et coll., 2012). Une inhibition de la contraction a été considérée comme
étant un traitement du spasme apparaissant lors d’un ulcère gastroduodénal.
Des études in vitro ont été effectuées dans le but de déterminer les mécanismes d’action
probables de HMA-FHM/VHM/119002/M12 vis-à-vis de ces neuromédiateurs responsables
de la sécrétion de l’ion H+.
Des rats Wistar âgés de 9 semaines pesant environ 220 g ont été mis à jeun 16 heures
avant la manipulation; ils ont été sacrifiés en coupant la carotide. L’estomac a été isolé
immédiatement et mis dans une boîte de Pétri contenant une solution de Tyrode barbotée avec
de l’air et dont la composition en mM a été : KCl: 2,7; NaCl: 136,9; MgCl2: 1,1; NaHCO3:
11,9; NaH2PO4: 0,4; glucose: 5,6; et CaCl2: 1,8; eau distillée: 1 litre (pH 7,4) (NERMAT
A.Z.Y. et coll., 2012). L’organe a été nettoyé et ouvert suivant la petite courbure, le fundus de
couleur blanche-grise a été prélevé et découpé en lanière de 4 cm suivant sa longueur; 1,5cm
de cet organe a été monté dans un cuve à organe isolé de 5 ml contenant une solution de
Tyrode maintenue à la température de 37°C et barbotée avec de l’air. Avec un fil à coudre;
l’une des 2 extrémités de l’organe a été fixée au fond de la cuve et l’autre a été reliée au stylet
enregistreur auquel a été suspendu un contrepoids de 1 g.
Les contractions de l’organe ont été enregistrées avec un kymographe à une vitesse de
0,5 mm/s. L’organe a été laissé s’équilibrer pendant 60 minutes au cours duquel, la solution
dans la cuve a été renouvelée toutes les 15 minutes (RAJAONARIVELO H.O, 1997).

10
 1

2
7
3

8
4

5
9

Figure 3 : Kymographe utilisé pour les études in vitro :

1: Encre; 2: contrepoids; 3: cuve à organe isolé; 4: conduit d’aération; 5: robinet de la cuve à
organe; 6: conduit d’eau chaude pour maintenir la solution de Tyrode à 37°C; 7: stylet
enregistreur; 8: tambour pour l’enregistrement; 9: bouton pour régler la vitesse du tambour

a) Etude de l’effet de HMA-FHM/VHM/119002/M12 vis-à-vis de l’acétylcholine

Après la période d’équilibration, 5 µl d’acétylcholine à la concentration de 10-2 M ont été

injectés dans la cuve pour sensibiliser l’organe soit une concentration finale de 10-5 M dans le
bain. La préparation a été ensuite rincée et laissée s’équilibrer de nouveau afin que l’organe
retrouve son état initial.

Ensuite, la contraction de l’organe a été étudiée en injectant dans la cuve de

l’acétylcholine de manière à obtenir des concentrations cumulatives et croissantes. Le tableau
n° II montre les différents volumes d’acétylcholine injecté dans le bain.

11
Tableau II : Résumé des volumes et des concentrations d’acétylcholine injectés dans
la cuve pour obtenir des concentrations cumulatives et croissantes dans le bain afin
d’évaluer les contractions de l’organe provoquées par l’acétylcholine en présence ou
en absence de HMA.
Volume de l’acétylcholine à Concentration Concentration finale

injecter dans le bain (µl) initiale de de l’acétylcholine

l’acétylcholine (à dans la cuve de 5ml

injecter) (M) (M)

5 10-8
20 10-5 5.10-8
25 10-7
20 10-4 5.10-7
25 10-6
20 10-3 5.10-6
25 10-5
20 10-2 5.10-5
25 10-4
20 10-1 5.10-4

Lorsque la contraction maximale a été obtenue, la préparation a été rincée et laissée de

nouveau s’équilibrer.
Dès que l’organe a retrouvé son état de départ, l’effet des différentes concentrations
de HMA: 0,005 mg/ml; 0,01 mg/ml et 0,02 mg/ml ont été étudiées séparément.
HMA-FHM/VHM/119002/M12 a été laissé en contact avec l’organe pendant 10 minutes.
Après ce temps d’incubation, la contraction de l’organe avec l’acétylcholine en présence de
l’une de ces trois concentrations de HMA a été de nouveau reproduite en injectant
l’acétylcholine à des concentrations cumulatives et croissantes comme précédemment.
Les amplitudes des contractions ont été mesurées pour établir les courbes représentant
les relations entre les concentrations en Acétylcholine dans le bain et l’amplitude des
contractions de l’organe en présence ou en absence de HMA dans le bain. La concentration
efficace à 50% ou CE50; en présence ou en absence des trois concentrations de HMA a été
déterminée par régression linéaire en ne considérant que les parties linéaires des courbes.

12
b) Etude de l’effet de HMA-FHM/VHM/119002/M12 vis-à-vis de l’histamine

Après la période d’équilibration, l’organe a été sensibilisé avec 5 µl d’histamine à la

concentration de 10-2 M pour obtenir une concentration finale de 10-5 M dans le bain. La
préparation a été ensuite rincée et laissée s’équilibrer de nouveau.
Des concentrations cumulatives et croissantes d’histamine de 10-8 M; 5.10-8 M; 10-7 M
5.10-7 M; 10-6 M; 5.10-6 M; 10-5 M; 5.10-5 M; 10-4 M dans le bain ont été utilisées pour établir
la relation entre les concentrations en histamine dans le bain et l’amplitude des contractions
de l’organe. Après l’obtention de l’effet maximal, la préparation a été rincée et laissée
s’équilibrer.
Dès que l’organe a retrouvé son état initial, l’effet de HMA vis-à-vis de l’histamine a été
évalué. HMA a été testé aux concentrations de 0,005, 0,01 et 0,02 mg/ml dans le bain. Pour
cela, ces différentes concentrations ont été testées une à une. Le produit a été injecté dans le
bain et l’organe a été laissé en contact avec lui pendant 10 minutes.
Lorsque le temps d’incubation a été écoulé, sans lavage, l’étude de la contraction de l’organe
à des concentrations cumulatives et croissantes d’histamine comme précédemment a été
effectuée.
Les contractions obtenues en présence ou en absence de HMA-FHM/VHM/119002/M12
ont été enregistrées.
La variation de l’effet maximal en présence ou en absence de HMA a été évaluée et la CE50 a
été déterminée pour les deux cas par régression linéaire. Seules les parties linéaires des
courbes ont été considérées.

5) Recherche des effets indésirables

Des tests de toxicité s’avèrent importantes afin de déterminer les effets indésirables et
les doses toxiques de l’extrait. Vingt rats aussi bien mâle que femelle ont été utilisés et
répartis au hasard en quatre lots de cinq animaux dont un lot témoin ayant reçu de l’eau
distillée et les trois autres lots ont reçu respectivement des doses de 800, 1600 et 3200 mg /kg
de HMA par voie orale.
Les états et les comportements des animaux ont été observés et notés à 5, 10, 15, 30,
60 minutes et 2, 4, 6, 24, 48 et 72 heures après l’administration de l’extrait.

13
6) Analyses statistiques

Les différents paramètres obtenus avec les études in vivo et in vitro, ont été analysés
par le test " t " de Student. L’analyse a été effectuée avec le logiciel Sigma-stat 3.5. Les
valeurs des paramètres mesurés comme la surface d’hyperhémies et des lésions, le pH,
l’Emax et la CE50 issues des lots traités avec HMA et le produit de référence ont été
comparées avec celles du lot témoin et représentés en moyenne ± e.s.m.
Une valeur de p<0,05 est considérée comme significative entre les différents
paramètres comparés.

14
RESULTATS
 RESULTATS

I PARTIE CHIMIQUE
1) Les familles chimiques contenues dans HMA
Les résultats du criblage phytochimique effectué sur HMA-FHM/VHM/119002/M12
sont présentés dans le tableau III.
Ce criblage a révélé une abondance relative en tanins notamment en tanins catéchiques, en
saponines, en leucoanthocyanes et en flavonoïdes (flavanols et flavanones); une faible
teneur en anthocyanes et en stéroïdes (stérols insaturés et stérols lactoniques) a été
également observée.

Tableau III : Les familles chimiques contenues dans HMA-FHM/VHM/119002/M12

FAMILLES TYPES DU COMPOSES RESULTATS

TANINS Catéchiques ou condensés +++

SAPONINES +++

Flavanones et flavanols +++

FLAVONOIDES Leucoanthocyanes +++

Anthocyanes +

Stérols insaturés +
STEROIDES Stérols lactoniques +

II PARTIE BIOLOGIQUE
1) Modèles in vivo
a) Effet antisécrétoire de HMA-FHM/VHM/119002/M12
Une augmentation de pH indique une diminution de l’acidité du contenu gastrique. La
figure 4 représente la variation du pH du suc gastrique secrété en fonction des produits
administrés chez les animaux. Pour le lot témoin, ce pH est de 2,09 ± 0,02. Chez les animaux
ayant reçu HMA-FHM/VHM/119002/M12, le pH du suc gastrique augmente. A la dose de 50
mg/kg de HMA, le pH est de 2,24 ± 0,05(NS). Traité avec 100 mg/kg, le pH devient 2,40 ±

15
0,03(p<0,05). Et à la dose de 200 mg/kg, le pH est de 3,47 ± 0,23(p<0,05). Avec la cimétidine
qui est le produit de référence, le pH est de 5,51 ± 0,24.
Cette augmentation de pH observée chez les lots traités avec HMA par rapport au pH
du suc gastrique des animaux du lot témoin indique une activité antisécrétoire du produit.
7
6 *
5
temoin
pH 4 *
50 mg/kg
3 100 mg/kg
*
2 200mg/kg
1 cimetidine
0
témoin 50mg/kg 100mg/kg 200mg/kg réference
lots traités

Figure 4 : Variation du pH du suc gastrique des animaux du lot traité avec HMA à 50,100
et 200 mg/kg; le lot traité avec la cimétidine à 100 mg/kg et du lot témoin (m ± e.s.m, n=5,
*p<0,05)

b) Effet mucoprotecteur de HMA-FHM/VHM/119002/M12

La figure 5 montre la paroi gastrique intacte d’un rat qui n’a rien reçu. Cette paroi ne
présente aucune hyperhémie, tandis que l’administration par voie orale d’éthanol absolu chez
les rats provoque des hyperhémies (figure 5).

16
 Témoin (Eau distillée) 50 mg/kg de HMA

100 mg/kg de HMA 200 mg/kg de HMA

Réf. (Oméprazole 20 mg/kg) Non exposé à l’alcool

Figure 5 : Les hyperhémies chez cinq rats issus des différents lots: lot témoin, lot traité avec
HMA à 50, 100 et 200 mg/kg et lot de référence qui a reçu l’oméprazole à 20 mg/kg

17
 La surface de l’hyperhémie diminue chez les animaux ayant reçu HMA et
l’oméprazole (p<0,05). Pour le lot témoin, la surface de l’hyperhémie est de 15,32 ± 0,68
mm2, pour les animaux prétraités avec HMA de 50 mg/kg, elle est égale à 8,16 ± 0,96 mm2.
Avec la dose de 100 mg/kg, la surface devient 7,62 ± 0,77 mm2. Chez les animaux qui sont
prétraités à
200 mg/kg de HMA, la surface est de 2,54 ± 0,94 mm2. Quant à l’oméprazole à 20 mg/kg, la
surface des hyperhémies est de 2,21 ± 0,74 mm2. La figure 6 montre ces surfaces de
l’hyperhémie chez les animaux des différents lots.
Cette baisse de la surface des hyperhémies signifie que HMA protège la muqueuse
contre l’agression de l’éthanol.

18
16
14
12
témoin
surface 10
mm2 * * 50mg/KG
8
100mg/kg
6
200 mg/kg
4 * *
oméprazole
2
0
témoin 50mg/KG 100mg/kg 200 mg/kg oméprazole
différents lots

Figure 6: Surface des hyperhémies de la muqueuse provoquées par l’administration d’éthanol par
voie orale pour les animaux ayant reçu HMA à 50, 100 et 200 mg/kg et de l’oméprazole comparée
à celle des animaux du lot témoin (m ± e.s.m. n=5 * p <0,05).

La mucoprotection exprimée en pourcentage traduit l’inhibition de l’agression de

l’éthanol au niveau de la muqueuse (Tableau IV). Pour le lot témoin, la protection est
considérée à 0%; HMA protège la muqueuse gastrique à 47,09 ± 4,92 % pour le lot prétraité à
50 mg/kg; celle du lot prétraité à 100 mg/kg est de 50,17 ± 4,48 %. Pour les animaux ayant
reçu le produit à 200 mg/kg, la muqueuse est protégée à 83,85 ± 5,62 % ; les animaux du lot
de référence sont protégés à 86,15 ± 4,23 %.

18
Tableau IV: Protection de la muqueuse face aux dommages induits par l’éthanol
absolu (exprimée en %) selon les produits administrés (m ± e.s.m., n=5)

Lot Témoin 50mg/kg 100mg/kg 200mg/kg Oméprazole

20mg/kg

Protection 0 47,096 ± 4,92 50,174 ± 4,48 83,852 ± 5,62 86,152 ± 4,23

(%)

c) Effet cicatrisant de HMA-FHM/VHM/119002/M12

Une administration répétée de l’indométacine induit un ulcère, caractérisé par des lésions
profondes au niveau de la muqueuse gastrique des rats. La cicatrisation de ces lésions est
centrifuge et prend une forme circulaire et/ou ovalaire (figure 7).

19
 OBSERVATION
S

TEMOIN (Eau distillée) 50 mg/kg (HMA) 100 mg/kg (HMA)

200 mg/kg (HMA) Réf. (Misoprostol)

Figure 7 : Evolution de la cicatrisation des lésions provoquées par l’administration de

l’indométacine pour les différents lots traités avec HMA-FHM/VHM/119002/M12 à
différentes doses (50, 100 et 200 mg/kg), le lot de référence et le lot témoin.

20
 La figure 8 représente la variation des surfaces lésées dans la muqueuse gastrique des
rats chez les différents lots au bout de sept jours de traitement. Chez le lot témoin, la surface
de la lésion est de 2,87 ± 0,06 mm2.
Par rapport au lot témoin, une diminution de la lésion ulcérée est observée chez les animaux
traités avec HMA à 50, 100 et 200 mg/kg et le lot ayant reçu du Misoprostol à 1,43 µg/kg
(p <0,05). A la dose de 50 mg/kg de HMA, la surface ulcérée est de 1,59 ± 0,05 mm2. Avec
100 mg/kg de HMA, la surface de la lésion devient 0,95 ± 0,18 mm2. Pour la dose de 200
mg/kg, cette surface est de 0,28 ± 0,03 mm2 et avec le misoprostol, la surface est de 0,35 ±
0,06mm2.
La différence n’est pas significative entre l’effet du misoprostol et HMA à la dose 200
mg/kg. Ce qui fait que les effets sur la cicatrisation des lésions de la muqueuse pour HMA à
200 mg/kg et celui du Misoprostol à 1,43µg/kg sont similaires.
Comme HMA diminue la surface des lésions, il favorise alors la cicatrisation des lésions
ulcéreuses au niveau de la muqueuse gastrique.

3,5

2,5 témoin

2 50mg/kg
lésion ulcerée *
100mg/kg
(mm²) 1,5
* 200mg/kg
1
* Misoprostol 1,43µg/kg
0,5 *

0
témoin 50mg/kg 100mg/kg 200mg/kg Misoprostol
1,43µg/kg
produits administrés

Figure 8: Variation des surfaces lésées de la muqueuse de l’estomac chez les animaux
traités avec HMA à trois doses différentes (50, 100 et 200 mg/kg) et avec le misoprostol,
comparée au lot témoin (m ± e.s.m. n=5, *p <0,05)

21
2) Modèles in vitro

a) Effet de HMA-FHM/VHM/119002/M12 vis-à- vis de l’Acétylcholine

Les concentrations cumulatives et croissantes d’acétylcholine dans le bain provoquent

des contractions d’amplitude croissante du fundus isolé. Les résultats des études sur la
contraction du fundus isolé de rat provoquée par l’acétylcholine en présence ou en absence de
HMA sont présentés par la figure 9.
En présence de HMA dans le bain, l’effet maximal de l’acétylcholine diminue (p<0,05). En
effet, l’amplitude maximale équivaut à 100% de contraction est obtenue à partir d’une
concentration de 10-5 M d’acétylcholine dans le bain pour le cas de l’acétylcholine seule. En
présence de 0,005 mg/ml de HMA, cette amplitude diminue à 72,59 ± 0,36% tandis qu’elle
est de 60,67 ± 0,16% en présence de 0,01 mg/ml de HMA. En présence de 0,02mg/ml de
HMA, la contraction maximale provoquée par l’acétylcholine est réduite à 40,63±0,19%.
La concentration qui donne 50 % d’effet maximum est de 0,306 ± 0,009 µM pour le
cas de l’acétylcholine seul. Cette valeur augmente lorsque l’organe est préincubé dans le bain
contenant HMA (Tableau V). Cette augmentation de la valeur de la CE50 signifie que les
courbes montrant les concentrations et effets de l’acétylcholine sur le fundus isolé en
présence de HMA se déplacent vers la droite.

Comme l’effet maximal diminue en présence de HMA et la CE50 augmente; la

contraction provoquée par l’acétylcholine est inhibée par HMA d’une manière non
compétitive.

22
 100
90
80
70
CONTRACTION (%)

60
50
40
ACH seul
30
20 ACH+0,005mg/ml
10
0 ACH+0,01mg/ml
0 0,001 0,005 0,01 0,05 0,1 0,5 1 5 10 50
CONCENTRATION FINALE DE L'ACÉTYLCHOLINE . 10-5 M ACH+0,02mg/ml

Figure 9 : Variation de la contraction du fundus isolé (exprimée en pourcentage)

provoquée par l’Acétylcholine en absence ou en présence de HMA à trois concentrations
différentes dans le bain (0,005, 0,01 et 0,02 mg/ml) (m ± e.s.m., n=5, Emax : ***p <0,001)

Tableau V : CE50 et effet maximal de l’Acétylcholine en absence ou en présence de

HMA (m ± e.s.m., n=5) ; Régression linéaire des valeurs de la moyenne
(y= ax+b ; 0< R2< 1)

Concentration CE50 de l’Ach (µM) Effet maximal Equation de la

HMA (mg/ml) (%) droite de
régression et R2

0 0,30 ± 0,009 100 ± 0 y = 0,205 x+ 1,838

R2 = 0,869

0,005 1,58 ± 0,02 72,59 ± 0,36 y =0,246 x+ 1,927

R2 = 0,915

0,01 5,88 ± 0,08 60,67 ± 0,16 y =0,256 x+1,837

R2 = 0,878

0,02 6,39 ± 0,17 40,63 ± 0,19 y = 0,253 x+ 1,815

R2 = 0,878

23
b) Effet de HMA-FHM/VHM/119002/M12 vis-à- vis de l’Histamine

Les résultats de la contraction du fundus provoqué par l’histamine sont présentés par
la figure 10. En absence de HMA, la contraction maximale du fundus est atteinte à la
concentration de 10-5 M d’histamine dans le bain. En présence des différentes concentrations
de HMA dans le bain, la contraction maximale provoquée par l’histamine diminue. En effet,
en présence de 0,005 mg/ml de HMA, la contraction maximale provoquée par l’histamine est
de 80,05 ± 1,06%; pour 0,01 mg/ml de HMA, la contraction diminue à 70,59 ± 0,61%. En
présence de 0,02 mg/ml de HMA, la contraction maximale est encore réduite à 65,63 ±
0,66%. Ces résultats montrent que l’effet maximal obtenu avec l’histamine seule n’est plus
reproduit en présence de HMA (p<0,05).

La CE50 est de 0,22 ± 0,008 µM pour le cas de l’histamine seul, et elle augmente en
présence de HMA dans le bain (Tableau VI). Comme l’effet maximal diminue et la CE50
augmente en présence de HMA dans le bain, cela montre que HMA inhibe la contraction du
fundus isolé provoquée par l’histamine d’une manière non compétitive.

24
 100
90
80
CONTRACTION (%)

70
60
50
HIS seul
40
30
HIS+0,005mg/ml
20
10
HIS+0,01mg/ml
0
0 0,001 0,005 0,01 0,05 0,1 0,5 1 5 10 50
HIS+0,02mg/ml
CONCENTRATION FINALE DE L'HISTAMINE .10-5 M

Figure 10: Variation de la contraction du fundus isolé (exprimée en pourcentage)

provoquée par l’Histamine en absence ou en présence de HMA à trois concentrations
différentes : 0,005, 0,01 et 0,02 mg/ml (m ± e.s.m., n=4, Emax : *p<0,05)

Tableau VI: CE50 de l’Histamine et Emax en absence ou en présence de différentes

concentrations de HMA (m ± e.s.m., n=4); régression linéaire des valeurs de la
moyenne (y= ax+b ; 0< R2< 1 )

Concentration Effet maximal Equation de la droite et

HMA CE50 de l’His (µM) (%) R2
(mg/ml)
0 0,22 ± 0,008 100 ± 0 y = 0,200 x + 1,829
R2 = 0,854
0,005 0,97 ± 0,05 80,05 ± 1,06 y =0,229 x + 1,875
R2 = 0,908
0,01 1,51 ± 0,06 70,59 ± 0,61 y = 0,232 x + 1,853
R2 = 0,888
0,02 3,20 ± 0,13 65,63 ± 0,66 y = 0,222 x + 1,721
R2 = 0,934

25
3) Les effets indésirables
HMA provoque une dyspnée et une diminution de l’activité motrice lorsque la dose
administrée est supérieure à 200 mg/kg. Pour une dose de 800 mg/kg, 20 % des animaux sont
affectés par ce trouble. Il est de 40 % pour les animaux ayant reçu HMA à 1600 mg/kg et
3200 mg/kg (Tableau VII).
A la dose de 800 mg/kg, la dyspnée dure 15 minutes et les animaux restent immobiles
pendant 5 minutes.
A la dose de 1600 mg/kg, la dyspnée dure 30 minutes et l’activité motrice des animaux est
réduite à 10 minutes.
Chez les animaux ayant reçu HMA à la dose de 3200 mg/kg, la dyspnée dure 60 minutes et la
diminution de l’activité motrice dure 25 minutes. Après ces délais, pour chaque dose étudiée,
les animaux reviennent à leur état normal.

Tableau VII: Manifestations et durées des effets indésirables observées lors de

l’administration des doses élevées du produit codé

Manifestations Dyspnée Durée Baisse de la motricité durée Animaux

Doses (mg/kg) atteints
800 + 15 mn + 5 mn 20%
1600 + 30 mn + 10 mn 40%
3200 + 60 mn + 25 mn 40%

26
DISCUSSION
 DISCUSSION

L’objectif de la présente étude est d’évaluer l’activité antiulcéreuse de HMA-

FHM/VHM/119002/M12. Les résultats obtenus montrent que les trois hypothèses émises sont
vérifiées telles que le pouvoir antisécretoire, le pouvoir mucoprotecteur et le pouvoir
cicatrisant de HMA.

Différents médicaments sont utilisés pour protéger la muqueuse gastrique face aux
facteurs agresseurs dans l’estomac (INAS et coll., 2011). Dans cette étude, la protection est
étudiée en induisant l’ulcère avec l’éthanol absolu qui provoque un trouble de la circulation
sanguine au niveau de la muqueuse gastrique. Il active la libération des substances
vasoactives comme l’histamine, provoque une hyperhémie due à une lésion nécrotique de la
muqueuse et à une diminution de la perméabilité vasculaire (JYOTY G. et coll., 2012). Or
l’administration de HMA par voie orale a diminué la surface de cette hyperhémie provoquée
par l’éthanol. De ce fait, HMA protège la muqueuse contre l’éthanol. Nous avons remarqué
également que suite à son administration par voie orale, un film blanchâtre recouvre la
surface du corps de l’estomac. Ce film protègerait la muqueuse face aux agressions de
l’éthanol. Il pourrait être dû à la présence des tanins dans HMA, qui sont des astringents
capables de précipiter les protéines de la muqueuse rendant la muqueuse résistant aux agents
irritants (BORELLI F. et IZZI A.A., 2000). En plus, l’effet protecteur pourrait être également
attribué à la présence des flavonoïdes, des leucoanthocyanes et des saponines. En effet, les
flavonoïdes et les leucoanthocyanes augmentent la quantité de mucus dans l’estomac par une
biosynthèse des « mucopolysaccharides », un des composants du mucus (BORELLI et IZZI.
A.A., 2000) et le taux en prostaglandine (DASHPUTREN. L. et NAIKWADEN. S., 2011) qui
est une molécule appartenant aux facteurs protecteurs de la muqueuse (JYOTI G. et coll.,
2012). Quant aux saponines, grâce à sa propriété surfactant, cette espèce chimique stimule la
sécrétion de mucus (VENU K. et coll., 2011): ce qui est bénéfique pour l’estomac car l’action
protectrice du mucus dépend non seulement de sa structure en gel mais aussi de la quantité et
de l’épaisseur de la couche recouvrant la surface de la muqueuse. La résistance de la
muqueuse face aux agresseurs endogènes comme l’acide et la pepsine stimulés par des
agents irritants comme l’alcool et les AINS est attribuée à cette architecture particulière
(IYYAM P.S., 2010).

27
 Le pouvoir mucoprotecteur de HMA face à l’agression de l’éthanol serait donc
attribué à la présence de flavonoïdes, des leucoanthocyanes et des saponines qui augmentent
la sécrétion de mucus et des prostaglandines qui sont tous des agents protecteurs. En plus, le
film blanc, dû à la présence des tanins, qui recouvre la paroi gastrique le protège contre les
agents agresseurs.

Cette protection de la muqueuse gastrique favorise la cicatrisation des lésions au

niveau de la muqueuse et évite une récurrence (JYOTI G. et coll., 2012). Dans le cas de
HMA, le pouvoir cicatrisant a été évalué sur les lésions provoquées par une administration
répétée de l’indométacine, un inhibiteur de la cyclooxygenase COX-2. Or, cette réaction
enzymatique aboutit à la libération des prostaglandines (JYOTI G. et coll., 2012). Son effet
est de maintenir le flux sanguin dans la muqueuse, répare les dommages et stimule la
production de mucus (HARSHALDA T. et coll., 2011). Les dommages induits par les AINS
varient d’une irritation sévère de l’ulcère à une perforation, cette irritation survient au niveau
de l’épithélium de la muqueuse gastro-intestinale (HULIGOL S.V. et coll., 2012). Nos
résultats montrent que HMA accélère et favorise la cicatrisation qui pourrait être le résultat de
sa propriété mucoprotectrice ce qui permet à l’ulcère de se cicatriser rapidement.

D’autre part, une des causes de l’ulcère est l’augmentation et l’accumulation de

l’acide dans l’estomac; ce qui nous a incité à étudier l’effet antisécretoire et/ou antiacide de
notre produit. Comme le pH de HMA est neutre, de ce fait, l’effet antiacide par une réaction
de neutralisation ou tampon est à écarter. Etant donné que la ligature du pylore provoque une
sécrétion accrue d’acide 4 heures après la ligature de l’organe (ALUMETS J. et coll., 1982),
il s’ensuivrait alors que la diminution du taux d’acidité par le biais de cette méthode est due à
l’action de HMA sur la sécrétion de H+ selon les résultats. Nous pouvons en déduire que
HMA inhibe la sécrétion de l’ion H+.
Sachant que la sécrétion acide provient d’une stimulation des neuromédiateurs au niveau de
leurs récepteurs spécifiques, les études in vitro ont été effectuées pour démontrer les
interactions de HMA vis-à-vis de l’acétylcholine et de l’histamine. Le but est d’aboutir à une
relation neurohormone et sécrétion gastrique (BUTLER D.E., 1970). Les résultats des tests in
vitro montrent que HMA inhibe d’une manière non compétitive les effets de l’acétylcholine
et de l’histamine en déplaçant vers la droite les courbes effets-concentrations de
l’acétylcholine et de l’histamine avec une réduction de l’effet maximal. Ce qui nous permet
de dire que, par analogie, la sécrétion acide liée à la voie cholinergique et histaminergique est

28
inhibée par HMA, sans pour autant interagir au niveau des récepteurs responsables de la
sécrétion d’où l’augmentation du pH lors de l’étude in vivo. De son pouvoir anti-
contracturant, HMA pourrait être utilisé dans un traitement symptomatique c’est-à-dire contre
les crampes gastriques lors des crises dues à l’ulcère gastrique.
Il est aussi probable que par la formation du film, le passage de l’acide vers le corps de
l’estomac est limité (NIKHIL R.et coll., 2011), ce qui contribuerait également à la baisse de
l’acidité du suc gastrique récolté.

Par ailleurs, l’ulcère peut être également provoqué par Helicobacter pylori, une
bactérie bacille GRAM- résistant à l’acide et microaérophile (KUMAR S.et coll., 2012). Son
action pourrait être inhibée par les tanins et les flavonoïdes. L’effet antimicrobien des tanins
est lié à leurs capacités à inactiver les adhésions microbiennes, les enzymes, l’enveloppe de
cellules, etc... Tandis que les flavonoïdes composant majoritaires de la fleur de Cistus
laurifolius et du thé ont montré une activité antibactérienne par le biais d’une étude in vitro
(NJUME C. et coll., 2009). Comme notre produit contient à la fois des tannins et des
flavonoïdes, la propriété anti-Helicobacter pylori de HMA pourrait se produire. D’autre part,
les flavonoïdes augmentent le taux en prostaglandines (DASHPUTREN. L. et
NAIKWADEN. S., 2011) qui favorise une vasodilatation entraînant une diapédèse des
cellules impliquées dans l’inflammation contre l’agression de ces bactéries (CUZZOCREA et
coll., 1998).

Afin de promouvoir l’utilisation des plantes médicinales en thérapeutique, des tests de

toxicité sont d’une importance capitale. Ces tests consistent à observer et à noter les états des
animaux qui ont reçu une dose largement supérieure à la dose active. Les effets indésirables
qui apparaissent sont la dyspnée et la diminution de l’activité motrice. Ces effets pourront être
dus au fait que les anticholinergiques agissent sur d’autres organes, par une non spécificité
d’action (BUTLER D.E. et coll., 1970). Etant donné que les animaux ont retrouvé leur état
normal, ces effets peuvent être négligés.

29
CONCLUSION
 CONCLUSION

HMA-FHM/VHM/119002/M12 possède une activité antiulcéreuse en diminuant

l’acidité du suc gastrique, en protégeant la muqueuse contre les facteurs agresseurs et par la
suite accélère la cicatrisation des lésions ulcéreuses. Ces effets peuvent être dus à la présence
des flavonoïdes, des anthocyanes et des leucoanthocyanes, des tanins, des saponines.
A forte dose, HMA perturbe la motricité et le système respiratoire de manière
réversible.
En perspective d’avenir, la ou les molécules actives de HMA seront isolées et
identifiées afin d’élucider leurs mécanismes d’action.

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WEBOGRAPHIE :
http://hepatoweb.com/DES/exposes/DES04_2006_VALLOT/Secretion_acide.pdg lu
le 4 Mai 2013

35
 Évaluation DE L’Activité ANTIULCEREUSE DE HMA-FHM/VHM/119002/M12
CHEZ LE RAT

Auteur: RAMAHANDRINORO Laboratoire : Laboratoire de Pharmacologie

Toky Victoire Générale, de Pharmacocinétique et de
Année: 2012-2013 Cosmétologie
Adresse: lot IPT 256 B BP: 8357
Antanety Bemasoandro Email: frandimby@gmail.com
Numéro de téléphone: +261330608734 Département de Physiologie Animale et de
Email: vickaela@gmail.com Pharmacologie
Encadreur: Pr. RANDIMBIVOLOLONA Faculté des Sciences
Fanantenanirainy Université d’Antananarivo

RESUME
Le but de la présente étude est d’évaluer l’activité antiulcéreuse de HMA-FHM/VHM/119002/M12 chez le
rat. L’étude a été effectuée suivant des modèles in vivo en provoquant des hyperhémies par l’éthanol absolu; en
stimulant la sécrétion acide par la ligature du pylore et en induisant l’ulcère avec l’indométacine. Des études in
vitro ont été également appliquées utilisant le fundus isolé contracté avec de l’acétylcholine et de l’histamine.
Les familles chimiques présentes dans HMA sont : les tanins, les flavonoïdes, les saponines, les
anthocyanes et les leucoanthocyanes.
Les résultats obtenus sur HMA montrent qu’il possède une activité mucoprotectrice en réduisant jusqu’à
83,85 ± 5,62% la surface des hyperhémies provoquées par l’éthanol absolu. Après une induction de l’ulcère
avec l’indométacine à 30 mg/kg, il accélère la cicatrisation après sept jours de traitement. Elle est caractérisée
par une réduction de la lésion dans la muqueuse de 2,87 ± 0,06 mm2 chez les témoins à 0,28 ± 0,03 mm2 à la
dose de 200mg/kg. L’effet antisécretoire de HMA est marqué par une baisse de l’acidité liée à une
augmentation de pH du suc gastrique qui passe de 2,24 ± 0,05 à un pH de 3,47 ± 0,23.
De plus, HMA est capable d’inhiber d’une manière non compétitive les effets contracturant de
l’acétylcholine et de l’histamine.
Mots clés : hyperhémies, suc gastrique, acidité, lésions ulcéreuses

ABSTRACT
The aim of this study was to evaluate the antiulcer activity of HMA-FHM/VHM/119002/M12 on rats. The
study was carried out in vivo using absolute ethanol to induce hyperemia, pylorus ligation to induce acid secretion,
indomethacin to induce ulcer and in vitro model using isolated fundus with acetylcholin and histamine.
HMA contains: tanins, flavonoïdes, saponins, anthocyanes and leucoanthocyanes.
The results obtained on HMA show that it has a protective activity on the stomach’s wall. This protective effect
is marked by a reduction of surface of the hyperemia induced by the ethanol, up to 83.85 ± 5.262%. It accelerates
the ulcer healing induced by indométhacin in seven days of treatment, characterized by the reduction of the lesion
in stomach wall from 2.87 ± 0.06 mm2 for the untreated rats to 0.28 ± 0.03 mm2 with the dosage of 200 mg/kg.
The antisecretory effect of the extract is marked by the fall of acidity of the gastric juice from 2.24 ± 0.05 to a pH
of 3.47± 0.23 with the dosage of 200 mg/kg.
HMA is able to inhibit fundus contraction due to acetylcholine and histamine.

Key words: hyperhemia, gastric juice, acidity, lesions ulcerous