ANNEE ACCADEMIQUE

2021-2022

FACULTE DES SCIENCES

DEPARTEMENT DE BOTANIQUE

BIOLOGIE ET PHYSIOLOGIE VEGETALES

MESURE DE L’ACTIVITE DE L’AUXINE-

OXYDASE

TP DE PHYSIOLOGIE DU DEVELOPPEMENT CHEZ LES

VEGETAUX

| BOT 336 |
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 PARTICIPANTS:

HALLO Kokouvi John 528697

DOGBE KODJO HENOC 535911

TOURE Péyotan Samuel Xavier 541569

SEDZRO Laetita Afi Massan 541555

DOVI Manuella Punya 526838

GNANDJA Kansouguidame 524993

DJONNA Kougnima 526375

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 SOMMAIRE

INTRODUCTION

I-MATERIELS ET PROTOCOLE EXPERIMENTALE

A-MATERIELS

B-PROTOCOLES EXPERIMENTALES et NOTIONS

II-RESULTATS

III- ANALYSE ET INTERPRETATION DES RESULTATS

CONCLUSION

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 INTRODUCTION
Les phytohormones sont des substances qui régulent le développement des végétaux. Pour chaque hormone, il
existe un enzyme spécifique qui procède à sa dégradation une fois que celle-ci n’est plus nécessaire. L’auxine-oxydase
est un enzyme qui dégrade l’auxine. Par différentes expérimentations, nous allons mesurer l’activité de ce dernier.

I-MATERIELS ET PROTOCOLE EXPERIMENTALE

A-MATERIELS
Auxine-oxydase

4 tubes à essai

Chronomètre

Balance

Réactif de Sarkowsky

Solution d'AIA et graines de lentilles

Mortier

Frigo

Support de tubes à essai

Centrifugeuse

Spectrophotomètre

B-PROTOCOLES EXPERIMENTALES et NOTIONS

Pour avoir les enzymes végétales, on se sert de radicules de lentilles mises en germination au préalable. Les
radicules sont broyées puis centrifuges. Le surnageant est recueilli pour être utilisé.
L’AIA est une substance photolabile. De ce fait on le conserve au froid ainsi que pour éviter la désagrégation des
enzyme végétales par la chaleur émise lors du broyage, le mortier et Pilon utilisé sont également conserve à froid.
L’activité enzymatique correspond à la quantité de substrat dégradé par unité de temps. Ainsi, on va procéder à la
mesure sur 4 temps différents, à 0 s, 15 s, 5 min et 10 min.
On prépare donc 4 tubes à essais contenant chacun 1 ml d’extraits végétal (contenant les enzymes) et 1 ml d’AIA.
Par intervalles de temps on ajoute le réactif de Salkowski dans les tubes pour initier la coloration de l’AIA
qu’ils contiennent
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T1 : 1 ml d’extrait + 1 ml d’AIA + 1 ml de Salkowski juste après le mélange.
T2 : 1 ml d’extrait + 1 ml d’AIA + 1 ml de Salkowski 15 secondes après le mélange.
T3 : 1 ml d’extrait + 1 ml d’AIA + 1 ml de Salkowski 5 minutes après le mélange.
T4 : 1 ml d’extrait + 1 ml d’AIA + 1 ml de Salkowski 10 minutes après le mélange.
Lorsqu’on ajoute le réactif, il faut agiter le tube pour homogénéiser la solution. On passe en suite au
spectrophotomètre pour mesurer les absorbances des tubes ce qui nous permettras de calculer l’activité
enzymatique (l’absorbance doit être mesurée entre un ou deux minutes après l’initiation pour permettre aux
enzymes d’avoir le temps de catalyser l’AIA au delà de deux minutes, on considère qu’elles ont déjà commencé et
donc les résultats seront erronés.)

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 II-RESULTATS

Le spectrophotometer nous donne les absorbances suivantes :

T1 : Abs=0,543
T2 : Abs=0,489
T3 : Abs=0,439
T4 : Abs=0,457
Pour connaitre les concentrations on se servira de cette formule trouvé grace au spectrophotometer.

F(x)=0,0150422x + 0,122498

F(x)=Abs et x=concentration(c)

> Abs=0,0150422C + 0,122498

𝑨𝒃𝒔−0,122498
>𝑪= 0,0150422
= concentration

L’activité enzymatique se calculi par la formule suivante :

∆𝒎 𝒎𝒕 −𝒎0
AE= ∆𝒕 = 𝒕−𝒕0
pour 𝒕0 = 0; en remplaçant m par 𝒎0 = [𝑨𝑰𝑨]0 𝒙𝑽𝑨𝑰𝑨 ; 𝒎𝒓 = [𝑨𝑰𝑨]𝒓 𝒙𝑽𝑨𝑰𝑨

𝑽𝑨𝑰𝑨 ([𝑨𝑰𝑨]0 -[𝑨𝑰𝑨]𝒓 )

>AE= 𝑽𝑨𝑰𝑨 = 1 ml
𝒕

T1 : Abs=0,543 ; [𝑨𝑰𝑨]𝒓 =27,95 mg/L ; AE=0

T2 : Abs=0,489 ; [𝑨𝑰𝑨]𝒓 =24,36 mg/L ; AE=𝟏, 𝟒𝟒. 𝟏𝟎−𝟐mg/min

T3 : Abs=0,439 ; [𝑨𝑰𝑨]𝒓 =21,04 mg/L ; AE=𝟏, 𝟑𝟖𝟐. 𝟏𝟎−𝟑mg/min

T4 : Abs=0,457 , [𝑨𝑰𝑨]𝒓 =22,23 mg/L ; AE=𝟓, 𝟕𝟐. 𝟏𝟎−𝟒mg/min

III- ANALYSE ET INTERPRETATION DES RESULTATS

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 La différence de concentration d'AIA entre les tubes s'explique par une activité de l'enzyme : auxine-oxydase
qu'on a ajouté sur la solution d'AIA. En effet, l'Amine-oxydase aurait dégradé l'auxine au cours de sa migration et
donc son activité se résume à la quantité d'auxine oxydée par unité de temps.

T1 représente l'AIA sans activité enzymatique ; plus le temps passe plus les enzymes ont catalysé de l’AIA. C’est ce
que révèlent nos résultats. Dans le tube T2 après 15 secondes seulement d’activité, les enzymes ont dégradé environ
13 % de la concentration en AIA du milieu, près de 25 % en 5 minutes. Dans le tube T4 , les enzymes devraient norma-
lement dégrader plus d’AIA que dans les tubes précédents puis arriver à saturation parce qui’il se serait écoulé 10
minutes. Mais le tube T4 présente anormalement une quantité de 20,46 % dégradé par les enzymes ce qui est infé-
rieur au tube précédant. Il pourrait s’agir d’une erreur de manipulation de notre part ayant introduit par mégarde
une source extérieur d’AIA ou une substance permettant sa restructuration.

CONCLUSION :

Les enzymes végétales sont très importants pour les végétaux. En effet, ces derniers interviennent pour
dégrader les phytohormones lorsqu’elles ne sont plus nécessaires à un point de la plante et leur activité
peut être mesurée. La maîtrise des enzymes végétale peut être un atout majeur dans certaines plantations
exotiques et serres. Couplée à la maîtrise des phytohormones, on peut également lutter contre certaines
plantes envahissantes.

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