Licence MPC L3 S5

« Chimie Organique Avancée »

PRINCIPES DE
SPECTROSCOPIE UV-VISIBLE

Pr Jean-François Nicoud Faculté de Chimie Université de Strasbourg

1.  Introduction: le spectre électromagnétique
2. Spectres UV-visible, spectres électroniques
3. Appareillage
4. Applications
5. Types de bandes d’absorption
6. Techniques expérimentales

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 James Clerk Maxwell

L’onde lumineuse est composée d’un champ magnétique B et

d’un champ électrique E perpendiculaires entre eux
(schéma pour une polarisation plane)
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 Les rayons ultraviolets sont plus énergétiques que les
rayons du spectre visible. Ceux qui proviennent du soleil
sont nocifs pour la peau et on doit donc s’en protéger à
l’aide de crèmes qui en absorbent la plus grande partie.
La couche d’ozone est déjà un premier rempart efficace
contre ce type de lumière nocive. Les néons des boîtes
de nuit ou des détecteurs de faux billets émettent des
ultraviolets invisibles à l’œil, mais proches du visible,
donc peu nocifs
Les longueurs d’onde du rayonnement UV s’éche-
lonnent de 10 nm à 400 nm

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 Les couleurs du spectre visible

400nm 800nm

La région du spectre électromagnétique détectée par l’œil,

appelée « le spectre visible », s'étend de 400 nm à 800 nm
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La couleur est la manifestation de l’absorption de lumière
visible (λ de 400 à 800 nm, soit de 0,4 à 0,8 µm).

Les substances qui absorbent seulement :

* dans l’UV (ultra-violet) proche (λ = 200 à 400 nm)
* dans l’IR (infra-rouge: λ > 800 nm)
apparaissent incolores

Toutes les substances absorbent dans l’UV lointain

(λ < 200 nm).

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 Il existe 3 couleurs primaires : Bleu, Jaune et Rouge.
C’est en les mélangeant que l’on obtient d’autres teintes.
Il y a 3 couleurs secondaires : L’Orange, le Vert et le
Violet. Elles sont obtenues en additionnant 2 couleurs
primaires.
Et 6 couleurs tertiaires résultent du mélange des
couleurs primaires avec les secondaires.

Toutes ces couleurs peuvent encore

s’additionner. Elles donnent des
nuances que l'on retrouve dans la
« roue chromatique »

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 Un spectre UV (ou visible) rend compte de l'absorption de
radiations UV (ou visibles) par une molécule.

A chaque rayonnement de longueur d’onde λ est associée une

énergie E
Ainsi pour la différence d'énergie ΔE = E2 - E1
il correspond une longueur d'onde λ donnée par la relation

hc
ΔE =
λ

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L’énergie disponible par les rayonnements UV-visible
permet des transitions électroniques au sein de molécules
organiques: c.a.d. le passage d’un électron d'une orbitale
d'énergie E1 à une orbitale d'énergie E2 plus élevée.
On dit qu’on passe dans un « état excité »

Schéma d’une transition électronique

Niveau électronique E2

Niveau électronique E1

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 Définitions

A est aussi appelé « densité optique » ou D.O.

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 Définitions

I
%Transmission (T) = X 100
IIo

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 Loi de Beer-Lambert : A = ε l c

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 Absorbance (A)

λmax

Transmission
Haute Faible
énergie Longueur d’onde λ (nm) énergie
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 Absorbance (A)

λmax

Transmission
Haute Faible
énergie Longueur d’onde λ (nm) énergie
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La région ultraviolette s'étend de 10 nm à 400 nm mais les
spectromètres UV usuels ne permettent le tracé des spectres
que pour les longueurs d'onde comprises entre 200 nm et
400 nm (proche UV)

La région du visible s'étend de 400 nm à 800 nm; cette

gamme de mesure est atteinte avec le même type de
spectromètre que celui utilisé en UV, par la simple
commutation de la source lumineuse

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 Les spectromètres UV-visible
Les spectromètres UV-visible comportent une source de
lumière suivie d’un monochromateur, d’un compartiment pour
placer les échantillons, puis d’un dispositif de réception
associé à un dispositif de traitement des données permettant
au final le tracé d’un spectre

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* Lampe à décharge au deutérium utilisée dans le domaine de
190 à 400 nm avec un maximum d'émission à 652,1nm.

Divers modèles de lampes

au deutérium

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•  Lampe à filament de tungstène pour la région allant
de 350 à 800 nm

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•  Lampe à décharge au xénon utilisée dans le domaine
UV et visible
(Lampe très énergétique qui fonctionne sous forme de flash, juste
au moment de faire une mesure)

Lampes flash au xénon Oriel

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 Spectrophotomètre UV-Visible

PrPr Jean-François
Jean-François Nicoud
Nicoud Faculté
Faculté dede Chimie
Chimie Université
Université de Strasbourg
Louis Pasteur
PrPr Jean-François
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Faculté dede Chimie
Chimie Université
Université de Strasbourg
Louis Pasteur
PrPr Jean-François
Jean-François Nicoud
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Faculté dede Chimie
Chimie Université
Université de Strasbourg
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Spectrophotomètre UV/Visible/NIR à fibres optiques

PrPr Jean-François
Jean-François Nicoud
Nicoud Faculté
Faculté dede Chimie
Chimie Université
Université de Strasbourg
Louis Pasteur
 Spectrophotomètre UV-Visible pour faibles volumes

Caratéristiques

Large gamme spectrale : 220-750 nm

Précision : 1 nm
Bande passante : 3 nm
Sensibilité : détecte les acides
nucléiques à partir de 2 ng/µl,
Jusqu’à 3700 ng/µl sans diluer
Précision photométrique : 0,003
absorbance

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 Analyse qualitative :
La spectroscopie UV-visible fournit généralement moins de
renseignements sur la structure moléculaire que les autres
méthodes spectrométriques comme la Résonance
Magnétique Nucléaire (RMN) ou la spectroscopie infra-rouge
(IR).
Néanmoins on l’utilise pour une confirmation de structure, soit
par une identification grâce à des règles empiriques
performantes soit en procédant à des comparaisons avec des
spectres de référence.

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 Analyse quantitative :
L’utilisationde la loi de Beer-Lambert, lorsqu’elle s’applique,
est une très bonne méthode d’analyse quantitative. En effet
nous avons vu que l’absorbance d’une solution A (ou sa
densité optique D.O.) est proportionnelle à la concentration c
de la solution étudiée.
Donc, quand on connaît l’ε du produit analysé à la longueur
d’onde utilisée, toute mesure de A équivaut à une mesure de c.

Remarque : la loi de Beer-Lambert ne s’applique bien que pour des faibles

valeurs de c
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Chromophores : ce sont des groupes d’atomes liés dans une
molécule et qui sont responsables de pics d’absorption
importants dans l'ultraviolet ou le visible.

Groupement auxochrome : Groupement qui, introduit dans

un système chromophorique provoque, soit une augmentation
du λmax d’absorption (effet bathochrome), soit une diminution
du λmax (effet hypsochrome)
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 σ*
Etat Orbitales
excité anti-liantes
π*

n σ*
n π*
Etat
fondamental
π
π π* Orbitales
liantes
σ* σ
σ
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 On distingue 4 types de bandes d'absorption dans les
spectres UV des molécules organiques. Elles sont
caractérisées par la longueur d'onde de leur maximum
d'absorption ( λmax ) et par l'intensité de ce maximum

Bandes R :
Elles sont dûes à une transition électronique n → π*.
Lorsqu'un hétéroatome, porteur de doublet(s) non-apparié(s) n,
fait partie d'un système insaturé ou est conjugué avec un tel
système, une transition de faible énergie peut se produire :
passage d'un électron n non liant dans une orbitale anti-liante π*
Ces bandes R présentent en général une faible absorption
molaire avec le plus souvent εmax < 100 M-1.cm-1

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Bandes K (Konjugierte) :
Elles sont dûes à une transition électronique π → π*
Elles apparaissent dans les spectres de molécules
possédant un système de doubles liaisons conjuguées :

C C C C

double simple double

conjugaison

Caractéristiques de ces bandes K : une forte absorption

molaire : εmax > 10 000 M-1.cm-1
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Bandes B (Benzénoïdes) :
Egalement dûes à une transition électronique π → π*
Elles apparaissent dans les spectres de molécules
aromatiques ou hétéroatomiques
Caractéristiques de ces bandes B :
εmax < 1 000 M-1.cm-1 et structure fine

Bandes E (Ethyléniques) :
Egalement dûes à une transition électronique π → π*
Apparaissent dans les spectres de molécules aromatiques
substituées par des groupements auxochromes :
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 Des groupements liés au cycle aromatique par un
hétéroatome porteur de doublets libres n sont des
substituants auxochromes

O R X

avec X =
halogène
…et… etc..

Caractéristiques de ces bandes E : les εmax varient entre 2

000 et 14 000 M-1.cm-1

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 Maximum d’absorption UV de l’éthène et de polyènes

λmax Energie
Nom Formule Structurale
(nm) (kJ/ mol)

éthène CH 2 =CH 2 165 723

buta-1,3-diène CH 2=CH-CH=CH 2 217 551

(3E)-hexa-1,3,5-triène CH 2 =CH-CH=CH-CH=CH 2 268 447

(3E, 5E)-octa CH 2=CH(CH=CH) 2 CH=CH 2 290 384

-1,3,5,7-tétraène

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 Spectre UV du 2,5-diméthylhexa-2,4-diène

λmax = 242 nm
εmax = 13100 M-1. cm-1

Longueur d’onde (nm)

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 Spectres UV de polyènes conjugués

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 A propos du β-carotène (provitamine-A)
Les caroténoïdes constituent une classe importante de pigments
naturels. Ils sont responsables de la couleur jaune ou orangé de
nombreux fruits et légumes. Le β-carotène est abondant dans les
carottes (bien sûr), mais aussi des citrouilles, abricots et nectarines.
Les légumes de couleur vert foncé comme les épinards et les
brocolis en sont également une source importante. Dans ces
légumes, la couleur orange est masquée par la couleur verte intense
de la chlorophylle. On peut s’en rendre compte sur les feuilles en
automne ; quand les feuilles meurent en automne, la chlorophylle
disparaît peu à peu, et la couleur jaune/orangé/rouge des
caroténoïdes, plus stables, prend le dessus.

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Le β-carotène est un polyène conjugué naturel

11 doubles liaisons conjuguées

Des pastilles de β-carotène sont vendues dans

les para-pharmacies comme antioxydant
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Spectre d’absorption UV-visible du β-carotène

λmax = 497 nm εmax = 133000 M-1. cm-1

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 Spectre UV-visible de la chlorophylle a
La chlorophylle a absorbe fortement à 430 nm (bleu) et 660 nm (rouge)

Molécule de chlorophylle a
Vert : magnésium Bleu: azote
Rouge: oxygène

La chlorophylle est un pigment présent dans toutes les plantes vertes sur Terre. On
estime que près d’un milliard de tonnes de chlorophylle sont synthétisées par les
plantes chaque année sur toute la surface de la Terre.
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Lorsqu’un couple donneur/accepteur
est placé en positions conjuguées,
cela conduit à une absorption
intense décalée vers le rouge, même
pour une petite molécule.

accepteur

donneur

4-nitroaniline
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 Les cellules :
La plupart du temps, on utilise des cellules dont le trajet optique
est égal à 1 cm (ceci permet d’avoir l = 1 pour l’application de la loi de
Beer-Lambert)
Elles doivent être en quartz et pas en verre pour λ <310nm
Les cellules doivent être maintenues très propres,
particulièrement les faces polies car elles sont placées sur le trajet
lumineux.

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Les solvants :

Ils doivent bien dissoudre le produit et être transparents dans

la région examinée

L'éthanol à 95 % est le solvant le plus utilisé.

Il est suffisamment bon solvant pour de nombreux
composés organiques

Les hydrocarbures sont des solvants utilisés pour des

substances non polaires ; ils doivent être purifiés
soigneusement pour éliminer toute trace de substances
aromatiques ou éthyléniques
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Les solvants :

L'eau distillée et les acides sont de bons solvants :

leur transmission est très bonne

Les solvants ont tout de même des effets : leur

polarité exerce une influence sur les spectres
d’absorption; on observe dans certains cas des
changements importants de λmax et d’εmax : on parle de
solvatochromie

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 Les solvants :

Exemple de solvatochromie : la couleur d’une solution d’un

même composé dépend de la nature du solvant

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