20/10/2014

PLAN
Introduction

Chap I: Structure des enzymes

Introduction à l’enzymologie Chap II: Cinétique enzymatique

Chap III: Inhibition de l’activité enzymatique

octobre 14

INTRODUCTION
ENZYMOLOGIE?
L’enzymologie est la partie de la biochimie qui
étudie les propriétés structurales et fonctionnelles
des enzymes.
Elle s’intéresse aussi à décrire la vitesse des
réactions catalysées par les enzymes (cinétique
enzymatique).
INTRODUCTION
Une enzyme est une macromolécule de structure
protéique dont la fonction est de catalyser des
réactions biochimiques.
A l’origine on avait pensé que cette propriété
était propre au phénomène du vivant.
Aujourd’hui, il est bien acquis que l’activité
catalytique des enzymes peut s’exercer dans un tube
à essai en dehors de tout système vivant.

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INTRODUCTION
Historique
1730: La digestion est un phénomène plus
chimique que mécanique.
1850: Pasteur démontra que la fermentation du
sucre en alcool par la levure est catalysée par une
substance qui existe dans la levure.
INTRODUCTION
1897: Edouard Buchner un chimiste allemand a
extrait de la levure les premières enzymes.
1903:Victor Henri un chimiste français a publié le
premier modèle mathématique qui décrivit avec
succès les résultats des cinétiques enzymatiques.

INTRODUCTION INTRODUCTION
1929: La 1ère enzyme purifiée et cristallisée est
Maud Menten:
Menten: 1879-
1879-1960
l’uréase.
Leonor Michaelis:
Michaelis: 1875-
1875-1949

1913: Michaelis et Menten dans une publication

plus renommée ont repris et adapté le travail de
Henri pour pouvoir calculer facilement les
paramètres de la cinétique enzymatique. L’équation
de Michaelis-Menten, plus justement l’équation de
Henri-Michaelis-Menten, constitue aujourd’hui la
clef de voûte de l’analyse enzymatique.

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Chap I: Structure des enzymes
Objectifs
1. Expliquer les différents types de classifications
des enzymes et dresser les différents groupes.
2. Décrire la structure des enzymes et des
coenzymes.
3. Expliquer le mode d’action des enzymes.
4. Citer les facteurs qui influencent la cinétique
enzymatique.
5. Expliquer le mode d’action des différents facteurs
influençant la cinétique enzymatique.
Chap I: Structure des enzymes
Un site actif : la partie de l’enzyme qui fixe le
substrat.
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Chap I: Structure des enzymes
1. Définitions
Une enzyme: Catalyseur biologique très puissant.
Elle augmente la vitesse des réactions chimiques,
sans en modifier l’équilibre.
Un substrat (S): est la molécule qui est
transformée sous l’action de l’activité de l’enzyme.
Un produit (P): est la molécule qui apparaît au
cours d’une réaction catalysée par l’enzyme.
Chap I: Structure des enzymes
2. Propriétés et caractéristiques des enzymes
Les enzymes agissent en très faible quantité.
Ex: une molécule de catalase peut hydrolyser 5
millions de molécules d’H2O2 en une min dans des
conditions de pH et de température physiologiques
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Chap I: Structure des enzymes Chap I: Structure des enzymes

Les enzymes ne sont pas consommées au cours Spécificité liée à la réaction: Spécificité étroite
de la réaction.
Ex: Comme les catalyseurs chimiques, elles se
retrouvent intactes à la fin de la réaction
Les enzymes sont spécifiques.
Ex: Une enzyme transforme un S donné (spécificité Spécificité vis à vis du substrat: Spécificité étroite
de substrat) grâce à une réaction donnée (spécificité
de réaction) Certaines E peuvent distinguer entre la forme D et
L ou entre la forme α et β: stéréospécificité

Chap I: Structure des enzymes Chap I: Structure des enzymes

Mode d’action des enzymes Ex:

Sans catalyseur: 18 kcal/mole d’H2O2

Catalyseur chimique (le platine): 11,7 kcal/mole
d’H2O2
Enzyme (catalase): 2 Kcal/mole d’H2O2

Les enzymes abaissent l’énergie d’activation

Elles ne modifient pas l’équilibre
Elles augmentent la vitesse de réaction

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Chap I: Structure des enzymes
Les enzymes sont régulables
Ex: L’activité catalytique de nombreuses enzymes
varie en réponse à des signaux métaboliques
(inhibiteurs, activateurs).
3. Structure des enzymes
Enzymes entièrement protéiques: holoprotéines
Chap I: Structure des enzymes
a. Les enzymes holoprotéiques
Ces enzymes sont des protéines globulaires.
Elles peuvent être formées:
d’une seule chaîne polypeptidique (la lysozyme)
de plusieurs chaînes identiques ou différentes (la
lactatedéhydrogénase)
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Chap I: Structure des enzymes
Enzymes formées de deux parties: hétéroprotéines
Une partie protéique: apoenzyme
Une partie non protéique: cofacteur
Apoenzyme
Intervient dans la spécificité, thermolabile.
Cofacteur
Effectue la réaction chimique, thermostable.
Chap I: Structure des enzymes
La notion de site actif
Le site actif est constitué de deux régions:
Site de fixation: responsable de la liaison avec le
substrat et de son orientation correcte vis-à-vis des
groupements catalytiques,
Site catalytique: responsable de la transformation
du substrat (rupture et formation de liaisons
chimiques).
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Chap I: Structure des enzymes Chap I: Structure des enzymes

Relation entre la structure spatiale et la fonction
catalytique
Ex: la trypsine (enzyme pancréatique)

Le départ de
l’hexapeptide,
fortement chargé (-) par
Remarque: Le site catalytique est composé d’un petit les 4 Asp, modifie la
nombre d’acides aminés (< 10). Les autres servent à conformation de la
maintenir une structure active du site catalytique protéine, en favorisant
(bonne position des AA les uns / autres). la formation d’hélice α.

Chap I: Structure des enzymes Chap I: Structure des enzymes

Interaction enzyme-substrat
Interaction enzyme-substrat:
Le site actif est
généralement situé dans Liaisons faibles (van der Waals, liaison hydrogène
une fente ou une cavité à et ioniques):spécificité et énergie d’activation
la surface de l’enzyme Interactions hydrophobes: stabilisation

La majeure partie de la cavité est constituée

d’AA hydrophobes (augmentation de la force de
liaison du substrat et de l’efficacité catalytique

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Chap I: Structure des enzymes Chap I: Structure des enzymes

Notion de complémentarité entre substrat et Hypothèse de Koshland (1958) : modèle de
enzyme (états de transition de réaction) l’ajustement induit entre l’enzyme et le substrat

Hypothèse de Fischer (1894) : modèle clé-serrure

L’enzyme a une
structure flexible et
Ce model a permis le
change de conformation
développement de
lors de la fixation du
l’enzymologie, mais
substrat:
suppose une structure •Augmentation de la spécificité
figée •Efficacité catalytique supérieure

Chap I: Structure des enzymes Chap I: Structure des enzymes

b.Enzymes hétéroprotéiques à Cofacteurs
Ions métalliques: Mg2+, Mn2+, Cu2+, Zn2+, Fe2+
Les cofacteurs peuvent être:
de nature inorganique: les ions métalliques,
de nature organique: les coenzymes.
Lorsque le coenzyme se lie à la protéine
enzymatique par une liaison covalente, on parle de Ex: Zn2+ dans l’alcool
groupement prosthétique. déshydrogénase forme
un pont entre l’enzyme
Lorsque la liaison est faible on parle de co-substrat et son substrat.

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Chap I: Structure des enzymes Chap I: Structure des enzymes

Coenzyme Mode d’action des coenzymes

Molécule indispensable à la réaction enzymatique.

La réaction se produit avec le coenzyme et non Ex:

avec la protéine (coenzyme = site catalytique).

L’apoenzyme intervient dans la spécificité (site de Le coenzyme n’est pas spécifique: plusieurs
fixation). enzymes différentes peuvent avoir le même
coenzyme

Chap I: Structure des enzymes Chap I: Structure des enzymes

3. Nomenclature et classification des enzymes
Lorsque l’enzyme utilise 2 substrats on les
Nomenclature fonctionnelle désigne tous les deux en indiquant:
Elle prend en compte le nom du substrat de
le substrat donneur de radicaux
l’enzyme et le type de réaction catalysée.
puis le substrat accepteur du
Pour désigner une enzyme on radical libéré, Ex:
Ex: le radical échangé, ATP-glucose
indique:
D’abord le nom du substrat,
Glucose-6- le type de réaction, phosphotransférase
Puis le type de réaction phosphate isomérase on ajoute enfin ase.
Glutamate pyruvate
catalysée, Pyruvate aminotransférase
On ajoute enfin le suffixe ase. carboxylase

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Chap I: Structure des enzymes
Nomenclature et classification officielle
Union Internationale de Biochimie a codifié la
nomenclature et la classification des enzymes sous
une nomenclature dite officielle.
Toutes les enzymes actuellement connues sont
répertoriées sous un numéro portant 4 nombres
séparés par des points et précédés de EC (Enzyme
Commission) soit (EC x1.x2.x3.x4).
Chap I: Structure des enzymes
4: Lyases (Coupure des liaisons par d’autres modes
autres que l’hydrolyse).
5: Isomérases (réaction conservant la formule brute
du composé).
6: Ligases (formation des liaisons entre C et un autre
métalloïde en utilisant l'énergie de l’ATP).
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Chap I: Structure des enzymes
La signification des nombres est la suivante:
X1: Le premier nombre pouvant varier de 1 à 6
indique le type de réactions.
1: Oxydoréductases (transfert d’électrons, d’atomes
d’hydrogène ou fixation d’oxygène)
2: Transférases (transfert d’atomes ou de groupes
d’atomes autres que ceux 1)
3: Hydrolases (Coupure des liaisons avec fixation de
radicaux H et OH issus de l’eau)
Chap I: Structure des enzymes
X2: Le deuxième désigne la sous-classe de l’enzyme
qui est définie suivant son mécanisme d’action.
X3: Le 3e nombre désigne la nature de la molécule
qui sert d'accepteur, lorsqu’il s’agit d’un transfert
d’électrons.
X4: Le 4e nombre est un numéro d’ordre dans le
groupe et dans le sous groupe.
Remarque: Lorsqu’une enzyme se termine par 99,
Remarque: 99, cela signifie
qu'elle est incomplètement caractérisée.
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Chap I: Structure des enzymes
Les classes d’enzymes
1.Les oxydoréductases
Lorsque les enzymes fixent préférentiellement des
électrons ou des hydrogènes sur des substrats elles
sont appelées des déshydrogénases ou des réductases.
Ex:
Alcool déshydrogénase (EC 1.1.1.1)
Aldéhyde déshydrogénase (EC 1.2.1.3.)
Pyruvate déshydrogénase (EC 1.2.4.1)
Cytochrome c oxydase (EC 1.9.3.1)
Chap I: Structure des enzymes
3. Les hydrolases
Ce sont des enzymes de dégradation.
Elles provoquent la coupure d'une molécule et
fixent les radicaux H et OH de l’eau sur les
valences libérées.
Ex:
Phospholipase A1 (EC3.1.1.32)
Trypsine du pancréas (EC 3.2.21.4)
Désoxyribonucléase I (EC3.1.4.5)
Phosphatase alcaline (EC3.1.3.1)
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Chap I: Structure des enzymes
2.Les transférases
Ces enzymes transfèrent des radicaux ou des
groupes d’atomes d’une molécule (substrat donneur)
à une molécule (substrat accepteur).
Ex:
ADN-méthyltransférases (EC 2.1.1.37)
Glycogène phosphorylase (EC 2.4.1.1)
Aspartate aminotransférase (EC 2.6.1.1)
Glucokinase (EC 2.7.1.2)
Chap I: Structure des enzymes
4.Les lyases ou synthases
Elles catalysent la rupture des liaisons C-C, C-N,
C-O, C-S
Ex:
Lysine décarboxylase (4.1.1.18)
Citrate synthase (4.1.3.7)
Fumarase ou fumarate hydratase (4.2.1.2)
Enolase (4.2.1.11)
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Chap I: Structure des enzymes
5.Les isomérases
Elles catalysent des changements de structure
dans une même molécule sans changer sa formule
globale (isomérisation Cis-trans, épimérisation,
déplacement de radicaux, etc.)
Ex:
Ribulose 5P 3-épimérase (5.1.3.2)
Triose phosphate isomérase (5.3.1.1)
Glucose 6-phosphate isomérase (5.3.1.10)
Phosphoglycérate mutase (5.4.2.1)
Chap II: Cinétique enzymatique
Objectifs
1. Reconnaître la cinétique d’une enzyme.
2. Définir la vitesse maximale (Vmax) et la
constante de Michaelis (Km).
3. Représenter graphiquement la cinétique d’une
enzyme en fonction des différentes variables.
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Chap I: Structure des enzymes
6.Les ligases ou synthétases
Elles forment des liaisons C-C, C-N, C-S, C-O,
O-P grâce à l'utilisation de l’énergie fournie par
l’hydrolyse concomitante d’un groupement
phosphate ou pyrophosphate de l’ATP.
Ex:
Pyruvate carboxylase (6.4.1.1)
Propionyl CoA carboxylase (6.4.1.3)
Glutamine synthétase (6.3.1.2)
5-phosphoribosylamine synthétase (6.3.4.7)
Chap II: Cinétique enzymatique
I. Rappel de l’ordre d’une réaction
Soit la réaction: A → P
La vitesse V de la
réaction est donnée par
la variation des
concentrations de A ou
de P en fonction du
temps.
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Chap II: Cinétique enzymatique Chap II: Cinétique enzymatique

La concentration des réactifs diminue linéairement
A- Réaction d’ordre 0
en fonction du temps.
Soit une réaction élémentaire: A → P
Une représentation de [A] = f(t) est une droite de
Si la réaction est d'ordre zéro, la vitesse de réaction pente –k.
ne dépend pas des concentrations des produits
intervenant dans la réaction. V = -d[A]/dt = k
d[A] = -kdt
L’intégration entre 0 et t donne : [A]t = [A]0– kt
[A]o est la concentration de A au temps t = 0
[A]t est la concentration de A au temps t. Pour une réaction d'ordre zéro, la constante de vitesse k a les dimensions
de [(mole/litre) temps-1] soit (M s-1 ).

Chap II: Cinétique enzymatique Chap II: Cinétique enzymatique

B- Réaction d’ordre 1
Une réaction de premier ordre est caractérisée par
Soit une réaction élémentaire: A → P une dépendance linéaire de ln[A] en fonction du
V = -d[A]/dt = k[A] temps t. La constante k est mesurée en [s-1].
d[A]/[A] = -kdt
ln [A]t = ln [A]o - kt
Intégration

ln [A]t - ln [A]o = -kt

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Application Chap II: Cinétique enzymatique

On réalise, sur une préparation pure en enzyme, la mesure de
II. Cinétique des réactions enzymatiques
l'apparition du produit en fonction du temps pour une
concentration en substrat de 0,1mol/L dont voici les résultats.

Temps (mn) 0 0,5 1 2 3 4 5

[Produit] (µmol) 0 109 205 405 489 534 555 Ce qui est fondamental dans les réactions
enzymatiques, c’est la combinaison E-S.
1. Tracer le graphique de la concentration de produit en Après formation du complexe, le substrat est
fonction du temps. transformé en produit et l’enzyme retrouve sa
2. Déterminer la vitesse initiale de la réaction enzymatique. structure initiale.
La V de la réaction enzymatique est influencée par:
[S], [E], température, pH, effecteurs.

Chap II: Cinétique enzymatique Chap II: Cinétique enzymatique

A. Notion de vitesse initiale On observe deux parties:
Mesure de l’apparition du produit au cours du temps 1) Pente constante => vitesse constante,
[S] >> [E] et temps 2) Apparition progressive d’un plateau => vitesse
court => on cherche à diminue: les conditions initiales ne sont plus
rester dans les conditions vérifiées, en particulier à cause de l’épuisement du
où [S] >> [P] substrat.
Dans ces conditions,
[S] et [ES] sont B.Influence de la concentration en enzyme sur la
considérés comme des vitesse
constantes: c’est la phase On augmente progressivement la concentration en
Conditions expérimentales: T°, pH, salinité……
stationnaire. enzyme, toutes choses égales par ailleurs.

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Chap II: Cinétique enzymatique Chap II: Cinétique enzymatique

A t1 (condition de C.Influence de la concentration en substrat
vitesse initiale), il y a C.1. Courbe de Michaelis-Menten
proportionnalité entre la
[E] et la quantité de
produit P formé. La
courbe V = f ([E]) est
une droite (V = d[P] /dt)

A t2 (conditions initiales non vérifiées), il n’y a

plus proportionnalité.

Chap II: Cinétique enzymatique Chap II: Cinétique enzymatique

Interprétation de la courbe C.2. Détermination de l’équation de Michaelis-
Menten: réaction à un substrat
Aux faibles [S], la vitesse de la réaction est
proportionnelle à celle du substrat (réaction d’ordre 1). Le modèle cinétique est basé sur la formation du
Lorsque la [S] augmente, la vitesse ne s’accroît plus complexe E·S selon les étapes suivantes:
dans les mêmes proportions (réaction d’ordre mixte).
Aux fortes [S] la vitesse devient constante,
indépendante de cette concentration (réaction d’ordre 0) (1)
: On dit que l’enzyme est saturée par son substrat.

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Chap II: Cinétique enzymatique Chap II: Cinétique enzymatique

On cherche une expression qui relie la vitesse de Les vitesses de formation et de décomposition du
réaction aux concentrations du substrat et de complexe ES sont données par:
l’enzyme et aux vitesses des étapes individuelles; le vitesse de formation de ES
point de départ étant que la vitesse de réaction est
égale au produit de [ES] et la constante de vitesse k3. Vf = k1[E][S] (3)

V = k3[ES] (2) vitesse de décomposition de ES

Vd = (k2+k3)[ES] (4)

Chap II: Cinétique enzymatique Chap II: Cinétique enzymatique

Sous conditions d’état stable [ES]= Cste L’équation précédente peut être simplifiée en
définissant une nouvelle constante, Km qui est la
k1[E][S] = (k2+k3)[ES] (5) constante de Michaelis:

Par réarrangement de l’équation (5), on obtient +

= (7)
= (6)
( + )/

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Chap II: Cinétique enzymatique Chap II: Cinétique enzymatique

En substituant l’expression pour Km dans
l’équation (6), on obtient
( − )
Donc, = (10)

= (8)
Par réarrangement de l’équation (10), on obtient:
De plus, [S] ≈ [S]0, si [E] << [S]
[E]0 = [E] + [ES] = (11)
+
[E] = [E]0 – [ES] (9)

Chap II: Cinétique enzymatique Chap II: Cinétique enzymatique

En substituant cette expression pour [ES] dans
l’équation (2), on obtient: Donc, Vm = k3 [E0] (13)
=
+ (12)
La substitution de l’équation (13) dans l’équation
La vitesse maximale, Vmax, est atteinte lorsque (12) donne l’équation de Michaelis-Menten:
tout les sites enzymatiques sont saturés de substrat,
c’est à dire, lorsque [S] >> Km
= (14)
c’est à dire ≈ ≈ +
+

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Chap II: Cinétique enzymatique Chap II: Cinétique enzymatique

Représentation graphique Signification de Vmax et de Km
Si [S] << Km, alors V = Vm[S]/Km
Si [S] = Km, alors V = Vm/2
Si [S] >> Km, alors V = Vm

Km est une grandeur expérimentale qui peut varier

avec la structure du S, le pH, la T°
Chaque enzyme possède une valeur spécifique
selon l’affinité de son site actif envers son substrat.

Chap II: Cinétique enzymatique Chap II: Cinétique enzymatique

Km bas:

Enzyme B L’enzyme a une grande affinité pour substrat.

Enzyme A

L’enzyme devient donc rapidement saturé.

L’enzyme est donc peu influencé par les

Enzyme A Enzyme B
changements de concentrations.

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Application
Chap II: Cinétique enzymatique

Km élevé: 1. Que devient la valeur de v/Vm quand [S] = 4Km?

2. Si Vm = 100 µmol/ml/s et Km = 2 mM, quelle
L’enzyme a une faible affinité pour son substrat. est la vitesse de la réaction quand [S] = 20 mM?
3. Dans une réaction à cinétique de type Michaelis-
L’enzyme devient donc saturé seulement à de fortes Menten, K1 = 7.107 M-1s-1, K2 = 1.103 s-1 et K3 =
concentrations. 2.104 s-1. Quelle est la valeur de Km? La fixation
du substrat atteint-elle l’équilibre ou plutôt l’état
L’enzyme est donc susceptible aux changements de stationnaire?
concentrations.

Application
Chap II: Cinétique enzymatique
Soit une enzyme E active sur 2 substrats différents S1 et S2 C3. Représentation de graphique en double inverse
dont les masses moléculaires sont identiques et égales à (Linweaver-Burk)
100 Da.
Les Km respectifs de l’enzyme pour ces 2 substrats sont de : La réciproque de l’équation de Michaelis-Menten
Km (S1) = 10-5 M est très utile pour l’analyse des données de cinétique
Km (S2) = 10-3 M
1)Quelles concentrations en substrats S1 et S2 (en
concentration molaire et en g/l) doit-on utiliser pour obtenir
des vitesses ≈ 95% de la Vmax ?
2)Quel substrat choisissez-vous préférentiellement pour
effectuer cette détermination ? Justifiez très brièvement.

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Chap II: Cinétique enzymatique Chap II: Cinétique enzymatique

Qu’on peut aussi écrire:

Et qui se simplifie en:

Cette représentation offre l’avantage de permettre
la détermination plus précise de Km et Vmax.
De plus, étant une droite, elle nécessite moins de
points expérimentaux.

Application
La pyrophosphatase catalyse la réaction :
PPi + H2O ↔ 2 Pi
Chap II: Cinétique enzymatique
On mesure vi (µmoles de Pi formé par minute) pour différentes C4. Mesure de l’efficacité enzymatique : nombre
concentrations initiales de PPi avec la pyrophosphatase. de turn-over
PPi (10 -4 M) vi (µmoles mn -1) « Turn-over » de l’enzyme kcat (seconde-1)
1 0.667
2.5 1.110
5 1.430
10 1.670

A l’aide de la représentation de Lineweaver-Burk,

déterminer Km et Vm.

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Chap II: Cinétique enzymatique Chap II: Cinétique enzymatique

Vitesse de la réaction enzymatique: =
+

kcat est une constante de vitesse du premier ordre Variation de Vm = kcat.[E]

Quantité d’enzyme : nombre de molécules de substrat « activé »
(unité s-1), c’est une fréquence. kcat : rapidité de l’enzyme
C’est la fréquence à laquelle l’enzyme établit l’acte
catalytique (nombre de fois par seconde) lorsqu’il est Variation de
saturé par le substrat.
1/kcat est la durée, en s de l’acte catalytique. Niveau de saturation de l’enzyme en substrat
kcat donne la mesure de l’efficacité de la catalyse
par l’enzyme.

Bcp de clients et peu de guichets

La vitesse dépend de:
Chap II: Cinétique enzymatique
la quantité de guichets
D. Influence de la température
ouverts (quantité d’enzyme)
l’habilité du personnel
(absence d’inhibiteurs)

Bcp de guichets et peu de clients

La vitesse dépend du nombre de
client (quantité de substrat)

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Chap II: Cinétique enzymatique
E. Influence du pH
Le pH agit: Conformation de la protéine
Association E-S
Action catalytique de l’enzyme
Chap II: Cinétique enzymatique
F. Effet des effecteurs
Rôle des effecteurs:
Physiologique: Régulation du métabolisme
cellulaire
Biochimique: Permettre de mieux comprendre
le mode d’action des enzymes
Les effecteurs sont:
Les inhibiteurs
Les activateurs
Les effecteurs allostériques
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Application
Pour les enzymes E1 et E2 agissant sur un substrat S, on donne :
k1 = 1.109 mol-1. min-1. L (idem pour E1 et E2)
k-1 = 1.104 min-1 (idem pour E1 et E2)
kcat1 = 1.102 min-1 et Kcat2 = 1.106 min-1
1. Calculer Km1 et Km2 , les constantes d’affinité des complexes ES. Conclure sur la
relation entre Km et l’affinité entre E et S.
2. Pour [S] = 5 Km, la concentration d’activité catalytique de E1 mesurée est de 10
U/L. Quelle est la vitesse maximale du système exprimée en µmol.min-1.L-1 ?
3. Quelle serait la vitesse initiale (en µmol.min-1.L-1) mesurée en présence de la
même concentration d’ enzyme totale E1 que précédemment et pour [S] = 8 Km?
4. Pour cette concentration d’enzyme et de substrat quelle est le pourcentage
d’enzyme liée au substrat sous forme de complexe ES?
5. Quelle est la concentration en enzyme E1 du milieu réactionnel en mol/L et en g/L
(MM de l’enzyme: 70 KDa)?
6. Quelle serait la vitesse maximale mesurée pour E2 avec une concentration
d’enzyme égale à celle obtenue dans la question précédente?
Chap II: Cinétique enzymatique
Types d’inhibition
Compétitive
Non
Réversibles
compétitive
Inhibiteurs
Irréversibles Incompétitive
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Chap III: Inhibition de l’activité Chap III: Inhibition de l’activité

enzymatique enzymatique
I. Définition et caractéristiques générales des
Certaines molécules peuvent, selon les conditions,
inhibiteurs
se comporter comme un activateur ou un inhibiteur.
Toute molécule qui modifie la vitesse d’une La modulation (inhibition ou activation) de
réaction enzymatique est appelée un effecteur. l’activité enzymatique est un mode de régulation
Les effecteurs qui augmentent l’activité primordial des voies métaboliques dans la cellule,
enzymatique sont des activateurs, d’autant que les inhibiteurs naturels sont multiples :
A l’inverse, ceux qui la diminuent sont des antibiotiques, toxines, drogues, poisons ...
inhibiteurs.

Chap III: Inhibition de l’activité Chap III: Inhibition de l’activité

enzymatique enzymatique
L’étude de l’effet d’inhibiteurs permet : Certains inhibiteurs s’associent de manière
réversible à l’enzyme en interagissant de manière
D’affiner le mécanisme catalytique d’une non covalente.
réaction enzymatique,
De mieux connaître la spécificité d’une enzyme,
D’obtenir des données physiques et chimiques
concernant le site actif.

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Chap III: Inhibition de l’activité Chap III: Inhibition de l’activité

enzymatique enzymatique
II.Inhibition réversible: généralités et cinétique
A.Model classique: S et I ont le même site de fixation
II.1. Inhibition compétitive (fixation exclusive)

C’est un mécanisme où la fixation de l’inhibiteur

empêche celle du substrat (et réciproquement): la
fixation du substrat et celle de l’inhibiteur sont donc
mutuellement exclusives.
S et I sont en compétition car ils
ont une analogie de structure

Chap III: Inhibition de l’activité Chap III: Inhibition de l’activité

enzymatique
B. Modèles alternatifs:
les sites de fixation de S et I sont distincts
L’encombrement stérique
de I empêche la fixation de
S.
enzymatique
Régulation allostérique
La fixation de I induit
un changement de
conformation de
l’enzyme qui déforme
ou masque le site de
fixation de S (et
inversement).
Les sites de fixation de S et de I
S et I ont un groupe en
se recouvrent
commun qui se fixe sur un 3e
site de fixation.

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Chap III: Inhibition de l’activité Chap III: Inhibition de l’activité

enzymatique enzymatique
On définit une constante Ki qui reflète l’affinité
Cinétique de l’inhibition compétitive de l’enzyme pour l’inhibiteur

Soit

Le complexe EI (enzyme-inhibiteur) n’a pas Avec

d’activité

Chap III: Inhibition de l’activité

enzymatique Chap III: Inhibition de l’activité
enzymatique
Exemple :La succinate déshydrogénase

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Chap III: Inhibition de l’activité Chap III: Inhibition de l’activité

enzymatique enzymatique
II.2. Inhibition incompétitive
(fixation non exclusive)

Ce type d’inhibition est aussi appelé inhibition par

blocage du complexe intermédiaire.
Cette appellation décrit mieux le mécanisme:
l’enzyme et le substrat forment d’abord le complexe
enzyme substrat (le complexe intermédiaire), puis
l’inhibiteur se fixe à ce complexe.

Chap III: Inhibition de l’activité

Chap III: Inhibition de l’activité
enzymatique
enzymatique
Cinétique de l’inhibition incompétitive

Ki

Cet inhibiteur déplace l’équilibre, abaisse Km.

Une partie de ES reste bloquée sous forme ESI, donc
Vmax est diminuée.

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Chap III: Inhibition de l’activité Chap III: Inhibition de l’activité

enzymatique enzymatique
II.2. Inhibition non compétitive
(fixation non exclusive)
Un inhibiteur non compétitif classique n’a aucune
influence sur la fixation du substrat (et
réciproquement).
I se fixe à E et à ES ; de même, S se fixe à E et à
EI.
Les inhibiteurs non compétitifs n’ont pas
d’homologie structurale avec le substrat.

Chap III: Inhibition de l’activité Chap III: Inhibition de l’activité

enzymatique enzymatique
Cinétique de l’inhibition non compétitive

Ce type d’inhibition n’est pas levé par un excès de substrat.

Km est inchangé, l’affinité de E pour S n’est pas affectée.
Vmax est diminuée par l’inhibiteur.

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Enzymologie Application
Les caractéristiques d’une enzyme en présence de son substrat spécifique
sont les suivantes : Km = 0,25.10-4M ; Vmax = 0,33.10-6 M/min. On
étudie successivement l’activité de l’enzyme en présence de deux
inhibiteurs différents A et B en concentrations constantes. Les résultats
sont les suivants :

[S] (10-5 M) 40 20 10 5 2,5

V avec A (10-6 M/min) 0,19 0,18 0,16 0,13 0,10
V avec B (10-6 M/min) 0,30 0,28 0,24 0,19 0,13

Déterminer la nature de l’inhibition provoquée :

a) En présence de l’inhibiteur A
e-mail: meda_roland@yahoo.fr b) En présence de l’inhibiteur B
Tel: 63604277

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