1.05174.

0500
1.05174.1000 Art. 100063 Acide acétique (glacial) 100% anhydre, 1 l, 2,5 l
1.05174.2500
Art. 100316
pour analyse EMSURE® ACS,ISO,Reag. Ph Eur
Acide chlorhydrique 25 % 1 l, 2,5 l
pour analyses EMSURE®
Microscopie
Préparation des échantillons
Hématoxyline en solution Le prélèvement d’échantillons doit être effectué par du personnel qualifié.
Tous les échantillons doivent être traités conformément aux règles de l’art.
modifiée selon Gill III Tous les échantillons doivent être clairement identifiés.
Utiliser des instruments appropriés pour le prélèvement d’échantillons et la
préparation, respecter les instructions du fabricant pour l’emploi / l’utilisa-
pour la microscopie tion.
Lors de l‘utilisation des réactifs auxiliaires adéquats, il y a lieu de respecter
les consignes d‘utilisation correspondantes.
Réservé à une utilisation professionnelle Déparaffiner et réhydrater les coupes de la manière habituelle.

Dispositif médical de diagnostic in vitro
Préparation du réactif
L’Hématoxyline en solution modifiée selon Gill III utilisé pour colorer est
prêtes à l’emploi ; il n’est pas nécessaire de diluer la solution étant donné
que cela réduit le résultat de coloration et la stabilité.
Il est recommandé de filtrer la solution avant l’emploi.

Objectif prévu Solution aqueuse d’éosine J à 0,5 % (art. 109844) ou

La présente « Hématoxyline en solution modifiée selon Gill III - pour la Solution alcoolique d’éosine J à 0,5 % (art. 102439) ou
microscopie » est utilisée pour le diagnostic cellulaire dans la médecine Solution alcoolique d’éosine J à 1 % (art. 117081)
humaine et sert à l’examen histologique et clinico-cytologique d’échantil- Pour intensifier la coloration à l’éosine, on ajoute p. ex. 1,0 ml d’acide acé-
lons d’origine humaine. C’est une solution de coloration prête à l’emploi tique (glacial) à 500 ml de la solution de travail.
qui est utilisée conjointement avec d’autres diagnostics in vitro de notre
La solution de travail acidifiée suffit pour env. 750 préparations; celle-ci doit
portefeuille pour rendre des structures cibles analysables pour le diagnostic
cependant être remplacée au plus tard après 14 jours.
(par fixation, inclusion, coloration, contre-coloration, montage) dans des
épreuves histologiques et clinico-cytologiques, telles que les coupes histolo- En utilisant les solutions d’éosine J alcooliques, il faut réaliser la coloration
giques de rein, muscle, cœur, poumon, p. ex. en employant une série d’alcools plus courte (en commençant avec de
l’éthanol à 96 % et une durée d’action de seulement 10 secondes).
La coloration à l’hématoxyline & éosine (H&E) est la méthode de coloration
la plus courante pour matériel histologique. La présente Hématoxyline en
solution modifiée selon Gill III est utilisée dans la coloration hématoxyline-
Acide chlorhydrique 0,1 %, aqueux
éosine (H&E) d’ensemble utilisée en histologie dans le travail de routine.
Pour la préparation d’env. 100 ml de solution, il faut additionner :
Les structures non colorées présentent des contrastes relativement faibles
et ne peuvent à peine être différenciées par microscopie optique. Les
Acide chlorhydrique à 25 % 0,4 ml
images créées au moyen des solutions de coloration permettent à un
examinateur formé et autorisé de mieux distinguer la forme et la structure. Eau distillée 100 ml
Pour un diagnostic final, il peut être nécessaire d’exécuter des examens
supplémentaires. 

Principe
Coloration H&E
La coloration à l’hématoxyline & éosine (H&E) est la méthode de colora- Mode opératoire
tion la plus courante pour matériel histologique. Le fonctionnement est un Coloration régressive de coupes en paraffine
procédé physico-chimique. Coloration dans la cuve de coloration
Dans un premier temps, le colorant du noyau chargé positivement (l’héma- Déparaffiner les préparations histologiques de la manière habituelle et les
toxyline) se fixe sur les groupes phosphates chargés négativement des réhydrater par une série d’alcools à concentration décroissante.
acides nucléiques du noyau cellulaire.
Les lames porte-objets doivent être égouttées conformément aux procédures
Les noyaux prennent alors une couleur variant entre le bleu foncé et le violet
de coloration pour éviter tout transfert non nécessaire des solutions.
foncé.
La seconde étape réside dans la contre-coloration à un colorant xanthène Pour obtenir un résultat de coloration optimal, il convient de respecter les
anionique chargée négativement (éosine J, éosine B ou érythrosine B). Le durées indiquées.
colorant se fixe aux protéines plasmatiques chargées positivement.
Le cytoplasme et les substances intercellulaires se colorent en rose à rouge, Porte-objet avec coupe en paraffine
les érythrocytes apparaissent en jaune à orange.
Eau distillée 1 minute
On distingue la coloration hématoxyline progressive, au cours de laquelle
on colore jusqu’à la fin puis on bleuit à l’eau du robinet et on conserve. Au Hématoxyline en solution modifiée selon Gill III 3 minutes
cours de la méthode régressive, l’hématoxyline est surcolorée, l’excès de
Acide chlorhydrique à 0,1 %, aqueux 2 secondes
colorant est ensuite retiré pendant les phases de différenciation, ici aussi on
bleuit à l’eau du robinet et la coloration est conservée. Dans la coloration Eau du robinet courante 3 - 5 minutes
régressive les structures nucléaires apparaissent différenciées et sont plus
visibles. Solution aqueuse d’éosine J à 0,5 %
ou
Matériel d’échantillons Solution alcoolique d’éosine J à 0,5 %* 3 minutes
Des coupes de tissu fixé à la formaline et inclus en paraffine (coupes en ou
paraffine de 3 à 4 µm d’épaisseur) ou également de coupes congelées ainsi Solution alcoolique d’éosine J à 1 %*
que du matériel clinique de la cytologie comme sédiment urinaire, crachat,
frottis de ponctions-biopsies à l’aiguille fine (BAAF), liquides de lavage, Eau courante déminéralisée 30 secondes
empreintes, liquide d’épanchement sont utilisés comme matériel de départ.
Ethanol 70 % 1 minute
Réactifs Ethanol 70 % 1 minute
Art. 105174 Ethanol 96 % 1 minute
Hématoxyline en solution modifiée selon Gill III 500 ml, 1 l, 2,5 l
pour la microscopie Ethanol 96 % 1 minute

Nécessaire en plus : Ethanol 100 % 1 minute

Art. 109844 Eosine J-solution aqueuse à 0,5% 1 l, 2,5 l Ethanol 100 % 1 minute
pour la microscopie
ou Xylène ou Neo-Clear® 5 minutes
Art. 102439 Solution alcoolique d’éosine J à 0,5% 500 ml, 2,5 l Xylène ou Neo-Clear® 5 minutes
pour la microscopie
ou Monter les préparations humides de Neo-Clear avec le Neo-Mount® ou
®

les préparations humides de xylène avec p. ex. l’Entellan® néo et d’une

Art. 117081 Eosine J - Solution à 1%, d’alcool 1l
lamelle couvre-objets.
pour la microscopie
* En utilisant les solutions d’éosine J alcooliques, il faut réaliser la coloration Consignes d’élimination
en employant une série d’alcools plus courte (en commençant avec de Eliminer l’emballage conformément à la réglementation en vigueur.
l’éthanol à 96 % et une durée d’action de seulement 10 secondes). Les solutions usagées et les solutions dont la date de péremption est dé-
passée doivent être traitées comme des déchets dangereux, en respectant
Après avoir été déshydratées (passage dans des alcools à concentration les directives locales relatives à l’élimination des déchets. Pour commander
croissante) et clarifiées dans du xylène ou du Neo-Clear®, les prépara- les instructions sur l’élimination des déchets, cliquer sur le Quick Link « Hints
tions histologiques peuvent être montées avec des produits de montage for Disposal of Microscopy Products » sur www.microscopy-products.com.
anhydres (p. ex. DPX néo, Entellan® néo, Neo-Mount®) et une lamelle Au sein de l’UE s’applique le règlement CE) n° 1272/2008 relatif à la clas-
couvre-objet et être conservée. sification, à l’étiquetage et à l’emballage des substances et des mélanges,
modifiant et abrogeant les directives 67/548/CEE et 1999/45/CE et modi-
Résultat fiant le règlement (CE) N° 1907/2006.
Noyaux cellulaires bleu foncé à violet foncé
Cytoplasme, substances intercellulaires rose à rouge
Réactifs auxiliaires
Art. 100063 Acide acétique (glacial) 100% anhydre, 1 l, 2,5 l
Erythrocytes jaune à orange
pour analyse EMSURE®
ACS,ISO,Reag. Ph Eur
Diagnostic d’erreurs Art. 100316 Acide chlorhydrique 25 % 1 l, 2,5 l
pour analyses EMSURE®
Image au microscope Cause possible Solution proposée
Art. 100579 DPX néo 500 ml
Coloration trop faible Après solution à Après solution à produit de montage anhydre
des structures éosino- l’éosine J rincer à l’eau l’éosine J rincer à l’eau pour la microscopie
philes de robinet déminéralisée Art. 100869 Neo-Entellan® pour colleuse de lamelles 500 ml
pour la microscopie
Coloration trop faible Solution éosine J non La solution éosine Art. 100974 Ethanol dénaturé avec env. 1 % 1 l, 2,5 l
des structures éosino- acidifiée J doit être acidifiée d’éthylméthylcétone
philes (cf. « Préparation du pour analyse EMSURE®
réactif ») Art. 102439 Eosine J - Solution à 0,5%, d’alcool 500 ml, 2,5 l
pour la microscopie
Coloration trop faible Passage par une série Passage par une série Art. 102755 ISOSLIDE® H&E Lames de contrôle 25 tests
des structures éosino- générale d’alcools raccourcie d’alcools avec tissu de référence pour la coloration
philes à concentration à concentration d’ensemble en histologie
croissante (à partir croissante (à partir Art. 103693 M-FREEZETM Milieu d’inclusion cryogénique 100 ml
d’éthanol 70 %) d’éthanol 96 %) pour la microscopie
Art. 103699 Huile pour immersion Type N selon ISO 8036 flacon compte-
Remarques techniques pour la microscopie gouttes de 100 ml
Le microscope utilisé doit respecter les exigences d’un laboratoire de dia- Art. 104699 Huile pour immersions flacon compte-
gnostics médicaux. pour la microscopie gouttes de 100 ml,
En cas d’utilisation des processeurs d’histologie ou des automates de 100 ml, 500 ml
coloration, se conformer aux instructions du fabricant de l’appareil et du Art. 107961 Entellan® néo 100 ml, 500 ml,
logiciel. produit de montage rapide 1l
pour la microscopie
Diagnostic Art. 108298 Xyléne (mélange isomérique) 4l
pour l’histologie
Les diagnostics doivent être exclusivement effectués par des personnes
autorisées et qualifiées. Art. 109016 Neo-Mount® flacon compte-
Les nomenclatures en vigueur doivent être utilisées. agent de montage anhydre gouttes de 100 ml,
Cette méthode doit être appliquée dans le diagnostic humain à titre com- pour la microscopie 500 ml
plémentaire. Art. 109843 Neo-Clear® (remplaçant du xylène) 5l
Des tests plus poussés seront choisis et réalisés selon des méthodes recon- pour la microscopie
nues. Art. 109844 Eosine J-solution aqueuse à 0,5% 1 l, 2,5 l
Chaque étape doit être effectuée sous contrôle (p. ex. ISOSLIDE® H&E, art. pour la microscopie
1.02755.0001), afin d’exclure toute possibilité de résultat erroné. Art. 117081 Eosine J - Solution à 1%, d’alcool 1l
pour la microscopie
Stockage
Stocker l’Hématoxyline en solution modifiée selon Gill III - pour la micros- Classification des matières dangereuses
copie entre +15 °C et +25 °C. Art. 105174
Des températures de stockage inférieures à + 15 °C peuvent provoquer une Tenir compte de la classification des matières dangereuses indiquées sur
précipitation des colorants des solutions. Les solutions de coloration doivent l’étiquette et les indications de la fiche de données de sécurité.
être mises pendant 2 à 3 heures dans un bain-marie à 60 °C et filtrées La fiche de données de sécurité est disponible sur le site web et sur
avant l’emploi. demande.

Stabilité Composants principaux du produit

L’ Hématoxyline en solution modifiée selon Gill III - pour la microscopie Art. 105174
peut être utilisé jusqu’à la date de péremption indiqué.
C.I. 75290 4,0 g/l
Après la première ouverture du flacon, conserver entre +15 °C et +25 °C Al2(SO4)3 x 18 H2O 67,0 g/l
et utiliser jusqu’à la date de péremption. pH 2,5 - 2,6
Tenir les flacons toujours bien fermés.
Autres produits d’IVD
Capacité Art. 102572 Réactif de Schiff Intense 1l
1500 à 2500 colorations / 500 ml pour la detection d’aldéhydes et de muco-
substances dans la microscopie
Remarques sur l’utilisation Art. 105175 Hématoxyline en solution modifiée 500 ml, 2,5 l
Réservé à une utilisation professionnelle. selon Gill II
Pour éviter les erreurs, l’application doit être effectuée par un personnel qua- pour la microscopie
lifié. Art. 109033 Réactif de Schiff 500 ml, 2,5 l
Respecter les directives nationales relatives à la sécurité au travail et à pour la microscopie
l’assurance de la qualité. Art. 109249 Hémalun en solution selon Mayer 500 ml, 1 l,
Utiliser des microscopes équipés conformément au standard. pour la microscopie 2,5 l
Art. 132450 Kit de coloration AFB pour l’histologie pour 1 set
Protection contre les infections la mise en évidence de bactéries acido-
Veiller impérativement à une protection efficace conformément aux direc- résistantes dans les tissus histologiques
tives des laboratoires. Art. 132647 Kit de coloration au bleu alcian, pH 1,0 1 set
pour la mise en évidence de mucines
fortement sulfatées
pour la microscopie
Art. 132657 Kit de coloration au bleu alcian, pH 2,5 1 set
pour la mise en évidence de mucosubstances
acides
pour la microscopie
Remarque générale
Si un incident grave s’est produit durant ou par suite de l’utilisation, veuillez
informer de celui-ci le fabricant et/ou son mandataire et votre autorité
nationale.

Littérature
1. Welsch Sobotta - Lehrbuch Histologie, Editor: Ulrich Welsch, 2006,
ELSEVIER Urban&Fischer, 2. Auflage
2. Theory and Practice of Histological Techniques, John D Bancroft, Marilyn
Gamble, 2008, Churchill Livingstone ELSEVIER, 6th Edition
3. Laboratory Manual of Histochemistry, Linda L. Vacca, 1985, Raven Press
4. Histological and Histochemical Methods, Theory and practice, J. A.
Kiernan, 2015, Scion Publishing Ltd, 5th Edition

Respectez les Fabricant N° catalogue Code de lot

consignes d’utili-
sation

Attention : observez la Utilisable Limitation de

documentation complé- jusqu’au température
mentaire AAAA-MM-JJ

Status: 2020-Nov-06
Merck KGaA, 64271 Darmstadt, Germany,
Tel. +49(0)6151 72-2440
www.microscopy-products.com
EMD Millipore Corporation, 400 Summit Drive
Burlington MA 01803, USA, Tel. +1-978-715-4321
Sigma-Aldrich Canada Co. or Millipore (Canada) Ltd.
2149 Winston Park, Dr. Oakville, Ontario, L6H 6J8
Phone: +1 800-565-1400