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HISTOLOGIE ET
CYTOLOGIE
Générale
Résumé du cours
I. Epithélium de revêtement
A. Introduction, les techniques histologiques
Eosine avec les protéines, argent collagène de type 2, le PAS avec le mucus ou lame basale, le
safran avec collagène de type 1, hématoxyline avec Acide nucléiques, aldéhyde fuscine colore
l’élastine.
La Deuxième étape est l’enrobage ou durcissement, comme son nom l’indique il s’agit de rendre
le tissus dur. Nous avons besoin de cette étape pour pouvoir couper le tissu très finement. Sans cela
il serait très compliqué de faire des couches assez fine pour être observée correctement. La dernière
et troisième étape est la coloration, normalement les tissus, surtout coupé très finement sont
translucide, il est donc très difficile de pouvoir distinguer les différents composants de ceux-ci. En
fonction des différents colorants nous savons décrire différents organites.
Pour réaliser ces 3 étapes nous avons différentes filières, manières de faire possible : la
paraffine, la congélation et la résine.
➢ Filière paraffine
➢ Congélation
➢ Résine
1. La filière paraffine
Pour la filière paraffine, la première étape de fixation est faite grâce à du paraformaldéhyde (4
à 10%) injecté par perfusion dans un animal encore vivant ou en immersion. Le paraformaldéhyde
fonctionne en créant des groupements covalents entre les protéines, plus spécifiquement les
groupements amine des protéines. Ce colorant ne réagit cependant pas avec les lipides qui
disparaitront lors du processus et seront donc absent lors de l’observation.
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L’enrobage dans la filière paraffine se fait en 6 étapes. Tout d’abord, il faut déshydrater les
cellules (faites à 80 % d’eau) car nous allons ensuite imprégner de paraffine cependant, la paraffine
est une forme d’huile qui n’est donc pas miscible dans l’eau le but est donc de remplacer l’eau par
de l’alcool pour ensuite le remplacer par de l’eau. Grâce à des bains en concentration croissante en
alcool, ensuite il faut transférer les tissus dans un solvant organique (xylène ou
toluène), ensuite l’imprégner de paraffine liquide, le laisser solidifier, faire les
coupes au microtome* et enfin l’étaler sur une lame de verre.
> Couper
> Etaler
*MICROTOME : appareil permettant la découpe des tissus, une coupe au microtome fait environ
5µm.
2. Filière de congélation
Dans la filière de congélation, la fixation se fait aussi grâce a du paraformaldéhyde.
➢ Plonger dans un truc pour faire refroidir soit azote soit sucre soit isopentane carboglace.
➢ Couper au cryostat
➢ Etaler
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3. Filière de la résine
Pour la filière de la résine la fixation se fait grâce à du glutaraldéhyde ou dans du tétroxyde
d’osmium en immersion ou perfusion. Les lipides restent avec cette technique.
L’enrobage ou durcissement se fait dans une résine très dure après avoir d’abord déshydraté les
tissus (perte de certain sucre , on ne garde donc pas exactement tout). Ensuite on effectue des
coupe semi fine ou ultra fine. Respectivement 0,5 et 0,05µm microscope optique et microscope
électronique.
4. Colorations
Après avoir préparé les coupes il faut bien évidement les colorer afin de pouvoir observer les
différentes conformations des tissus que nous voulons analyser. Le principe de métachromasie c’est
que certain colorant basiques change de couleurs en interagissant avec des composants chargés
négativement dans les tissus. (Réaction acide-base).
a) Coloration de routine
(1) H&E
La plus commune des coloration de routine est l’hématosine éosine ou H&E. Elle est composée
de l’hématosine, celle-ci est basique et réagit donc avec les constituant acides (cation-anion). Elle
va donc bien se voir avec l’ADN et l’ARN, elle met en évidence les noyaux et les RER donc. Ils seront
dits basophiles. L’hématosine a des couleurs plutôt bleutées. Le deuxième composant est l’éosine,
celle-ci est acide et réagit donc avec
des éléments plutôt basique (anion-
cation). Ce colorant va réagir surtout
avec les protéines dont nous dirons
qu’elles sont acidophiles ou
éosinophiles. La couleur de l’éosine
est rosée.
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(2) HES
Autre coloration très commune faite d’hématoxyline, d’éosine mais aussi de Safran. Le Safran
colore les fibres de collagènes de type 1 en jaune.
- La lame basale (structure protéiques sous les cellules épithéliales) Elle indique la présence
de glucides par du rouge (en général en conformation de lignes)
- Le mucus que l’on peut retrouver dans le système digestif par exemple
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(4) Immunohistochimie
Dans ce cas-ci on va utiliser des anticorps dirigés contre une protéine
particulière ce qui va révéler quelles cellules produisent cette protéines.
(5) Immunohistofluorescence
« « que précédemment, la fluorescence en plus
1Coloration à l'Aldéhyde fuscine
et au vert lumière
(6) Hybridation in situ
Cette technique ci s’utilise avec des frottis, à part cela c’est la même
chose mais l’on utilise des ARN plutôt que des anticorps pour reconnaitre les cellules qui produisent.
• La seule autre coloration pour les frottis est le MG c’est-à-dire bleu de méthylène et éosine,
ou le G éosine et azur de méthylène.
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LAME BASALE : fine membrane extracellulaire sur laquelle repose l’épithélium, celle-ci est composée
de glycoprotéines, plus précisément de protéoglycans. Elle fait partie des caractéristiques des tissus
épithéliaux.
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1. Epithélia de revêtement
a) Epithélia de revêtement unistratifié (E.R.U)
Vu qu’il y a des vaisseaux sanguin partout, on retrouve ce type E.R.U partout sur les coupes.
ENDOTHELIUM : couche de cellules épithéliales qui tapisse l’intérieur des parois des vaisseaux.
MO (microscope optique)
ME (microscope électronique
MO
Filière paraffine, je peux le savoir car la résine est
faite au microscope optique, elle n’est utilisée en MO qu’avec
la coloration bleu de toluidine.
Coloration TMB. Fushine colore prot en rose,
glycogène coloré en bleu, hemalun colore les noyaux en foncé
Perdu les lipides à cause de la première étape de la
filière paraffine.
Les prot sucrée ont pris l’eau
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ME
MO
Filière de résine car la coloration est du bleu de
toluidine.
ERU cubiques
MO
Filière paraffine
Coloration TMB, met en avant le collagène de type 1
en bleu, on voit que le collagène est plus présent par endroit
et qu’il y a plus d’eau à d’autres endroit car la couleur est en
dégradé.
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MO
TMB
Paraffine
Les microvillosités sont très nombreuses et toutes de tailles similaires (ressemble à une forêt de
microtubules au ME).
MO
Filière paraffine
Coloration H&E (de routine la plus connue).
On peut voir dessus des cellules CALCIFORME
(en plus de celles avec microvillosités), elles sont
reconnaissables car elles ont un noyaux plus
dense, une forme particulière et une gouttelettes
blanche de sécrétion.
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MO
ME
MO
Filière paraffine
Coloration TMB
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Microscopie optique
Paraffine
Coloration HES
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Coloration HES
MO
Paraffine
MO
Paraffine
TMB
Il s’organise en 2 couches
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MO
Paraffine
HES
MO
Paraffine
TMB
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➢ Couche basale faites de cellules cubiques entre lesquelles s’insinues des cellules moyennes.
➢ Les cellules moyennes, qui sont 2 ou 3 couche dans cette couche et celles-ci sont piriformes
pour pouvoir aussi s’adapter au remplissage ou non de la vessie par exemple.
➢ Couche superficielle : cellules dont nu avons déjà parlé à noter que souvent bi nucléées.
MO
Paraffine
TMB
Mode MEROCRINE : sécrétion séreuse produites en petites parties. Sécrétée un à un. Protéine
Ex : la sueur
Mode APOCRINE : sécrétion muqueuse ou mucigène, la boule de mucus englobe l’ensemble des
sécrétion et donc ça va sortir en 1 seule morceau. Mucigène, (glucose)
a) Exocrine
Sécrétion déversée dans le millieu extérieur comme de la sueur ou le suc gastrique par exemple.
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Les images sont toutes le deux avec des cellules caliciforme ou cellules de
Paneth.
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Cette glande ce trouve dans le duodénum et sert à protéger de l’acidité grâce à son mucus et à sa
production de bicarbonate qui sert à neutraliser l’acidité.
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➢ ERU pavimenteux
➢ ERU cubique
➢ ERU cylindriques
L’acinus a des limites irrégulières et une minuscule lumière rarement visibles. Il est composé de
cellules cylindriques pyramidales avec un noyaux basal rond basophile avec des grains éosinophiles
et du côté de la cavité on trouve les cellules dites Centro-acineuses reconnaissable grâce à leur
noyau clair. On retrouve ces cellule dans le pancréas pour la production des enzymes digestives dans
les glandes salivaires microscopique (langue) et dans la glande parotides, on retrouve ces glandes
aussi dans les glandes lacrymales.
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On retrouve ces glandes dans des glandes salivaires microscopiques et dans l’œsophage.
➢ Couche basale de cellules avec un noyau rond clair et central avec beaucoup de cellules en
mitoses pour régénérer les cellules mortes.
➢ Couche de cellules hypertrophiées vivantes avec un noyau rond et clair et centrale et avec
aussi un cytoplasme rempli de gouttelettes lipidiques.
➢ Couche de cellules hypertrophiées mortes avec un noyau pycnotique irrégulier avec un
cytoplasme remplis de gouttelettes lipidiques
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b) Endocrine
Ce qui est sécrétée de manière endocrine sont des hormones généralement sécrétée dans le
sang.
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Ces cellules ont un noyaux en général rond et clair et des grains éosinophile masquant la basophilie
du RER.
➢ Le premier type de cellules comme cela sont les cellules isolées endocrines de la glandes
thyroïdes, elles sont appelées les cellules C. Ces cellules servent à contrôler la calcémie en
inhibant les ostéoclastes.
➢ Les cellules endocrines ou paracrines isolées à
sécrétion protéiques que l’on retrouve dans le tubes
digestif, ces cellules vont avoir un effet sur les cellules
voisines du foie pour gérer la production HCl, ….
On reconnait ces cellules au fait qu’elles soient rondes accolées en etre et de taille variable
avec un noyau central rond et clair on peut y voir de nombreux grains éosinophiles dans le
cytoplasme ( les grains sont aussi argyrophiles et teintés par le bleu de toluidine ) on peut aussi les
repérer grâce car elles sont en contact avec des capillaires sanguin. En MO il est possible d’utiliser
une coloration spéciale pour repérer deux types de cellules : alpha et beta. Le premier type faisant
du glucagon qui est hypoglycémiant et les cellules bêta faisant de l’insuline elle aussi
hypoglycémiant. La première se colore en rouge la deuxième se colore plus en bleu
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(c) L’hypophyse
On peut voir l’hypophyse comme le chef d’orchestre des autres organes qui sont endocrines.
Il se trouve à la base du cerveau elle a l’adénophyse qui sécrète des protéine et la neuro hypophyse.
(d) Parathyroïdes
Petites glandes se trouvant à côté de la thyroïde, elle produit parathormone qui stimule l’activité des
retire l’os et augmente la concentration de calcium dans le sang.
(e) Surrénales
Ce sont de petites glandes coiffant les reins. Elles sont à sécrétions protéiques et lipidiques. Cette
glande est organisée en 3 étages :
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c) Glandes amphicrines
(1) Le pancréas
Fonction exocrine assurée par la fonction glande exocrine acineuse à sécrétion séreuse, il y a
donc un tube canal excréteur avec ERU pavimenteux, cubique et cylindrique et un acinus donc en
forme de raisin.
Note : se voit beaucoup mieux avec la coloration spéciale GOMORI qui mets en évidence les différents
types de cellules. Cellules A ou alpha coloré en rouge qui sécrète un hyperglycémiant ( le glucagon. ET
les cellules B colorées en bleu car ils sécrètent un hypoglycémiant : l’insuline.
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Fonction endocrine assuré par les amas glandulaire endocrine ou les cordons à sécrétion lipidiques
donc des bandes de cellules de Leydig glandulaire endocrines accolées organisées en cordons.
(3) Le foie
Lobules hépatiques et espaces potes, ce sont des lobules hépatiques hexagonaux centré sur une
veine centrés sur la veine centro-lobulaire. On y retrouve des lobules hépatiques constitués de
travées radiaires d’hépatocytes séparés par des sinusoïdes veineux et des espaces portes. L’espace
porte est un tissu conjonctif comprenant Artérioles ( blanches artères riche en O2 ), Veinule (
blanche de la veine apportant le sang pauvre en O2 et un Canal biliaires qui est un canal excréteur
qui transporte la bile vers le duodénum. On peut aussi y retrouver quelques vaisseaux lymphatiques
drainant le tissu conjonctif et quelques éléments nerveux. !! il n’y a pas de lame basale dans le foie
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Le tissus conjonctif est fait de cellules conjonctives isolées ( ou séparées les unes des autres de la
matrice extracellulaire qui elle-même est faite de fibres conjonctive et de substances fondamentale (
cf. cours de bio du Q1).
- des cellules mésenchymateuse ( cellules que l’on reconnait grâce à leur longueur, vraiment très
grande et effilée. Il y a un noyaux rond clair et central avec de nombreux ribosome libres que l’on
pourra voir en microscopie électronique, on retrouve ces cellules dans les tissus embryonnaires,
TCNS muqueux, et parfois dans les tissus adultes ( on les appelle péricytes contre l’endothélium des
capillaires ))
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- les fibres de collagène de type I, ( 25% du corps ) c’est la protéine la plus abondante du corps,
elle se trouve dans l’espace extracellulaire ( entre les cellules ). Elle sert à la structure et la résistance
à la traction et c’est synthétisé par les fibroblastes. En microscopie optique n peut voir des fibres
organisées en faisceaux parallèles. Et en microscopie électronique en striation de 64nm. On retrouve
cette fibre dans le chorion ( TCNS ), dans la peau les tissus osseux les ligaments , la dentine. Elle se
colore bien ( TMB TMV en bleu ou vert, HES jaune, bleu toluidine bleu clair.)
- de type II, ce type de fibres est plus comme un fin feutrage. Elle se retrouve dans le cartilage
hyalin ( aussi appelé TCS cartilagineux ). Il a les même colo que celui de type 1.
-de type III, en microscopie optique on peut voir qu’il est organisé en réseau et en microscopie
électronique on peut voir les striation de 64nm. On le retrouve dans le tissus spécialisé réticulé,
autour des adipocytes du TCS adipeux, autour des cellules musculaires lisses et autour des travées
des hépatocytes. On ne peut voir ce type de fibres que grâce à la coloration à l’argent.
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-de type IV, ressemble en microscopie optique à un treillis , on la retrouve dans la lame basale et
dans les glomérules des reins dans la double lame basale. Ce type de tissus n’est que tres peu voire
pas visible en paraffine.
-la substance fondamentale est une sorte de gel hydraté, elle sert à la synthèse et à la
dégradation des fibroblaste s ou des cellules conjonctives spécialisées. Elle est faite de
glycosaminoglycanes ( ressemble un peu au mucus ) ( le sucre prends l’eau et le sel permet
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l’hydratation de la peau. Elle se colore en rouge au pas au bleu de toluidine c’est rouge violet et
mucicarmin elle est aussi en rouge.
b) TCNS lâche
On y retrouve surtout de cellules ( bcp plus nombreuse que dans le TCNS muqueux) cellules
mésenchymateuses et fibroblastes. ON peut aussi y retrouver des fibres de collagènes de type I, un
peu de substance fondamentale et surtout de nombreux vaisseaux. On la retrouve dans le chorion
en dessous des endothélium de revêtement de la peau, dans les vois respiratoires et digestives. I
sert aussi de remplissage et de soutien.
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Il se retrouve dans la cornée de l’œil et dans l’aponévrose c’est-à-dire autour des muscles striés
squelettiques. Ils servent de remplissage et de soutiens.
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f) TCNS élastique
On y retrouve surtout des fibres élastiques, des fibres de collagènes de type I, on y retrouve des
fibroblastes et de la substance de la fondamentale. On peut y retrouver des capillaire. On retrouve
ce tissus dans le derme de la peau et dans les parois des artères élastique . Elle sert surtout à
l’élasticité.
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Première image est argyrophile et le deuxième sans cette coloration mais en colo de routine.
b) TCS adipeux
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c) TCS cartilagineux
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Interne :
C’est avec un TCNS lâche
Externe
TCNS dense irrégulier
Interstitielle :
d) TCS osseux
Le TCS osseux est caractérisé par un tissus minéralisé calcifié et dur, très vascularisé et innervé,
organisé en lamelle osseuse. Le pourtour est fait d’ostéoblaste dérivant de cellules
mésenchymateuse. A l’interieur se trouve des ostéoblaste qui produisent de la MEC, ils sont
enfermés dans des logettes appelés ostéocytes. Les cellules sanguines macrophages deviennent des
ostéoclastes détruisant autour de l’os ainsi l’os est en permanence renouvelé environ tous les 10 à
15 ans.
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La MEC, phase organique de l’os , ce sont des fibres de collagène de type I et V. ( 90% de la phase
organique ) Il y a aussi dix pourcent de substance fondamentale avec des GAGs et de l’acide
hyaluronique et des ostéonectines.
Les travées osseuses sont faites de fibres de collagène de type I et de substance fondamentales, ces
lamelles sont perpandiculaire entre elles.
Les ostéoblastes viennent de cellules mésenchymateuses ils sont cubiques avec un noyau rond et
clair et excentrique. Le cytoplasme est basophile. On les retrouve donc dans les tissus osseux et
servent à la production de la phase organique, leur substance sécrétée est appelée substance
ostéoïdes.
Les ostéocytes eux viennent eux même des ostéoblastes, ils sont petit rond ovoïdes avec un noyau
central et dense, on y retrouve peu de cytoplasme. Ils ne sont pas en mitose. On les retrouve dans
les logettes du TCS osseux. Les ostéocytes sont liés les uns aux autres par de fin canalicules avec des
prolongements cytoplasmiques et des jonctions communicantes. Ils servent à la production de la
phase organique lors de la fin de l’ostéogénèse. Au début de l’ostéolyse, ils produisent des
hydrolases acides et endocytes des déchets de la MEX et font la digestion dans leur lysosomes.
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Les ostéoclastes servent au renouvellement constant de l’os, qui demande un équilibre entre
ostéoclasie et ostéogénèse. La régulation peut se faire grâce à PTH ou la parathormone, produite par
les glandes de la parathyroïdes, qui stimule l’ostéoclasie. La calcitonine est l’hormone produite par
les cellules C de la thyroïdes, à l’inverse elle inhibe l’ostéoclasie. Les ostéogènes inhibe aussi
l’ostéoclasie.
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