LABORATOIRE CYTO/HISTOLOGIE

2LM7
HISTOLOGIE DESCRIPTIVE
 COURS ADAPTÉ EN FONCTION:
DES SUPPORTS DE COURS DU DR. SONIA EL GUENDI

ET
TOUTE REPRODUCTION
EST INTERDITE. DES SUPPORTS DE COURS DU PR. MARIE-CHRISTINE MANY,
UNIVERSITÉ CATHOLIQUE DE LOUVAIN, LABORATOIRE MORF/IREC

ORIGINE DE CERTAINES IMAGES :

BANQUES D’IMAGES DU PÔLE DE MORPHOLOGIE,

LABORATOIRE MORF /IREC /UCL.
 LABORATOIRE 1
INTESTIN GRÊLE

COLORATION
RECONNAISSANCE DES STRUCTURES CELLULAIRES
RECOMMANDATIONS ET GLP « GOOD LABORATORY PRACTICE »

 Le port du tablier et des gants en latex est obligatoire.

 Les cheveux longs doivent être attachés.

 Le port de bijoux (bague, bracelet) est interdit.

 Il faut désinfecter le plan de travail, avant et après chaque manipulation, à l’alcool 70%.

 Il faut se laver les mains au savon et à la solution antiseptique en début de séance, mais surtout, avant
de quitter le laboratoire, avant d’aller manger, boire, aux toilettes, se moucher, se gratter, ….

 Il est interdit de boire, de manger, de fumer, de se maquiller et de prendre des médicaments au

laboratoire.
RECOMMANDATIONS ET GLP « GOOD LABORATORY PRACTICE »

 Vérifier le matériel à l’entrée et signaler un problème !

 Nettoyer sa paillasse ainsi que le matériel utilisé en se reportant aux règles de sécurité
affichées au laboratoire.

 Microscope attribué par étudiant : respect, propreté et entretien de son microscope,

table, chaise, … En cas de non respect du matériel, des sanctions seront alors établies

 Tout comportement non-professionnel sera sanctionné par un refus de présence au

laboratoire

 Rapports à rendre OBLIGATOIREMENT à la fin de chaque séance de laboratoire.

OBJECTIFS

 Comprendre le processus de préparation de coupes destinées à la microscopie optique

 Utiliser le microtome
 Réaliser des colorations variées
 Poser un diagnostic histologique correct et complet
 Observer des lames préparées (reconnaissance des cellules et tissus/organes/appareils)
 Analyser et observer les coupes en microscopie optique ou les images via la microscopie virtuelle
 Structurer et synthétiser les observations
 Faire des liens avec la théorie (connaître la définition des tissus, les critères de reconnaissance des types
de tissus et faire la relation entre structure et fonction)
 Apprécier la qualité des lames

 Utiliser un vocabulaire scientifique précis et compris

 Résoudre des problèmes pratiques
INTRODUCTION
 TECHNIQUES HISTOLOGIQUES

Prélèvement de l’organe Coloration/ IHC

en extemporané

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 Modèles expérimentaux

TECHNIQUES HISTOLOGIQUES

Trois filières:
1. Congélation:
1. Fixation: Congélation de l’organe dans l’azote liquide (- 196 °C) Avantage : rapidité
2. Amincissement: Durcissement par le froid salle d’opération
Coupes de 5 µm d’épaisseur dans cryostat (-20 °C) => service d’anatomo-pathologie
3. Coloration : idem filière paraffine

2. Paraffine:

3. Résine:

Adaptation ou extrait du cours du Pr. Marie-Christine Many, Université Catholique de Louvain, MORF/IREC. // Origines des images : Banques d’images du pôle de Morphologie de l’UCL, IREC.
 Modèles expérimentaux

TECHNIQUES HISTOLOGIQUES
Trois filières:
1. Congélation:

2. Paraffine:
1. Fixation: Chimique dans du formaldéhyde 4% ( 24 à 48h) => précipitation des protéines

2. Amincissement: Déshydratation des tissus dans bains d’alcool

=> Extraction partielle des glucides => Traces blanchâtres d’aspect spumeux
Passage dans solvants de la paraffine = solvants organiques
=> Extraction des lipides => gouttelettes blanches bien délimitées
=> Enrobage dans paraffine liquide (+ 60° C) et durcissement à T° ambiante
Coupes de 5 µm d’épaisseur (microtome et lames de verre)

3. Coloration:Trois colorations de routine et des colorations spéciales 10

3. Résine:
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 Modèles expérimentaux

TECHNIQUES HISTOLOGIQUES

Colorations de routine:
3 types de colorants :
 Hémalun (basique)
=> en bleu foncé les structures acides dites basophiles
(ADN, ARN des ribosomes, RER, …)
 Soit Eosine, soit Ponceau-Fuschine (acide)
 en rouge/rose les structures basiques dites acidophiles ou éosinophiles
(protéines, cytoplasme)
1. Trichrome de Masson Bleu: Bleu d’aniline: mise évidence en bleu des fibres collagène I des tissus conjonctifs
2. Trichrome de Masson Vert: Vert lumière: mise évidence en vert des fibres collagène I des tissus conjonctifs
3. HES Hémalun-éosine-safran: Safran: mise évidence en jaune-orange des fibres collagène I des tissus conjonctifs
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 Modèles expérimentaux

TECHNIQUES HISTOLOGIQUES
Colorations spéciales:
=> mise en évidence de composants spécifiques

Exemples :
Coloration PAS
- mise en évidence en rouge des glucides dits PAS positifs

Coloration ARGENT
- mise en évidence en noir de structures dites argyrophiles

Coloration ALDEHYDE FUSCHINE / ORCEINE

- mise en évidence en violet / brun des fibres élastiques
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 Modèles expérimentaux

TECHNIQUES HISTOLOGIQUES
Trois filières:
1. Congélation:
2. Paraffine:
3. Résine: 1. Fixation: Glutaraldéhyde => polymérisation des protéines
ou Osmium => maintien des lipides (gouttelettes vertes)
2. Amincissement: Enrobage dans résine très dure

coupes semi-fines coupes ultra-fines

0,5 µm d’épaisseur 0,05 µm d’épaisseur
microscopie optique (MO) microscopie électronique (ME)

3. Coloration: Bleu de Toluidine Image en noir et blanc

- Nuance de bleus - structures denses aux électrons (foncées)
- structures peu denses aux électrons (claires)
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Adaptation ou extrait du cours du Pr. Marie-Christine Many, Université Catholique de Louvain, MORF/IREC. // Origines des images : Banques d’images du pôle de Morphologie de l’UCL, IREC.
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TUBE DIGESTIF
INTESTIN GRÊLE
Paroi du tube digestif: 4 tuniques
o Une muqueuse:
o Epithélium
o Chorion; avec ou sans glandes
o Muscularis mucosae
o Une sous muqueuse:
o tissu conjonctif; avec ou sans glandes
o Plexus de Meissner (nerfs, ganglions nerveux)
o Une musculeuse:
o deux couches de muscle lisse:
o la couche interne est circulaire
o la couche externe longitudinale
o plexus d’Auerbach (nerfs, ganglions nerveux) entre les deux couches de muscle.
o Une séreuse:
o Chorion + Mésothélium
 1. MUQUEUSE
a) Epithélium
b) Chorion
c) Musculaire muqueuse

PLAN 2. SOUS-MUQUEUSE
INTESTIN GRÊLE 3. MUSCULEUSE
4. ADVENTICE
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A) EPITHÉLIUM

L’épithélium de la muqueuse de tout l’intestin

grêle est simple, prismatique/cylindrique
composé de:

➢ cellules cylindriques à microvillosités

appelées entérocytes

➢ cellules caliciformes
 A) EPITHÉLIUM

 Les entérocytes :
= cellules cylindriques à microvillosités au pôle apical
= plateau strié
= Rôle : augmenter la surface de la membrane plasmique pour permettre l’absorption
(soit 350 m2 de surface d’échange).
 A) EPITHÉLIUM
 Les microvillosités :
- Courts prolongements
cytoplasmiques disposés
parallèlement les uns aux
autres
- Nombreuses par cellule
- Aspect réguliers: même
longueur

 Au niveau du pôle latéral

=> complexe de jonction
= étanchéité

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 A) EPITHÉLIUM

 Les cellules caliciformes :

 Elles élaborent du mucus et
sont dites à mode apocrine.
 Les grains de sécrétion sont
accumulés au pôle apical et
refoulent le noyau dans la
région basale qui est plus
étroite.

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 A) EPITHÉLIUM

 Les cellules caliciformes : Vésicule de mucus limitée

par une membrane
Mucigène = gel visqueux très hydraté,
formé de protéoglycans
• Axe protéique
• Chaînes glucidiques (= glycosaminoglycans : GAG) fixés à l’axe protéique

ME –cellule caliciforme

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A) EPITHÉLIUM

 Colorations spéciales
 BLEU ALCIAN
 PAS (Réactif de Schiff)
B) CHORION

 Tissu conjonctif lâche

 Les glandes de Lieberkühn qui comportent:
 des entérocytes
 des cellules caliciformes
 des cellules de Paneth
 des cellules endocrines (entéro-chromaffines)

➢ Les cellules de Paneth sont regroupées dans le fond des glandes de Lieberkühn:
 cytoplasme basophile
 grains de sécrétion séreuse : lysozyme, enzyme capable de détruire la paroi bactérienne.
Intestin- MO – paraffine – trichrome de Masson

Epithélium intestinal

Muqueuse
Glande exocrine
tubuleuse droite de
Lieberkühn

Muscularis mucosae
Adaptation ou extrait du cours du Pr. Marie-
Christine Many, Université Catholique de
Sous-muqueuse Louvain, MORF/IREC. // Origines des images :
Banques d’images du pôle de Morphologie de
l’UCL, IREC.
 Glande exocrine tubuleuse droite de Lieberkühn

Cellule
Caliciforme

Cellule
absorbante

Cellule
de Paneth
Muscularis
mucosae
MO – paraffine – trichrome de Masson bleu
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 Glande exocrine tubuleuse droite de Lieberkühn à sécrétion muqueuse et séreuse

MO –
paraffine
– PAS

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 Glande exocrine tubuleuse droite de Lieberkühn à sécrétion muqueuse et séreuse

Cellule
glandulaire
Endocrine à
sécrétion
protéique
MO – résine – bleu de toluidine
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 B) CHORION

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C) MUSCULAIRE MUQUEUSE

 La muscularis mucosae est fine tout au long de l’intestin grêle formée de quelques cellules musculaires
lisses disposées de façon concentrique.
 1. MUQUEUSE
a) Epithélium
b) Chorion
c) Musculaire muqueuse

2. SOUS-MUQUEUSE
PLAN 3. MUSCULEUSE
4. ADVENTICE
 2. LA SOUS-
MUQUEUSE
➢ Duodénum: glandes de Brunner
(Jéjuno-iléon: pas de glandes)
➢ glandes tubuleuses composées
➢ canaux excréteurs traversent la
muscularis mucosae et
s’abouchent dans la lumière de
l’intestin
➢ Le produit de sécrétion est une
mucine alcaline qui protège
la muqueuse duodénale de
l’acidité gastrique et élève le
pH du contenu intestinal à une
valeur optimale pour l’action
des enzymes pancréatiques.

Adaptation ou extrait du cours du Pr. Marie-Christine Many, Université Catholique de Louvain, MORF/IREC. // Origines des images : Banques d’images du pôle de Morphologie de l’UCL, IREC.
2. LA SOUS-MUQUEUSE

Adaptation ou extrait du cours du Pr. Marie-Christine Many, Université Catholique de Louvain, MORF/IREC. // Origines des images : Banques d’images du pôle de Morphologie de l’UCL, IREC.
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 VALVULES ET VILLOSITÉS

 Présence de valvules
conniventes = Soulèvements
du chorion de la sous-
muqueuse, présents sur toute
la longueur du tube digestif

 Villosités intestinales =
Soulèvement de l’épithélium et
du chorion de la muqueuse,
dans l’intestin grêle

Adaptation ou extrait du cours du Pr. Marie-Christine Many, Université Catholique de Louvain, MORF/IREC. // Origines des images : Banques d’images du pôle de Morphologie de l’UCL, IREC.
VILLOSITÉS INTESTINALES
Composition de l’axe de la villosité :
 Tissu conjonctif lâche avec nombreux macrophages résidents, petits lymphocytes et plasmocytes
 Cellules musculaires lisses (muscle de Brucke) pour modifier la longueur de la villosité
 Capillaires sanguins
 Vaisseau lymphatique ou vaisseau chylifère au centre de la villosité

➢ Absorption des acides aminés, oses, acides gras à chaîne courte, via les cellules à microvillosités vers les
capillaires sanguins
➢ Absorption des acides gras à chaîne longue vers le vaisseau lymphatique chylifère (voir cours de physiologie
digestive)
 Mode apocrine
Plateau
strié
Mucus=
Protection
chimique
ERU
cylindrique
avec
microvillosités
et cellules
caliciformes =
intestin

MO – paraffine –trichrome de Masson bleu

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 Villosité intestinale et muscle de Brucke

Microscopie optique – paraffine – coloration Trichrome de Masson

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3. LA
MUSCULEUSE

➢ Elle est formée de cellules

musculaires lisses disposées
selon deux axes formant ainsi
une couche circulaire
interne et une couche
longitudinale externe.
➢ Entre les deux, des plexus
nerveux qui assurent
l’innervation du tube digestif.
4. L’ADVENTICE OU SÉREUSE

 Couche de tissu conjonctif dense vascularisée et comportant de nombreux adipocytes.

 Cette couche se termine par un mésothélium, qui est le feuillet viscéral du péritoine
 Duodénum Jéjuno-iléon Colon-rectum

Muqueuse
Epithélium de
Uni. Cylindrique + microvillosités + cellules caliciformes
revêtement
Chorion +/- glandes
Tubuleuses droites de Lieberkühn
exocrines
Muscularis mucosae =
Discontinue
muscle lisse Continue
(couche longitudinale)
Sous- muqueuse Tubuleuses
Chorion+/- glandes composées / /
exocrines (Brunner)

Musculeuse Muscle lisse

1. Couche interne
circulaire
2. Nerfs + ganglions
3. Couche externe
Muscle lisse
Séreuse
Chorion + + + +
mésothélium
Adaptation ou extrait du cours du Pr. Marie-Christine Many, Université Catholique de Louvain, MORF/IREC.
Adaptation ou extrait du cours du Pr. Marie-Christine Many, Université Catholique de Louvain, MORF/IREC. // Origines des images : Banques d’images du pôle de Morphologie de l’UCL, IREC.
ANNEXE 1 :
ENROBAGE PARAFFINE
VIP:VACUUM INFILTRATION PROCESSOR

Bain Durée Température Phase

Formol 10% 3h 35°C Fixation
Méthanol 50% 50 min 37°C Déshydratation
Méthanol 70% 50 min 37°C
Méthanol 80% 50 min 37°C
Méthanol 95% 50 min 37°C
Méthanol 95% 50 min 37°C
Méthanol 100% 50 min 37°C
Méthanol 100% 50 min 37°C
Xylène 50 min 37°C Eclaircissement
Xylène 50 min 37°C
Paraffine 45 min 59°C Inclusion
Paraffine 45 min 59°C
Paraffine 45 min 59°C
Paraffine 45 min 59°C

Université Catholique de Louvain, Marc de Bournonville, laboratoire Histologie, MORF/IREC.