Licence 3 Sciences pour la Santé - Parcours

Biomédecine
Année 2022-2023

UE Techniques d’analyses en Biomédecine

TP 3 :

Observation de la mitose cellulaire (racines de bulbes)

Enseignants : Marie Quétin

Slovénie Pyndiah
Carole Hénique-Gréciet

Assistant Technique : Bassem Mezdari

Lieu du TP :
IUT Sénart Fontainebleau
Bâtiment H - Laboratoire
Département Génie Biologique
240 rue de la Motte, Moissy Cramayel

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Objectif de l’enseignement :
Le but de ces travaux pratiques est d’observer et d’identifier les différentes phases de la mitose :
prophase, métaphase, anaphase et télophase ainsi qu’une cellule en interphase

Compétences à acquérir :
• Adopter les bons gestes en laboratoire de biologie cellulaire
• Pouvoir être autonome sur des manipulations simples (pipetage, préparation de solution…)
• Comprendre la mitose et visualiser les phases (avec les chromosomes)

OBSERVATION DE MITOSES

I- Le méristème et les mitoses

Pour observer les différentes phases de la mitose et les chromosomes, un matériel biologique
simple et facile à obtenir est constitué par les jeunes racines obtenues à la base de bulbes de
diverses plantes (ail, oignon, échalote, jacinthe). Lorsque l'on place ces bulbes sur un récipient
de manière à ce que leur base baigne dans l'eau, des racines se développent en quelques
jours.

La croissance est rapide (quelques millimètres par jour). Elle résulte des mitoses qui se
produisent dans le méristème racinaire qui forme une petite tâche visible à l’œil nu.

C’est donc dans la région du méristème qu’il faudra prélever la préparation à observer.

ZONE DE DIVISION

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II – Mode opératoire de coloration des chromosomes

1) Préparation des racines

• Prélever avec des ciseaux trois jeunes racines par binôme en croissance sur un bulbe

• Couper le segment terminal à environ 10 mm de l'extrémité et le déposer soit sur une

lame porte-objet, soit dans un verre de montre, selon le mode opératoire de
coloration utilisé
Attention : On doit observer près de l'extrémité le méristème qui forme une petite tâche

• Réalisation de la coloration et observation au microscope (x40 puis x100)

Il existe de nombreux modes opératoires de coloration des chromosomes. On souhaite ici

comparer trois d’entre eux.

2) Mode opératoire 1 : Coloration à l’Orcéine

• Recouvrir l'échantillon déposé sur la lame, d'acide chlorhydrique à 1 mol/L. Laisser agir
5 minutes pendant lesquelles l'acide hydrolyse le ciment pectique qui relie les parois
cellulaires. Ceci facilitera ensuite la dissociation des cellules

• Enlever l'acide avec un papier absorbant, en faisant attention de ne pas coller

l’échantillon sur le papier

• Recouvrir l'échantillon d'une solution d'orcéine et laisser agir pendant 20 minutes

• Éliminer le colorant avec un papier absorbant, en faisant attention de ne pas entraîner

l'échantillon

• Recouvrir d'une goutte d'acide acétique à 45 % et poser une lamelle couvre-objet

• Appuyer doucement sur la lamelle pour aplatir l'échantillon de façon à former une
couche monocellulaire en déplaçant légèrement la lamelle tout en appuyant pour
provoquer la dissociation des cellules

3) Mode opératoire 2 : Coloration au Carmin acétique

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• Faites chauffer à 60°C, 5 mL de solution de carmin acétique contenant les racines

coupées pendant 3 minutes (éviter l’ébullition de la préparation)

• Retirer les racines et isoler les parties de la région sub-terminale d’environ 0,5 cm
(région riche en cellules en division), sur une lame

• Placer chaque morceau dans une goutte d’eau distillée (ou de carmin acétique
refroidi), entre lame et lamelle

• Ecraser délicatement la racine

4) Mode opératoire 3 : Coloration au Bleu de toluidine

• Placer l’échantillon dans un verre de montre avec une solution d’HCl diluée, pendant
3 minutes. Au bout d’une minute de trempage, dilacérer les racines dans le sens de la
longueur à l’aide de la pince et du scalpel. La dilacération consiste à séparer
grossièrement les fibres longitudinales de la racine

• Rincer les échantillons avec de l’eau distillée

• Disposer un échantillon sur une lame. Ecraser progressivement entre lame et lamelle

• Soulever délicatement la lamelle et déposer une goutte de colorant de façon à

recouvrir entièrement la préparation. Reposez immédiatement la lamelle et aspirez
l’excès de colorant à l’aide du papier absorbant

5) Observation au microscope
• Observer chaque lame colorée au microscope
• Prendre en photos les différentes phases de la mitose que vous identifiez

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REDACTION DU COMPTE-RENDU DE TP :

Rédiger le compte-rendu du TP et répondre aux questions ci-dessous.

Le compte-rendu doit permettre au lecteur (qui n’a pas suivi le TP) de comprendre vos
manipulations et l’intérêt d’une telle pratique au laboratoire.

Notes :
• Penser à bien identifier votre travail : nom/prénom, n° étudiant, n° de paillasse

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• Structurer votre travail et organiser correctement les informations

• Ne pas oublier de mettre un titre et d’écrire une légende sous chacune des figures
• Tous les résultats, même non attendus ou négatifs, seront analysés dans le compte-
rendu
• Le compte-rendu doit être déposé sur Cristolink en version pdf avec comme nom de
fichier TP3_nom1_nom2.pdf

I – Objectif du TP : Présenter en une ou deux phrases le but des manipulations effectuées

II - Manipulation : Expliquer en quelques lignes accompagnées d’un schéma, la manipulation

effectuée

III – Observation/interprétation des résultats :

• Décrire ce que vous avez observé et obtenu comme résultat
• Cette partie doit être accompagnée de figures (photographie par exemple) ou de
schémas explicatifs

IV – Conclusion :
Cette partie se veut être une synthèse permettant d’expliquer ce qui a été mis en évidence
au cours de expériences réalisées.

Questions :

1 - A quel moment l’enveloppe qui délimite le noyau (enveloppe nucléaire) se désorganise-t-

elle ?

2 - Quelle est l’utilité de faire les 3 types de coloration ? Expliquer les différences

3 - Chez les eucaryotes, la réplication de l’ADN s’effectue à la vitesse d’environ 100 nucléotides
par seconde. Chez l’Homme, où le plus long des chromosomes (le chromosome n°1)
comprend 250 millions de nucléotides, la phase S dure environ 8 heures dans la plupart des
cellules.
- Calculez la durée théoriquement nécessaire à la réplication du chromosome 1
- Proposez une explication à la différence entre la durée calculée et celle de la phase S

4 - En utilisant l’objectif (x10) comptez le pourcentage (%) de cellules en phase de mitose.

Illustrer avec une photographie (sans oublier la légende).