Histologie – ITR1 - HBD1 (LAS)

Chapitre 1 :
Moyens d’étude en histologie
Pr. Olivier David COHEN

Année universitaire 2022/2023

Université Grenoble Alpes - Tous droits réservés
 Plan du cours

I. L’histologie : c’est quoi ?

II. Les microscopes
A. Le microscope optique
B. Le microscope électronique
III. Les techniques de préparation
A. Pour la microscopie optique
B. Pour la microscopie électronique
IV. Conclusion
 Objectifs pédagogiques du cours

• Présenter les différents microscopes avec leurs apports et

leurs limites
• Connaître les étapes de préparation
• Connaître les différentes catégories de colorations et
leurs apports
• Comprendre la complémentarité de toutes ces
composantes pour permette la compréhension des
fonctions, à partir des structures observées
 Plan du cours

I. L’histologie : c’est quoi ?

 L’histologie : c’est quoi ?

• Histologie = sciences des tissus (des cellules et des

organes)
• Discipline morphologique
– Etude des structures invisibles à l’œil nu
• 4 objectifs :
– Description des structures normales
– Constituer le référentiel normal pour décrire les pathologies
– Déduire les fonctions de ces structures
– Comprendre le fonctionnement normal
 La démarche histologique

• 4 étapes :
– Prélèvement
– Technique de préparation
– Observation au microscope
– Interprétation

• Choix parmi différentes techniques :

– de microscopie
– de préparation
 Plan

I. Principes de base
II. Les microscopes
 Plan

I. Principes de base
II. Les microscopes
A. Le microscope optique
1. Principes
2. Apports
3. Limites
Microscope optique (photonique)

L’échantillon est traversé par des photons

Microscope optique (photonique)
 Les microscopes optiques

• Faible grossissement
– Informations tissulaires
• Types tissulaires
• Architecture
 Le microscope optique

• Faible grossissement
– Informations tissulaires
• Grossissement moyen
– Détails tissulaires
 Le microscope optique

• Faible grossissement
– Informations tissulaires
• Grossissement moyen
– Détails tissulaires
• Fort grossissement
– Détails cellulaires
• Taille
• Forme
• Taille du noyau
• Détails nucléaires
 Le microscope optique

• Les 3 grossissements donnent des informations

tissulaires et cellulaires qui sont complémentaires
Plus fort grossissement ≠ Plus d’informations

• Limites
– Résolution limitée à 0,2 µm
On ne voit pas les organites cellulaires !
– Grossissement x1000
 Le microscope optique

• Les 3 grossissements donnent des informations

tissulaires et cellulaires qui sont complémentaires
Plus fort grossissement ≠ Plus d’informations

• Limites
– Résolution limitée à 0,2 µm
On ne voit pas les organites cellulaires !
– Grossissement x1000
– Prélèvement
• Échantillonnage dans le temps (photo)
• Échantillonnage dans l’espace (2D)
 Plan

I. Principes de base
II. Les prélèvements
III. Les microscopes
A. Le microscope optique
B. Le microscope électronique à transmission
1. Principes
2. Apports
3. Limites
Microscope électronique à transmission
 Microscope électronique à transmission

• Images en noir et blanc

• Grossissement : x 5 millions
• Résolution courante : 0,35 nM
• Etude ultrastructurale
– Plus détaillée qu’en MO
– Observation des organites cellulaires
 Comparaison MO et ME
MO ME

Faisceau Photons Electrons

Grossissement
2 000 5 000 000
maximal
Résolution
200 nm 0,2 nm
maximale

Images Couleur Noir et blanc

Structures Ultrastructure
Observation Tissulaires Tissulaire
Cellulaires Organites
Temps
Court Long
d’observation

Coût Faible Elevé

 Plan

I. Principes de base
II. Les microscopes
III. Les techniques de préparation
A. Pour la microscopie optique
 Préparation (1) : fixation

• Conservation des
structures
• Evite les dégradations
• Choix selon
– Le tissu
– La coloration
• Formol, liquide de Bouin,
congélation
 Préparation (2) : inclusion

• Mise en cassette
• Immersion dans de la
paraffine fondue
• Formation d’un bloc
 Préparation (3) : coupe

• Coupe du bloc au
microtome
• Coupes de 2 à 5 µm
d’épaisseur
• Formation d’un ruban
• Récupération des coupes
sur lames de verre
 Préparation (4) : colorations

• Déparaffinage
• Réhydratation
• Coloration
 Les colorations

• Standards ou topographiques
• Spéciales ou histochimiques
• Histoenzymologie
• Immunohistochimie
 Coloration standard ou topographique

• Non spécifique d'un type de

molécule
• Action conjuguée de colorants :
– acide = éosine
/ cytoplasme en rose
– et basique = hématoxyline
/ noyaux (ADN) en violet
• Donne une vue d'ensemble du
tissu (topographique)
• Description des structures Glande surrénale :
éosinophiles et basophiles Hématoxyline Eosine (HE)
 Coloration standard ou topographique

• Standard = HES
– Hématoxyline
• Noyaux en violet
– Eosine
• Cytoplasme en rose
– Safran
• Fibres de collagène en jaune

Glande surrénale :
Hématoxyline Eosine Safran (HES)
 Colorations spéciales ou histochimiques

• Réactions sur des macromolécules cibles

• Donnent des informations sur la constitution chimique de
structures tissulaires et cellulaires
 Colorations spéciales

• Exemples
– Trichrome de Masson

Foie
Collagène en bleu
 Colorations spéciales

• Exemples :
– Trichrome de Masson
– Orcéine

Aorte
Fibres élastiques en pourpre
 Colorations spéciales

• Exemples
– Trichrome de Masson
– Orcéine
– PAS

Villosité intestinale
(1) Mucus et (2) Mucopolysaccharides de surface
 Colorations spéciales
nucléole
• Exemples :
– Trichrome de Masson ARN / REG

– Orcéine
– PAS
– Crésyl Violet

Neurones
ARN/REG en bleu violet
 Histoenzymologie

• Permet la détermination de
l'activité d'une ou plusieurs
enzymes dans un tissu donné

• Décèle le produit d’une

réaction enzymatique sur la
coupe

• Exemple :
– Succinate déshydrogénase
Fibres musculaires squelettiques
Fibres aérobies en bleu
 Immunohistochimie

• Permet la localisation de
protéines dans une coupe
tissulaire
• Décèle le produit d’une
réaction Ag - Ac

Glande mammaire (cancer)

Récepteurs d’estrogène en brun
 Plan

I. Principes de base
II. Les microscopes
III. Les techniques de préparation
A. Pour la microscopie optique
B. Pour la microscopie électronique
 Préparation pour la ME

• Prélèvements plus petits

• Fixation au glutaraldéhyde et à l’acide osmique
• Inclusion dans de la résine
• Coupe d’environ 80 nm d’épaisseur à l’ultra-microtome
• Montage des coupes sur des grilles de cuivre perforées
• Le contraste se fait avec des dérivés de métaux lourds
(l’acétate d’uranyle et des sels de plomb)
Microscope électronique
 Conclusion

• Microscopie optique en 1ère intention

• Microscopie optique = description structurale
– Description tissulaire (objectifs faible et intermédiaire)
– Description cellulaire (objectifs intermédiaire et fort)
• Microscopie électronique = description ultrastructurale
– Description des organites cellulaires
Découvrir le fonctionnel à partir de la morphologie

Cellules actives Cellules quiescentes

 Messages essentiels du cours

• Complémentarité :
– des différentes microscopies
– des différents grossissements
– des différentes techniques de coloration
• Les colorants permettent de préciser la nature des
structures visibles sur les préparations
• L’ensemble de la démarche histologique vise à décrire les
structures et préciser leur nature pour comprendre les
fonctions
JE VOUS REMERCIE ET BON TRAVAIL
 Mentions légales

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