Dr M.

SAOUD
Mars 2021

LA COLORATION
LA COLORATION

 Les colorations histologiques sont très

nombreuses et variées mais se résument
schématiquement en trois types de coloration:
 Les colorations topographiques :
 Ce sont des colorations standards associant à
la fois :
 une coloration nucléaire (l’hématoxyline est le
colorant nucléaire fondamental de la technique
histologique. Il colore les noyaux en bleu violet
foncé)
 et une coloration cytoplasmique dite de
fond (faite à l’aide de colorants acides :
Eosine, érythrosine et Orange G. Le
cytoplasme est éosinophile)
 Les colorations histochimiques :

Elles visent à mettre en évidence dans le

tissu examiné : glycogène, mucus, graisse,
pigments ferriques, mélaniques…
 Les colorations structurales :
Elles mettent en évidence les composants
intimes de certaines structures tissulaires :
fibres élastiques, fibres réticulaires, névroglie.
 D’une manière générale la qualité des
colorants dépend de plusieurs facteurs :
 La nature de la pièce : les tissus très
cellulaires se colorent plus rapidement que
les moins cellulaires.

 L’épaisseur de la coupe : les coupes fines se

colorent rapidement.
 La fixation : les pièces qui ont séjourné
longtemps dans les fixateurs dits « oxydants »
perdent rapidement leurs affinités tinctoriales.

 La qualité du produit colorant : la présence

d’impuretés dans un colorant influe d’une
manière importante sur la coloration.
 Le degré de maturation de certaines solutions
colorantes. L’hémotoxyline n’acquiert ses
qualités tinctoriales optimum qu’après
plusieurs jours, alors que d’autres doivent être
utilisées immédiatement.

 La fréquence d’utilisation et l’âge des

solutions colorantes : plus l’utilisation est
fréquente et plus les temps doivent être
allongés.
 La température ambiante du laboratoire : il
est connu que la chaleur active les
colorations. A l’inverse, quand l’atmosphère
est froide, il faut allonger les temps.
 La coloration standard, (de routine)
universellement adoptée en anatomie
pathologique, est celle dite « Hemalin-Eosine »
dont la technique est la suivante :
 Technique :
1) Xylène……………………………10 mn pour
déparaffiner
2) Xylène……………………………10 min
3) Alcool 100°………………………5 mn
4) Alcool 100°………………………passage
5) Alcool 100°………………………passage
6) Eau courante……………………blanchissement
(faire disparaître la couleur jaune des lames)
7) Hemalun (hématoxyline de Harris)………..10 à
20 s (allonger le temps avec une utilisation
8) Eau courante ……………………bleuissement (les
lames deviennent bleu pâle)
9) Eosine……………………………5 mn
10) Eau courante…………………….jusqu’à la
disparition de la couleur rouge sur les bords des
lames.
11) Alcool 100°………………………….passage
12) Alcool 100°………………………….passage
13) Xylène……………………………….passage
14) Xylène……………………………….passage
éclaircissement des lames
15) Xylène……………………………….10 mn
 Réactifs :
 Hémalum (hématoxyline de Harris) est
vendue prête à l’emploi. C’est une
composition de : Hématoxyline, Alun
potassique, Acide acétique et Eau.
 Eosine: Orange G (20 g) + Eosine pure
(10 g) + 100cc eau.

 Résultats :
 Noyau bleu violet (basophile)
 COLORATION SPECIALE :
 Les colorations spéciales se comptent par
dizaines. Elles mettent en évidence certaines
substances ou des constituants tissulaires.
 Nous proposons, pour illustration, quelques
unes des plus utilisées.
LES COLORATIONS TRICHROMIQUES :

 La coloration de trichrome de Masson utilise

trois colorants différents :
 Un colorant des noyaux

 Un colorant du cytoplasme

 Un colorant des structures de soutien, tissu

conjonctif en particulier.
 Résultats :

 Noyaux : noirs
 Cytoplasme : rose violacé

 Muscles : rose rouge

 Tissus conjonctif : bleu ou vert

 Les lipides :

La coloration la plus utilisée est le noir

SoudanB.
 Les polysaccharides :

 La coloration classique qui met en évidence les

polysaccharides est le P.A.S (Periodic – acid – Schiff) HIO4,
réaction introduite par Mc. Manus (1946) et Hotchkiss
(1948).

 Le matériel PAS positif est coloré en magenta (rouge

pourpre).

 Les substances PAS + sont :

 Polysaccharides : glycogène.
 Mucopolysaccharides neutres.
 Mucoprotéines = (mucine, sécrétions mucoïdes du tractus
intestinal, TSH, les cylindres hyalins protéiques du rein, corps
de Russel).
 Glycoprotéines, les membranes basales, la réticuline, le
collagène.
 Résultats :
 Le matériel P.A.S positif est coloré en rouge
pourpre.

Une autre coloration hautement spécifique pour

la mise en évidence du glycogène est le
Carmen de Best. Et elle le colore en rouge
 Méthode de Giemsa :
 C’est une coloration très efficace pour
mettre en évidence les mastocytes.

 Résultats :
 Mastocytes et éosinophiles : rouges
briques.
 Noyaux : violets.
 Cytoplasme basophile : bleu ciel à bleu
foncé.
 Coloration de ZIEHL NEELSON modifiée
(pour la mise en évidence des BK dans les
tissus) :
 Bacille BK : rouge vif.

 Tissu en bleu.

 Caséum en gris bleu très pâle.

 Les globules rouges doivent présenter une

teinte rougeâtre très claire et sont un bon
témoin de décoloration trop poussée.
 Substances amyloïdes :
 Substance homogène, hyaline semi-translucide
et de distribution extracellulaire au cours de
certains états pathologiques.
 La substance amyloïde primitive est constituée
par :
 Une fraction glucidique

 Des constituants protéiques

 Des groupements sulfatés

 Les fixateurs de choix sont les fixateurs

 Rouge Congo :
 Résultats :

 Substance amyloïde : rose vif à rouge.

 Collagène : rose.
 Coloration du fer :
 Coloration de Perls (la plus utilisée) :

 Résultat :

 Fer ferrique (Fe+++) se colore en bleu vert,

les noyaux en rouge.
 Pigments mélaniques :
 Les pigments mélaniques sont noirs ou
brun jaunâtre.
 La coloration qui les met en évidence est la
coloration au liquide de Fontana (nitrate
d’argent ammoniacal).
 Résultats :

 Les grains de mélanine ou de sérotonine

sont colorés en noir sur un fond rouge pâle.
LE MONTAGE

 MONTAGE.

Le montage se fait classiquement entre lame

et lamelle en utilisant les media classiques
 Baume du canada (utiliser le toluène ou le xylène)
 Huile de cèdre (utiliser le toluène ou le xylène)
 Eukitt (utiliser le toluène ou le xylène)
 Clearium (utiliser le propanol)
 Autres milieux synthétiques.
 LECTURE DES LAMES

La lecture des lames se fait aux faibles

grossissements en utilisant impérativement
des objectifs plans pour avoir une bonne vue
d'ensemble des tissus.
Extemporané
Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes
permettant d'obtenir des préparations
microscopiques analysables pendant le temps opératoires. Ces
techniques ont pour but
principalement de déterminer la nature de la lésion abordée
chirurgicalement ou d'évaluer les
limites d'exérèse ou l'extension d'une tumeur. L'examen
extemporané s'effectue sur tissu frais. Le
prélèvement est congelé à -30°, coupé dans un cryostat,
permettant d'obtenir des préparations de
5 à 8 mmd'épaisseur. La coupe est colorée par un colorant
monochrome, le plus souvent par bleu
de toluidine. L'examen extemporané est systématiquement
contrôlé par un examen histologique
standard, le fragment analysé étant fixé après décongélation