La transition G0/G1

Expression des cyclines D et

activité des Cdk4 et Cdk6
• Augmentée par des facteurs
mitogènes (PDGF, EGF
TGF, IGF-1, GM-CSF…)
qui agissent par
l’intermédiaire de récepteurs
transmembranaires de type
TK ou couplés à des
protéines G (Rho, Ras)
• Voie de l’oncogène Myc
(Myc/Max active la
transcription des gènes de
cycline D et E, CDC25A,
Cdk4, E2F…)
• Diminuée par des facteurs
antiprolifératifs (TGFqui
accroît l’expression de p16INK4a, 71
p15INK4b, p21Cip1 et p27Kip1)
La progression en G1

Début cycle: transcription

cycline D, E (sous ctrl E2F),
p21CIP1 et p27KIP1
Maintien en G1assuré par pRb,
p107, p130 (blocage du cycle
en association avec E2F)
Phosphorylation de pRB par
Cdk4/6, libération de E2F actifs
E2F: transcription de gènes
transition G1/S et contrôle de
réplication
Phosphorylation de pRB par
Cdk2, E2F totalement actifs
Si Cip/Kip et INK4: maintien de
pRB hypophosphorylé donc
inhibition cycle 72
Fin de G1; préparation de G1/S

Assemblage d’un complexe

pré-réplicatif sur les origines
de réplication: ORC (origin
recognition complex), formé de
6 protéines

ORC recrute Cdc6 et Cdt1

(ATPase) puis MCM (mini-
chromosome maintenance)

73
Inhibition de la re-réplication

Mécanismes protégeant la
cellule en S, G2 et M
P de MCM et ORC par des
Cdk
P de Cdc6 par Cdk2/CyclE
=> décrochage de Cdc6 et
Cdt1
Export cytoplasmique de
Cdc6 –P
Cdt1 est liée et inhibée par
la géminine

74
La transition G1/S

Association de complexes
protéiques aux complexes pré-
RC pour commencer la
synthèse d’ADN

o Fixation MCM10 au complexe

pré-RC
o Activation du complexe pré-
RC par Cdc7/Dbf4 et Cdk2
o Cdk2 inhibe p27Kip1
o Cdc45 permet accrochage de
l’ADN polymérase

75
La phase S

Brin à synthèse continue

(leading strand)
Brin à synthèse discontinue
(lagging strand): fragments
d’Okazaki initiés par l’ARN
primase

77
La phase G2; la transition G2/M

Début de condensation des

chromosomes
Cdk1/cycline A actif: fonction?

Contrôle de G2/M par

Cdk1/cycline B:
P inhibitrices de Thr14 et Tyr 15
par Wee1 et Myt1
P activatrice de Thr161 par CAK
(Cdk7/cycline H/Mat1)

Activation par les phosphatases

Cdc25

Régulation de la localisation de
la cycline B 78
La phase G2; la transition G2/M

Activation de Cdk1/Cycline B en fin de G2, si l’ADN

a été synthétisé sans dommage
Phosphorylation de l’histone H1 qui diminue son
association à l’ADN qui devient alors accessible à la
topoisomérase II nécessaire à la condensation des
chromosomes.
Phosphorylation des lamines, ce qui augmente la
solubilité de la membrane nucléaire, avant sa disparition
(NEBD : nuclear enveloppe break-down)
Phosphorylation de la myosine (jusqu’à la fin de la phase
M) inhibe son interaction avec l’actine nécessaire à la
cytokinèse,
79
Condensation des chromosomes

Condensine: 5 sous-unités
(CAP) conservées chez
eucaryotes super enroulement
de l’ADN
Rôle de Cdk1/Cycline B
CENP-A (Centromeric protein
A) variant au niveau
centromères de histone H3
P par Aurora-B

80
Le fuseau mitotique

Microtubules = assemblage
non covalents d’hétérodimères
de tubuline  et 
Fin prophase: redistribution de
la tubuline intracellulaire en
fuseau de microtubules
perpendiculaires au futur plan
de clivage
Structure dynamique,
associée à des protéines
stabilisatrices, les MAP
(microtubule-associated
proteins), ou déstabilisatrices
(katanine…)
81
Le fuseau mitotique

Fuseau mitotique sous le

contrôle des centrosomes
dupliqués
Connexion chromosomes-
microtubules polaires:
kinétochores
Les cohésines maintiennent les
chromatides sœurs ; elles sont
concentrées au niveau des
centromères, dans les
kinétochores.

82
Le fuseau mitotique: checkpoint

« Spindle assembly checkpoint » : Vérification de

l’attachement des chromosomes au fuseau.
Empêche l’entrée en anaphase tant que la plaque
métaphasique n’est pas parfaite
La protéine Mad2 :
-sensible à l’attachement des microtubules au
kinétochore
-interagit avec Cdc20/Fizzy et l’inhibe
-régulée par des kinases (Aurora, BubR1, Bub3)

83
La séparation des chromosomes

La séparase va cliver la
cohésine Scc1
Elle est maintenue inhibée
par la sécurine

84
La séparation des chromosomes

APC/C = Anaphase
Promoting
Complex/Cyclosome :
E3 Ub ligase

Fizzy = Cdc20 :
régulateur de APC/C,
inhibé par Mad2 tant
que le fuseau n’est
pas parfait

APC/C-Cdc20 cible
aussi la cycline B
sortie de mitose.
85
La cytokinèse

Formation d’un anneau contractile (actinomyosine)

Invagination de la membrane
Position de l’anneau régulée par celle du fuseau
mitotique

86
Le cycle des centrosomes

Organite organisateur
des microtubules qui
assure la formation du
fuseau mitotique
Mécanismes
moléculaires de
régulation mal connus
Réplication du
centrosome couplée à
la réplication des
chromosomes
Régulation par
Cdk2/Cycline E-A

87
 Le nucléole

« Organite » (bien qu’il n’y ait pas de membrane l’entourant)

Centre de synthèse des ARN ribosomiques (ARNr) et

d’assemblage des sous-unités ribosomiques

Contient les gènes codant pour les ARNr et des particules

contenant les ARNr 18S et 28S à différents stades de
maturation et d’assemblage avec les protéines ribosomiques

Assemblage et maturation d’autres ARN

(signal recognition particules [SRP], ARNt,
ARN 6U, télomérase)

88
Rôles dans le cycle cellulaire, le vieillissement…
10m
 Le nucléole

LES NUCLEOLES
-centres fibrillaires [CF]
-composant fibrillaire dense [CFD]
-composant granulaire [CG]

LES ARNr
-ARNr 28S, 18S et 5,8S synthétisés et maturés
dans le nucléole à partir d’un transcrit primaire:
ARNr 47S (ARN pol I)
-ARNr 5S synthétisé dans le noyau (ARN pol III)

LES RIBOSOMES
-40S: ARNr 18S + 33 protéines
-60S: ARNr 28S, 5,8S, 5S + 49 protéines

89
 Le nucléole

LES GENES RIBOSOMIQUES

-gènes répétés
-organisés en tandem
-400 copies chez l’Homme (chromosomes 13,
14, 15, 21 et 22)

-regroupés dans les régions organisatrices du

nucléoles, les NOR [nucleolar organizer regions]
-le NOR contiennent des boucles des différents
chromosomes.
-tous ne sont pas actifs même en phase
exponentielle de croissance

90
Le nucléole
TRANSCRIPTION / MATURATION ARNr

-initiation de la transcription à la jonction Centre fibrillaire-Composant

fibrillaire dense
-des dizaines de transcription simultanées (plusieurs polymérases I et
gènes en tandem) => images en sapin de Noël

-maturation déclenchée dans le CFD, se poursuit lors de la migration

des ARNr dans le Composant granulaire
-implique plus de 100 protéines et 100 snoARN (small nucleolar RNA)
-nécessite des dizaines de modifications (méthylations et pseudo- 91

uridylations)
Le nucléole

TRANSCRIPTION / MATURATION ARNr

92
Le cycle nucléolaire

Saccharomyces cerevisiae:
activité nucléolaire tout au long du cycle (mitose sans rupture
de l’enveloppe nucléaire).

Eucaryotes supérieurs:
-nucléole actif à l’interphase, désassemblé en début de mitose,
réassemblé en fin de mitose.
-mais la Pol I reste associée aux gènes ribosomiques pendant
la mitose, sous forme inactive.
C’est Cdk1/Cycline B qui est responsable de cette inactivation.
Quand la Cycline B est dégradée, la transcription par Pol I
recommence.

93
Le cycle nucléolaire

En fin de mitose, la machinerie de maturation des ARNr se

concentre à la surface des chromosomes : les pre-nucleolar
bodies (PNB).
La formation des PNB ne se fait pas si Cdk1 est active.

94
Nucléole et maladies humaines

Syndrome de Werner (vieillissement prématuré)

La protéine Wrn est localisée dans le nucléole. Elle serait impliquée
dans la transcription de l’ARNr

Syndrome de Treacher Collins (anomalie de la face et du crâne, surdité…)

La protéine Treacle (gène TCOF1) est localisée dans le nucléole (CFD).
Les mutants de Treacle ne sont pas nucléolaires.
Rôle ?

Dyskératose congénitale

95
 Les points de contrôle du cycle

Contrôle de l’état de l’ADN

Détection des dommages

via les kinases ATM et ATR
Activation des kinases Chk1
et Chk2
Blocage en G1/S et G2/M
ATM agit également par une
voie dépendante de p53

96
Cycle cellulaire et cancer

Deux types de gènes mutés principalement : proto-

oncogènes et gènes suppresseurs de tumeurs

Dans les cellules normales, les produits des proto-

oncogènes stimulent la prolifération

Les produits des gènes suppresseurs de tumeurs

inhibent la progression du cycle

97
 Cycle cellulaire et cancer

Les gènes des Cdk sont mutés à faible fréquence

- Mutations de Cdk4 et 6 perte de la liaison aux Cki

- Surexpression de Cck1 et Cdk2 dans des adénomes du côlon
- Surexpression de Cdk4 dans des lignées cellulaires de mélanomes
et sarcomes

98
 Cycle cellulaire et cancer

Les cyclines sont souvent affectées

- Expression aberrante de la cycline D1 dans de nombreux cancers

(lymphomes B, cancers du sein, du poumon, de l’œsophage...)
- Cyclines D2, D3, E aussi (sein, côlon, leucémies...)

99
 Cycle cellulaire et cancer

Les inhibiteurs de Cdk (Cki)

- Le gène de p16INK4a est muté, hyperméthylé ou délété dans de

nombreux cancers : délétion dans 50% des mésothéliomes, 40-
60% des cancers du nasopharynx, du pancréas, 20-30% des
leucémies aigües.
- Les délétions du locus INK4A affectent aussi souvent le gène de
p19ARF (régulateur de Mdm2).
- La perte d’expression de p27Cip2 (poumon, foie, vessie...) est de
mauvais pronostic.

100
 Cycle cellulaire et cancer

pRb

- Mutations 100% des rétinoblastomes, fréquentes dans les cancers

du poumon et du rein...
- Inhibtion par des virus oncogènes (E7 des papillomavirus, E1A des
adénovirus
- 90% des cancers auraient une mutation de la ”voie Rb” (Cdk4/6,
Cycline D, p16INK4a, pRb).
- Pas de mutations décrites des autres protéines à poche (p107 et
p130) ou E2F

p53
101
Cycle cellulaire et cancer

pRb et p53 : gènes de prédisposition héréditaire au

cancer

102
Réalisation technique : Service ICAP ‐ Université Claude Bernard Lyon 1
Soutien financier : Région Rhône‐Alpes dans le cadre de l'UNR‐RA