Plan du cours

I- principes généraux de la communication cellulaire

1- Signalisation et fonction cellulaire
2- Modalités de la communication cellulaire
3- Les différentes formes de communication via les molécules sécrétées
4- Les signaux chimiques
II- Les récepteurs membranaires
II1- Les canaux ioniques
II2- Les RCPG
1- Généralités
2- Les protéines G
3- Les effecteurs
4- Voie de l’AMPc
5- Voie des phosphoinositides
II3- Exemples d’effets biologiques
1- RCPG-Glucagon
2- RCPG- Foie, muscle
3- Contraction relaxation
II4- Interactions voies de signalisation
II5- Désensibilisation du RCPG
II6- Dimérisation des RCPG
I- PRINCIPES GÉNÉRAUX DE LA COMMUNICATION
I-1 : Signalisation et fonctionnement cellulaire

• Chaque cellule est programmée pour répondre spécifiquement

à des signaux extracellulaires
• La réponse cellulaire correspond aux différents effets biologiques
(Différenciation, prolifération, apoptose, survie…

I-2 : Modalités de la communication cellulaire

• Molécules d’adhésion à la surface cellulaire permettant le contact

direct avec l’extérieur (famille des CAM et famille des SAM)
• Jonctions intercellulaires communicantes de type gap permettant
les échanges inter-cytoplasmes de petites molécules et d’ions
Expérience : coculture de cellules rétiniennes et de cellules
hépatiques d’embryon
1ère étape mise en route de la culture
2ème étape : formation de 2 clones distincts grâce aux
jonctions et molécules d’adhésion
• Sécrétion de signaux chimiques pour la communication intercellulaire via
les récepteurs membranaires
1-3 Le principe de la transmission cellulaire via les signaux chimiques

Biosynthèse Production du signal

Cellule émettrice Stockage

Rétro contrôle sécrétion

+ ou - Transport Transmission du signal
Y Réception du signal

Cellule cible Interprétation du signal

Réponse
ou effet biologique

Réception du signal

Transduction

Réponse
I -4 Les différentes formes de communications via les molécules sécrétées
 I-4 Les signaux chimiques

 Les petites molécules gazeuses H2Osolubles non chargées (NO, CO)

 Subissent diffusion simple
 Absence de récepteur membranaire ou intracellulaire
 Activation d’une enzyme cytosolique
 Exemple NO qui active la guanylate cyclase cytosolique (GCs)
 GCs agit sur substrat, le GTP, le transforme en GMPc
 Le GMPc active une kinase, la PKG (protéine kinase GMPc dépendante)

 Les molécules H2Ophobes ou liposolubles

 Hormones thyroïdiennes, Hormones stéroïdes
 Subissent une diffusion simple
 Récepteur intracellulaire (cytosolique ou nucléaire)
 Action génique : facteurs de transcription

 Les molécules H2Osolubles

 Ne peuvent pas traverser la membrane
 Amines biogènes, peptides, glycoprotéines…
 Récepteur membranaire (RCPG, Canal ionique, récepteur enzyme)
 II- Trois familles majeures de récepteurs membranaires
- Récepteurs canaux ioniques
- Récepteurs couplés aux protéines G
- Récepteurs enzymes
II-1 Les canaux ioniques

Au niveau d’une synapse neuro-musculaire excitatrice

• Récepteur canal ionique ligand dépendant à Na+ = R nicotinique de l’Ach
• Formé de 5 sous unités (2α + 3β) formant un pore (fermé/ouvert)
• Chaque sous unité est formée de 4 domaines transmembranaires M1, M2, M3, M4
• L’influx nerveux au niveau de l’extrémité de l’axone induit l’ouverture des canaux calciques et entrée de Ca++
• Formation de Ca++-Calm et activation de kinases qui phosphorylent les protéines contractiles
• Mouvement des vésicules d’Ach et exocytose de l’Ach dans la fente synaptique
• Liaison de l’Ach au canal ionique induit l’ouverture du pore et le passage des ions Na+
• Dépolarisation membranaire induisant la libération de Ca++ via les canaux à Ca++ du RE dans le cytosol de la
cellule musculaire entraînant la contraction
Différents types de neurotransmetteurs induisent excitation ou inhibition de l’élément post-synaptique
Selon le type de synapse considéré, la combinaison neurotransmetteur-récepteur se traduit
par une dépolarisation ou une hyperpolarisation de la membrane post-synaptique.

• Dans le cas d'une synapse excitatrice, le neurotransmetteur ouvre une protéine-canal au Na+ ou au Ca+

dépolarisation locale ou potentiel post-synaptique excitateur (PPSE).

• Dans le cas d'une synapse inhibitrice, le neurotransmetteur ouvre une protéine-canal au Cl- ou au K+

dépolarisation locale ou potentiel post-synaptique inhibiteur (PPSI).

Le neurotransmetteur est inactivé par :

• Dégradation (Ach sous l’action de l’acéthylcholinestérase dans la fente synaptique)
• Recaptage (Glutamate, GABA, Dopamine, Adrénaline, Nor…) par l’élément présynaptique et réutilisation
 II-2 Les RCPG
1- Généralités sur les Récepteurs couplés aux protéines G hétérotrimériques
• Famille la plus importante de récepteurs
• Environ 1000 gènes codent pour des RCPG dans le génome humain
• Impliqués dans de nombreuses fonctions
• Cibles pharmacologiques d’intérêt majeur : + de 30% des
médicaments exercent leur action sur des RCPG
• Protéines transmbnaires à 7 domaines hydrophobes (7TM)
• Extrémité Nt extracellulaire interagit avec le ligand
• Extrémité Ct intracellulaire interagit avec la protéine G, impliquée
aussi dans la désensibilisation
• Présente des boucles extra et intracellulaires hydrophiles
• Présentent des sites récepteurs à différentes molécules [lux, Ca++,
phéromones, petites molécules (AA, amines, nucléotides, PGs, peptides)
protéines (glycoprotéines, IL, chimiokines…)]
Représentation schématique des interactions
ligand-récepteur
Les protéines G hétérotrimériques Structure de la protéine G hétérotrimérique
Formée de 3 sous unités α, β, γ
A l’état inactif :
• les 3 ss unités sont associées
• γ est ancrée à la membrane de façon irréversible par 1
A/G
• α est cytosolique et liée au GDP
• C’est une GTPase présentant 3 sites : au GDP, au GTP et u
site d’H2Olyse du GTP

A l’état d’activité
• Dissociation de α du groupe βγ
• Départ de GDP et fixation de GTP sur α sous
l’action
d’un facteur d’échange de la famille des GEF
(Guanidine exchange factor)
• Ancrage de α-GTP à la membrane par 1 A/G
• Formation de 2 entités actives : α-GTP et
le groupe β γ qui peuvent agir sur le
même effecteur ou 2 effecteurs différents
• L’action terminée, H2Olyse du GTP en
GDP + Pi sous l’action d’une GAP (guanidine activator
protein)
• α-GDP redevient inactive, se désancre et se lie au
groupe β, γ
 3- Les différents acteurs dans la voie des RCPG

4
2

Cibles de
5
l’effecteur IIaire
6

1 : Messager Iaire
2 : Récepteur
3 : Protéine G
4 : Effecteur Iaire (enzyme, canal ionique, transporteur)
5 : Messager IIaire
6 : Effecteur IIaire (Enzymes / Kinases)
4- Protéines G et les autres acteurs après activation des RCPG

Liste non exhaustive des protéines G hétérotrimériques

 5- Voie de l’AMPc

AC : Adénylate cyclase
AC PDE
PDE : Phosphodiestérase cAMP
dépendante

Les boucles C1a – C1b entre M1 et M2 et

C2a – C2b à Ct constituent le domaine
actif

C1a – C2a

Domaine catalytique , Mg++

et ATP dépendant

C1b – C2b
- Il existe plusieurs isoformes d’AC (1-9)
- Retrouvées au niveau de différents tissus (nerveux, poumon, foie, cœur…)
- Régulées par Gαs, Gαi, Ca++ et autres enzymes Domaine régulateur
Mécanisme d’action de la PKA via l’AMPc

Action de PKA
1- sur protéines cibles cytosoliques
Par phosphorylation d’enzymes dont
- Enzymes du catabolisme du glycogène GPK/GP : activation
- Enzymes de l’anabolisme du glycogène GS : inhibition
- D’où dégradation du glycogène ou glycogénolyse

2-Sur protéines cibles nucléaires

- Action sur facteur de transcription : CREB (cAMP
Response Element Binding protein) par phosphorylation
- Dimérisation de CREBP
- Interaction avec des protéines de liaison
- Action sur gène cible (CRE = cAMP response elemen
- CRE = séquence palindromique
- Transcription de protéines spécifiques
 En résumé :
-Un RCPG activé couplé à Gαs induit l’augmentation de l’AMPc
- L’AMPc induit deux types d’effets via PKA
- Effets post traductionnels : activation ou inhibition de protéines déjà présentes dans la cellule par
phosphorylation, ce qui entraîne une modification de l’activité cellulaire

- Effets transcriptionnels : via la phosphorylation du facteur de transcription CREB qui induit

la transcription d’ARN codant pour des protéines impliquées dans l’effet biologique

6- Voie des phosphinositides (PI) et des sphingolipides

Action de la PLCβ sur le phosphatidyl inositol 4, 5 diphosphate ou PIP2
Formation du DAG et de l’inositol triphosphate ou IP3

phosphatidyl inositol 4, 5 diphosphate ou PIP2

DAG IP3
Activation de la PLCβ : réponses cellulaires
• Esters de phorbol : analogues du DAG qui induisent une
activation continue de la PKC
• La PKC est également sensible au Ca++ PKII
• Le Ca++ active également la PKII (protéine kinase Ca++
Active
dépendante)

Autres Effecteurs Messagers secondaires

PC /PLC DAG + Choline P

PI3K Phosphorylation du PIP2 PIP3
PLA2 Acide arachidonique + LysoPC
PLD Acide Phosphatidique +Base DAG
SMase Céramide + Choline P
Schéma récapitulatif de la transmission du signal des RCPG

Exercice
II3- Effets biologiques
1- RCPG-Foie, muscle
2- Interaction des voies de signalisation : AC et PLCβ
3- Contraction-Relaxation
 II4- Amplification du signal

Niveau 1 :
plusieurs protéines G +vées par un RCPG

Niveau 2 :
1 AC produit +eurs AMPc

Niveau 3 :
1 PKA phosphoryle +eurs enzymes

Niveau 4 :
1 enzyme induit la production de n molécules
II5- Désensibilisation du récepteur par la famille des GRK
(protein G receptor kinase)

• Liaison ligand
• Activation RCPG et interaction avec protéine G
• Action des GRK : phosphorylation du domaine Ct (désensibilisation)
• Action des βarrestines
• Liaison de la clathrine : formation d’un puits et action d’une protéine G monomérique, la dynamine
• Formation d’une vésicule d’endocytose par internalisation
• Formation d’un endosome : pH acide, séparation récepteur- ligand, Déphosphorylation du récepteur
• Formation de 2 compartiments
• Compartiment à ligand subit action d’un lysosome I suivi d’une dégradation
• Le RCPG subit recyclage via RE et retourne à la membrane
 Désensibilisation par d’autres kinases (PKA, PKC)

La PKA active crée la désensibilisation à différents niveaux

• Phosphorylation de l’extrémité Ct de RCPG induisant internalisation du RCPG, l’endosome formé subit
la dégradation par un lysosome Iaire
• Pas de recyclage
• PKA agit aussi au niveau nucléaire en activant la transcription des ARN impliqués dans la désensiblilisation e
l’inhibition des ARN codant pour le RCPG : down regulation (pas de synthèse et pas de recyclage du récepteur)
II-6 Dimérisation

- RCPG ord 10 dimérisé à ord 4 pour fonctionnalité

du RCPG
- Activation de canaux ioniques par RCPG via protéines - Ord 10 dimérisé à ord 4 pour adressage
à domaines PDZ
- Activation de récepteur à IP3 par RCPG via protéines
homer à domaines EVH

Mécanismes de la signalisation médiée par la

dimérisation de RCPG (récept de la calcitonine) avec
les protéines Ramp 1/2/3

Ex : CRL R (Précurseur du Récept de la calcitonine)

RCLR donne le CTR (Récept de la calcitonine)
RCLR + Ramp1 donne le CGRPR ½
RCLR + Ramp 2 donne le Récept de l’adrénomodulline
RCLR + Ramp3 donne le Récept de l’amyline
Le HIV utilise les RCPG des chimiokines CCR5 et CXCR4 pour infecter les cellules
après dimérisation avec le CD4
Pathologies associées aux GPCR
• Infection intestinale, vibrion cholérique (toxine)
- Fixation d’une sous-unité de la toxine sur la protéine G (ADP ribosylation)
- Inhibition de l’activité GTPasique, maintien de la protéine Gas sous sa forme active
(AMPc produit de façon continue)
- Stimulation continue des canaux Cl- > perte d’eau et d’ions > diarrhées profuses

• La toxine de la coqueluche empêche la protéine Gai de se fixer sur RCPG

La protéine Gas reste active : production d’AMPc provoquant une production de liquide au niveau des
poumons