Matière :

Méthodes et techniques d’analyses

Filière : Technologie agroalimentaire et contrôle de qualité.

Présenter par : LEHBAB Adil.
Ferh Hicham
Thème : « compte rendue du Tp dosage quantitatif des protéines par
la méthode de biuret »

Année universitaire :2022-2023

Introduction :
La Test biuret Il est un procédé de détermination de sérum protéine le type chimique.
Par chauffage est obtenu par la condensation de deux molécules urée former un composé
appelé biuret. Si on place le biuret dans un solution alcalin contenant ions cupriques il y a la
formation d'un complexe, et non la composition parfaitement connue, de couleur violette :
réaction appelée la réaction du biuret. Cette réaction ne soit pas spécifique au biuret, mais
les ions cuivriques dans un environnement alcalin réagir avec tout composer contenant deux
ou plusieurs groupes CONH2, CH2New Hampshire2 ou CSNH2. La réaction est alors négative
avec les acides aminés et dipeptide alors qu'il est positif avec les polypeptides, à partir des
tripeptides et des protéines, étant donné qu'il y a plusieurs groupes CONH2. L'intensité de la
couleur développée est proportionnelle au nombre de liaisons peptidiques impliqués dans la
réaction et est donc utilisé comme un procédé particulièrement simple et rapide pour la
détermination quantitative des protéines de lactosérum et des protéines en général.

Principe de ce dosage :
Le biuret donne avec les ions cuivriques Cu2+ et en milieu alcalin un complexe absorbant
fortement à 540 nm (coloration bleue violette due à la formation du complexe Cu2+-biuret).
La liaison peptidique établie entre deux acides aminés est également capable, dans les
mêmes conditions expérimentales, de former un complexe avec les ions cuivriques. Ce
complexe peut être dosé par spectrophotométrie d’absorption à 540 nm. On réalise une
gamme étalon à partir d’un standard de concentration inconnue ; la mesure de la
concentration protéique de l’échantillon est déterminée par comparaison avec cette gamme
étalon.

Le but :
-Déterminé la concentration d’une solution inconnue.
-Savoir préparer une gamme d’étalonnage.

Matériels et méthodes :
Matériels :
-solution de biuret
-solution-mère de gélatine
-solution protéique a une concertation inconnue
-tubes
-bécher
-pipette(2ml-10ml)
-colorimètre
-burette
Méthode :
D’abord on prépare une gamme de solution d’étalon de concentration a 2,4,6,8,10 mg/ml à
partir de la solution mère de gélatine, après on ajoute 4ml de solution de biuret bien agiter
et laisser les tubes pendant 20 min à une température ambiante.
Après on mesure la densité optique au colorimètre a 540nm, on obtient les résultats
suivants :
(c) 0 2 4 6 8 10
A(540nm) 0 0.07 0.22 0.32 0.47 0.80 0.66

Résultats :
Tube N° 0 1 2 3 4 5 Essai
Etalon10g/l(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0
Solution 0 0 0 0 0 0 1
inconnue (ml)
Eau distillé (ml) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0
Réactif de 4 4 4 4 4 4 4
biuret (ml)
Gélatine par 0 2 4 6 8 10
tube (mg/ml)
A (540nm) 0 0.07 0.22 0.32 0.47 0.80 0.66

La courbe d’étalonnage :

C A(540nm)
0 0
2 0,07
4 0,22
6 0,32
8 0,47
10 0,8
-A partir de la courbe d’étalonnage on a trouvé la concentration en protéines de la solution
inconnue 9ml/l.

Autres méthodes de dosage des protéines :

La méthode de Kjeldahl :
Une technique de détermination du taux d'azote dans un échantillon. Elle est applicable pour
le dosage de l’azote de différents composés azotés tels les amines et les sels d’ammonium
quaternaires.
La méthode de Bradford :
La méthode de Bradford est un dosage colorimétrique, basé sur le changement d'absorbance
(la mesure se fait à 595 nm), se manifestant par le changement de la couleur du bleu de
Coomassie G-250 après liaison (complexation) avec les acides aminés basiques (arginine,
histidine, lysine) et les résidus hydrophobes des acides aminés présents dans la ou les
protéines.
Méthode au BCA (BICINCHONIQUE ACID ASSAY) :
Est un dosage biochimique permettant de déterminer la concentration totale de protéine
dans une solution (0,5 μg/ml à 1,5 mg/ml), similaire au dosage des protéines de Lowry, au
dosage des protéines de Bradford ou au réactif biuret. La concentration totale de protéines
se manifeste par un changement de couleur de la solution d'échantillon du vert au violet
proportionnellement à la concentration de protéines, qui peut ensuite être mesurée à l'aide
de la colorimétrie.