Méthodes chromatographiques approfondies Année 2023/2024

Série TD n°1
Exercice 1 : *
Pour un soluté donné, montrer que le temps de rétention dépend à la fois de la Longueur de la colonne
L, de la vitesse linéaire de la phase mobile µ̅ et des volumes de la phase stationnaire VS et de la phase
mobile VM.

Exercice 2 : *
A une solution aqueuse d’iode de concentration 10 g/L, on ajoute 10 mL de tetrachlorométhane (CCl4)
sachant que le coefficient de partage de l’iode entre les deux phases est de 100 à 25 °C. Déterminer
la concentration en iode dans les deux phases.

Exercice 3 : *
Un rapport de chromatogramme, donne les informations suivantes : Largeur à 10 % de la hauteur de
0,085 et un facteur d’asymétrie de 1,024. Déterminer les distances a et b, ainsi que le 𝐹𝑡.

Exercice 4 : *
Les coefficients de l’équation de Van Deemter A, B et C sont égals à 10-3 cm et 0,144 cm2 et 10-3 s.
Quelle est la vitesse linaire moyenne de la phase mobile pour laquelle H soit minimal. Déduire Hmin.

Exercice 5 :*
Un mélange de deux composés A et B a été séparé sur une colonne de 2 m. calculer le facteur de
résolution ; sachant que les tr (s) sont respectivement de 300 et 320 pour un (cm) de 18,5 et 21,5.

Exercice 6 :*
On veut déterminer par la méthode de normalisation la composition massique d’un échantillon
constitué de quatre esters de l’acide butanoïque (butanoates de methyle (ME), d’éthyle (EE) et de
propyle (PE) et butanoate de butyle (BE)). L’analyse de l’échantillon, en utilisant comme référence
l’un des constituants, a conduit aux résultats ci-après. Donner l’expression de 𝑥𝑖% à partir de la
relation linéaire 𝑚𝑖 = 𝑍𝑖𝐴𝑖, puis trouver la composition massique de ce mélange.

N° pic Composé tr A
1 ME 2,54 2340,1
2 EE 3,47 2359,0
3 PE 5,57 4077,3
4 BE 7,34 4320,7
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 𝐾𝑀𝐸⁄𝐵𝐸 = 0,919 𝐾𝐸𝐸⁄𝐵𝐸 = 0,913 𝐾𝑃𝐸⁄𝐵𝐸 = 1,060
Exercice 7 :**

Dosage de la sérotonine S par la méthode de l’étalon interne. On prélève 1 mL de la solution à doser

à laquelle on ajoute 1 mL d’une solution contenant 30 ng de N M sérotonine. On traite se mélange
pour le débarrasser des composés gênant. On opère par extraction en phase solide pour isoler la
sérotonine et son dérivé méthylé, dilué dans une phase convenable.

Molécule Aire (1ier dosage) Aire (2ième dosage) Quantité injectée (µg)
Sérotonine 30 885 982 µV.s 2 573 832 µV.s 5
N-méthylsérotonine 30 956 727 µV.s 1 719 818 µV.s 5
a) Pourquoi ajoute-t-on le composé d’étalonnage interne avant l’étape d’extraction
b) Calculer le facteur de réponse de la S sérotonine par rapport à son dérivé méthylé
c) Déterminer la concentration massique de S sérotonine

Exercice 8 :***

On se propose de doser le monuron (herbicide) dans un échantillon d’eau de rivière. La solution est
analysée par HPLC. On utilise pour le dosage la méthode d’étalonnage externe. Les résultats sont
dans le tableau ci-dessous. Après injection de la solution à doser de l’eau, le chromatogramme obtenu
présente un pic correspondant au monuron avec une aire de 379 (unités arbitraires).
Déterminer la concentration du monuron contenu dans l’eau analysée, en utilisant la méthode des
moindres carrés, la méthode graphiques et la méthode de la pente.

Concentration (mg/L) 4,98 6,48 9,65 13,72

Aire 222 335 461 568
Exercice 9 :**

Un mélange de trois composés volatils A, B et C est analysé par CPG sur une colonne de 50 m de
longueur. Les données concernant les temps de rétention, l’aire des pics ainsi que les coefficients de
réponse relatifs, sont indiqués dans le tableau ci-dessous. Dans les mêmes conditions, un composé
non retenu par la phase stationnaire est élué avec un temps de 2,3min.

Calculer le pourcentage de chaque composé dans le mélange. (Précisez la méthode d’étalonnage

utilisée en justifiant votre réponse).
Produit tr (min) Aire Coefficient de réponse relatif
A 12,2 812155 1,00
B 14,7 3837537 0,95
C 18,2 1487764 0,89

Exercice 10 : ***

Un contrôleur a voulu vérifier la concentration de la caféine contenue dans un soda. Pour cela,
il a réalisé un dosage par HPLC de la caféine en utilisant trois méthodes quantitatives différentes.
Pour ce dosage, on utilisera une solution référence de caféine de concentration 1,021 g/L, des
volumes de jaugée de 20 mL et une boucle d’injection de 20 µL. Pour l’extraction de la caféine du
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soda, l’opérateur a utilisé un éluant adéquat, passant d’un volume de départ de 250 mL à un volume
final 20 mL. On appellera cette dernière solution mère.

a) Première méthode : courbe d’étalonnage (MEE)

Dans un premier temps, on prépare 5 solutions de concentration Cref à partir de la solution
référence de caféine. Après injection, on obtient les aires de chaque solution (voir tableau). Dans un
second temps, on dilue 30 µL de la solution mère, qu’on appellera solution fille 1.

1- Compléter le tableau

Numéro de la fiole 1 2 3 4 5
Vréf (µL) 10 20 30 40 50
Créf (mg.L-1)
Aire du pic 0,124 0,232 0,331 0,447 0,548
2- Tracer la courbe d’étalonnage
3- Déterminer la droite de régression en utilisant la méthode la plus fiable pour calculer a et b
4- Déterminer la concentration de la Sfille sachant que l’aire obtenue dans les mêmes conditions
que les précédents dosages est de 0,312.
5- Déduire la concentration de caféine dans la Smère, puis dans le soda.

b) Deuxième méthode : Ajouts dosés,

On prépare 5 solutions de caféine dans laquelle on introduit un volume Vréf de la solution de

caféine (commerciale) et un volume de 50 µL de Smère. Une fois les solutions jaugées et injectées, on
obtient les résultats suivants :

numéro de la fiole 1 2 3 4 5
Vréf (µL) 0 5 10 15 20
Créf (mg.L-1)
Aire du pic 0,508 0,562 0,618 0,671 0,728
1- Compléter le tableau
2- Tracer la courbe d’étalonnage
3- Déterminer la droite de régression en utilisant la méthode la plus fiable pour calculer a et b
4- Déduire la concentration de caféine dans la Smère , puis dans le soda.

c) Troisième méthode : Étalonnage interne(MEI)

On prépare 2 solutions. La première contient 30 µL de solution référence et 30 µL d’étalon

interne de concentration 1,087 g/L. L’étalon interne est la benzoïne. La deuxième est une solution
de 30 µl de Smère et 30µL d’EI. Déterminer la concentration de la caféine dans le soda.

Composé tR / min A A’
Benzoïne 1,60 0,980 0,998
Caféine 1,00 0,361 0,334

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