Université de Tunis El-Manar Institut Supérieur des Sciences Biologiques Appliquées de Tunis

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E.C.U.E. Enzymologie et génie enzymatique
2ème année L.A. en Biotechnologie
Session de rattrapage, juin 2017 Durée 1H

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Questions de cours (8 points)

1. Donner la définition du mot enzyme
2. Quelle est la différence entre un cofacteur et un coenzyme ?
3. Donner la définition d’une activité enzymatique
4. Décrire la double spécificité enzymatique
Problème (12 points)
A. Un groupe d’étudiants de l’ISSBAT a purifié une enzyme qui catalyse la réaction de
transformation d’une molécule A en présence d’eau en molécule B + C, selon la réaction
suivante (A + H2O <=====> B + C). La mesure de l’apparition de B en fonction du
temps pour une concentration en A de 0,1 M donne les résultats suivants.

Temps en minutes 0 0,5 1 2 3 4 5 6

B en µmoles 0 40 79 158 198 220 228 230

Q1. Que représentent A; B et C pour l’enzyme ?

A est le substrat de l’enzyme, B et C sont les produits de la réaction
Q2. A quelle classe appartient cette enzyme ?
Cette enzyme est appartient à la classe des hydrolases
Q3. Tracer la courbe de la concentration de B en fonction du temps. En utilisant la
moitié du papier millimétré

dp

dt

Q4. Déduire la vitesse initiale de la réaction enzymatique.

La Vi est égale à 79 µmoles/min
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B. Par la même méthode ce groupe d’étudiants a mesuré la vitesse initiale de cette enzyme
pour différentes concentrations de A. Les résultats obtenus sont représentés dans le
tableau suivant.

A en mol/L 0,01 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1 0,2

Vi en µmole/minute 28 43 60 69 74 79 86

Q5. Dressez un tableau en indiquant les valeurs 1/Vi pour les inverses 1/[A]. En
complétant la valeur de Vi et 1/Vi pour la [A]= 0,1 mol/L
1/A en M-1 100 50 25 16.6 12.5 10 5
1/Vi min/µmol 0.0357 0.0232 0.0166 0.0144 0.0135 0.0126 0.0116

Q6. Tracez sur la 2ième moitié du papier millimétré la courbe 1/Vi = f(1/[A]).

Q7. Déterminer graphiquement les paramètres cinétiques de l’enzyme (KM et Vmax)

1/Vmax = 0.01 minµmole Vmax = 100µmoles/min
-1/KM = -40 M KM = 0.025 M
C. Un inhibiteur non compétitif (KI = 1,5.10-4M) est ajouté au milieu réactionnel contenant
l’enzyme E et la molécule A en excès. La vitesse maximale atteinte dans ces conditions
correspond à la moitié de la Vmax trouvée sans inhibiteur.
Q8. Tracer sur le même graphique (question 6), la droite 1/Vi = f(1/[A]) en présence
de cet inhibiteur.
Q9. Déterminer les nouveaux paramètres cinétiques en présence de l’inhibiteur
KM = 0.025 M et Vmax = 50µmoles/min
Q10. Calculer la concentration de l’inhibiteur utilisée dans ce cas.
Vmax appa = Vmax/1+1/ki
I = 0,75 10-4 M
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