III.

ENZYMES

ផលសិក្សា

ក្រោយពីោរសិក្សាក្េក្រៀន enzymes អស់រយៈក្ពល 4 ក្ ៉ោ ង និសសិតទាំងអស់អាចៈ

-ក្សាំណត់ន័យចាស់លាស់ពីោរក្ៅក្្មោះ រចនាសេព័នធរបស់ Enzymes
-ចាំណាត់ថ្នាក្ស់ Enzymes
-ពិពណន៍នាពី Cinétiques enzymatiques
-ពិពណន៍នាពី Effecteurs enzymatiques
-ពិពណន៍នាពី mécanismes d’action des enzymes

PLAN

3.1-Généralités
3.2-Nomenclature et classification
3.3-Structure d’enzyme
3.4-Mécanisme d’action des enzymes
3.5-Cinétique enzymatique
3.6-Effecteurs enzymatiques

3.1- lkçN³TUeTA

ENZYME
-Protéine
Protéine -Catalyseur Protéine + non protéine
(Apoenzyme) (Coenzyme)
NH2 COOH

Site actif -le site de liaison/f ixation/reconnaissance( site de régulation) Site actif
-site catalytique
Cofacteur métaux :Mg,Co,Cu,Zn, Fe,Mo, Mn..
ou Coenzyme Organique : les vitamines ( coenzyme)
Composés tétrapyrolique

1
3.1.1- niymn½y ³ Enzyme KWCaRbUetGIunEdlman
-ma:s;m:Ulx<s; (masse moléculaire élevée)
-xUcnwgkemþA (thermolabile)
-CaCIvkatalIkredayELk (biocatalyseur spécifique) rbssMNuM;RbtikmµKImI បំ

លែង(métabolisme)EdlekItmaneLIgkñúgPav³រស់.
katalIkenHGac ³
. dMeNIrkar)annUvkMhab;exSay ដោយ
. begáInel,ÓnRbtikmµ 10 - 10 dg
8 11

.EtKµankarERbRbYllT§plbB©ab;

2
.minERbRbYl Constante d’équilibre rbs;Rbtikmµ
. ekIteLIgvijdEdleBlcb;Rbtikmµ ( protéine + cofateur)

.minERbRbYlRbePT (nature)
.nwgminERbRbYl bilan thermodynamique rbs;RbtikmµKImI

Ex:Anhydrase carbonique (264 acides aminés) មាននៅគ្រប់នោសិោជា

ោតាលីកកនុងគ្បតិកម្ម បូក (réaction d’addition) CO2 et H2O

3
Substrat: ម្ូនលរុលចូលរួម្កនុងគ្បតិកម្មបំលលងលែលមានអង់សុីម្ជាោតាលីក

Produit: ម្ូនលរុលលែលនកើតន ើងនោយគ្បតិកម្មបំលលងលែលមានអង់

សុីម្ជាោតាលីក។

Ligand: អងគធាតិរីម្ីលែលមានសម្ព័នធនោយល ក(liaison spécifique)

ជាម្ួយ proteine ( មាន site de fixation)

3.1.2- skmµPaBrbs; Enzymes (activité enzymatique)

Quantité transformée (mol.produit S-1}

Sans enzyme
cMnYnbMElgedayKµanGg;sIum
Quantité transformée en présence d’enzyme
1catal (cat)
cMnYnbMElgedaymanGg;sIum cMnYnGg;sIumEdlbegáIn
Activité enzymatique (mol.S-1 =cat) karbMElg)an 1mol.S-1
skmµPaBrbs;Gg;sIum

4
 3.1.3- Spécification (PaBedayELk)
PaBedayELkman2Ebb ³
3.1.3.1- PaBedayELkCamYynwgFatubgá (Spécificité vis-à-vis du substrat) : EnzymemYyman

GMeBIEtelIFatubgámYy b¤ RKYsarénFatubgáenHEdlmanecnasm<½nd§ UcKñaEmnETn.

Ex : Arginase kat; Arginine Ca Ornithine nig Urée. Uréase bMElg Urée Ca Carbonate

d’ammonium. BYk Lipases eFVIGIuRdatkmµBYk Triglycérides. BYk esterases eFVIGIuRdatkmµBYk esters

mYycMnYnFM.

PaBedayELkCamYynwgRbtikmµ (Spécificité de la réaction ou d’action)

3.1.3.2-

Enzyme mYymanGMeBIEteTAelIRbtikmµmYyEbb dUcCaRbtikmµ GIuRdatkmµ epÞrbNþMú méthyle…

5
 Spécificité d’action Spécificité de substrat
A forte forte
B forte faible
C faible faible

3.2- namvlI nig karcMNat;fñak; (NOMENCLATURE ET CLASSIFICATION) :

3.2.1- Nomenclature(នាេវលី)

6
. eQµaH Fatubgá + Suffixe: ASE Ex : peptide → peptidase, oside → osidase…
. BYk enzymes protéolytiques xøHminGnuvtþtamk,ÜnxagelIeTrkSaeQµaHedImdEdl

] ³ pepsine, Chymotrepsine, trypsine,….

. edaysarGg;sIummaneRcIn eKឲ្យeQµaHtamRbB½n§ (nom systématique) EdlbB¢aak;BIeQµaH

Substrat nigEbbEpnRbtikmµKW eQµaH Fatubgá + EbbEpnRbtikmµ + suffixe : Ase.

] ³ glucose-6-phosphate déshydrogénase CakatalIkrkñúgRbtikmµ dk hydrogène ecjBI
glucose-6-phosphate. Isocitrate lyase. Pyruvate carboxylase….

kñúgkrNI Enzyme eRbI 2 substrats eQµaHrbs;va = eQµaH Fatubgá[ radical + eQµaH FatubgáTTYl
radical + eQµaH radical + EbbEpnRbtikmµ + suffixe ase.

Ex. : ATP-glucose phosphotransférase, UDP glucose-fructose glucosyltransférase,

Glutamate pyruvate aminotransférase…
. Enzymes xøHeTótrkSa eQµaHrYm (nom commun) kñúgkareRbI ]³ phosphatase alcaline,
hexokinase,…

.edIm,IgayRsYleKGaceRbIelxkUd (Numéro de code) ou la nomenclature officielle :

EC X1.X2.X3.X4.
X1 : type de réaction (groupe ou classe)
X2 : mécanisme d’action (sous-classe)
X3 : nature du molécule qui sert d’accepteur (sous-sous-classe)
X4 : numéro d’ordre

dUcenH Enzyme mYymaneQµaHrYm (nom commun)eQµaHtamRbB½n§ (nom systématique) nigelxkUd

(numéro de code).
Ex : - Lactate déshydrogénase (nom commun)
- Lactate NAD+ oxydoréductase (nom systématique)
- E.C.1.1.1.27 (numéro de code)

3.2.2- Classification
qñaM 1961 Union internationale de Biochimie )ancMNat;fñak;CapøÚvkarCa 6 Rkum (groupe ou classe)
7
 tamEbbEpnRbtikmµEdlmanvaCakatalIkr. kñgú RkumnimYy² eKEckCaGnuRkum (sous-groupe ou
sous-classe) CaGnu-GnuRkum (sous-sous-groupe ou sous-sous-classe) nigelxlMdab; (numéro

d’ordre) .

edIm,IgayRsYleKtageGayGg;sIumnimYy² CaelxkUd (numéro de code) nigenABImuxman GkSr BIrtYKW

EC tageGay Enzyme Commission.

* elxTI1tageGayRkum ³ eKcMNat;fñak;RbtikmµTMagGs;Ca 6 Rkum ³

3.2.2.1-RkumTI1BYkGuksIudUerdukkmµ (1 classe : les oxydoréductases)EC1 : CaBYkGg;sIumEdl
ère

CakatalIkrkñúgRbtikmµ GuksIudUerdukkmµEdlmantYnaTICaGñkepÞr Electrons, Protons b¤P¢ab;

Oxygène. Exemples des principales enzymes d’oxydoréduction :
- Déshydrogénase des fonctions alcool, carbonyl ou carboxyliques :
Ex : Alcool déshydrogénase, malate déshy, aldéhyde déshy, pyruvate déshy…

- Déshydogénase faisant apparaître des doubles liaisons : succinate déshy.

- Déshydogénase agissant sur les fonctions azotées :L-glutamate déshy.

- Enzyme participant au transfert d’électrons dans la mitochondrie : Succinate coenzyme G

réductase, Cytochrome c oxydase….

- Oxygénases : monooxygénase, dioxygénase.

Exemples

8
3.2.2.2-RkumTI 2 BYkepÞr (2 classe: les transférases)EC2 : CaBYkGg;sIumEdlCakatalIkrkñúg
ème

Rbtikmµ epÞrBYk Radicaux b¤ bNþúMGatUmrbs;mU:elKulmYyeTAeGaymU:elKuleTót.

BYk Radicaux enHGacmankabUn1 b¤eRcIn

9
10
3.2.2.3- RkumTI3 Hydrolases (3 classe: les Hydrolases) EC3: CaBYkGg;sIumEdlCakatalIkr
ème

kñúgRbtikmµFøak;cuH (dégradation) manGMeBIkat;pþac; (clivage) mU:elKuledaymanTwkcUlrYm nigP¢ab;Fatu

pSMrbs;TwkeTAnwgmU:elKulEdlkat; (hydrolyse). eKEbgEckBYk Hydrolases Edkkat; BYk glucides
ehA Osidase BYk Esters phosphoriques ehA Phosphatase BYk Lipides ehA Lipase, etc…

11
12
3.2.2.4- RkumTI 4 Lyases (4 classe : les Lyases ou synthase)EC4 : CaBYkGg;sIumEdlCakata lIkr
ème

kñúgRbtikmµdk (enlever) bNþMúecjBImU:elKuledayKµaneFVItam Hydrolyse eTKWCaBYk Décarboxylases,

Déshydratases, Carboxylases,aldéhydes lyases, citrate synthase, fumarase ou fumarate
hydratase, énolase etc…

3.2.2.5- RkumTI 5 Isomérases (5 classe : les Isomérases)EC5 : CaBYkGg;sIumEdlCa katalIkr

ème

kñúgRbtikmµbMErbMrYlrcnasm<½n§kñúgmU:elKul EtKµanERbRbYlrUbmnþsrub (formule globale).

13
vaGacCaGg;suImEdlCYyeGaymankarpøas;bþÚr configuration rbs; Carbone asymétrique (Racéma-
ses, Epimérases) rMkil (déplacer) radical enAkñúgmU:elKul RbtikmµGuksIudUerdukkmµ kñúgm:UelKul

(oxydo-réduction intramoléculaire) ehA Dismutase.

L’action de l’épimérase convertit en configuration L

3.2.2.6- RkumTI 6 Ligases (6 classe : les Ligases ou synthétases)EC6 :

ème

CaBYkGg;sIumEdlCa katalIkr kñúgRbtikmµbegáItsm<n§½ C-C, C-O, C-S, C-N, O-P famBl

eRbIR)as;)anmkBI hydrolyse BYkcMNgsMbUrfamBl (liaison riche en énergie) ឧ៖ ATP.

14
 * elxTI2 tageGayGnuRkum (sous classe) ³ bB¢aak;BRI bePTKImIrbs;bNþúMEdleGay .
] ³ kñúgRkum oxydoréductases manBYk Déshydrogénases EdlCakatalIkrkñúgkarepÞr
Hydrogène, oxygénases CakatalIkrkñúgkarepÞr Oxygène.

* elxTI3 tageGayGnu-GnuRkum (Sous-sous classe) ³ bB¢aak;BIRbePTKImIrbs;GñkTTYl

(accepteur).

*elxTI4 tageGayelxlMdab; (numéro d’ordre) ³ bB¢aak;BIelxerógrbs;va

Ex.: E.C.1.1.1.27 : oxydoréductase (classe) CakatalIkrkñúkarepÞr hydrgène edaymanGMeBI

eTAelIbNMþú CHOH (sous classe 1) GñkTTYl hydrogène KW NAD (sous-sous classe1), enzyme
+

enHCa Lactate déshydrogénase EdlmanelxerógTI 27 kñúgGnu-GnuRkum.

3.3- rcnasm<½n§ (STRUCTURE)

Enzymes CaRbUetGIunmanlkçN³rUb KImIdUcBYk Macromolécules.

Enzyme មានលននកសកម្មនៅ site actif.
3.3.1- Enzymes mYycMnYnpSMeLIgBIRbUetGIunsuT§ dUcenHEpñkskmµrbs;vaehA Site actif KWCa BYk
Acides aminés mYycMnYntUcEdlenAkñúgrcnasm<½n§rbs;Gg;sIum.

. Enzymes xøHpSMeLIgBI 1ExS polypeptide CaBYk Enzyme monomérique EdlGacman rcnasm<½n§

fñak;TI1 TI2 nig TI3 Ex. : chymotrypsine, trypsine, élastase, carboxypeptidase A, pepsine
(pSMeLIgBI 100eTA 300 GasIutGamIeN nigman PM= 1300-3500).

. Enzyme xøHeTótpSMeLIgBIeRcInExS polypeptide (sous-unités) CaBYk Enzyme oligomériques

Edlmanrcnasm<½n§ fñak;TI 4 Ex. : lactate déshydrogénase (LDH), tryptophane synthase,

pyruvate déshydrogénase, etc….

LDH pSMeLIgBI 4 sous-unités (tétramère). Sous-unité enHman 2EbbehA Cœur (A) et Muscle

(B). A nig B GacP¢ab;Kña)an 5 Ebb begáItCa Isozymes Tétramères (AAAA, AAAB, AABB,

ABBB et BBBB) Edlrt;xus²KñaenAkñúg Electrophorèse. AAAA (LDH5) rt;elÓnCageK

ehIymaneRcInenAkñgú ebHdUg BBBB (LDH1) rt;yWtCageKehIymaneRcInenAkñúg muscle

15
squelettique nigeføIm. LDH: Lacticodéshydrogénase ou déshydrogénase lactique:
Ex: infarctus du myocarde (LDH1↑), myocardite(LDH1↑ et LDH2↑), hépatite aiguë
(LDH5↑), anémie hémolytique (LDH1, LDH2 et LDH3 ↑ )…….

cathode (-)
………... origine
LDH1
\ LDH2
LDH3
LDH4
LDH5
Anode (+)

3.3.2- Enzyme mYycMnYnFMpSMeLIgBIRbUetGuInehA Apoenzyme nigbNþm

úM inEmnRbUetGIun
(groupement prosthétique, Cofacteurs ou coenzyme) EdlCaEpñkskmµrbs;
Enzyme.
Haloenzyme = apoenzyme :A + cofacteur ou coenzyme : Co (complexe
Fonctionnel :A-Co = Cofacteurs ou coenzymes ភ្ជាប់ជារក្បៀបបក្ណា
ត ោះអាសនា
ើ ោច់វញិ ដេែចប់ប្បតិកម្ម។
ជាេួយ(façon transitoire)apoenzyme ដៅជាកាតាែីក ដ យ
Coenzymeដ េះដៅ coenzyme vrais ou coenzyme cosubstrat.
Un groupement prosthétique – cofacteur ou coenzyme lié de façon covalente à
l’enzyme. Coenzyme មា តួនាទីជា
Activateur.
Par exemple, l’oxydase d’acide D-aminé catalyse la réaction suivante

16
 3.3.2.1- Cofacteurs
CaGgÁFatuKImIEdlcaM)ac;RtUvcUlrYmkñúgRbtikmµEdlmanGg;sIumCakatalIkr (Réaction enzymatique) ³
- edIm,I dwknaMb¤bMeBjbEnßmFatubgá ( pour transporter ou compléter un substrat)
- នែើម្បីទទួលយកនលិតនល(pour accepter un produit)

-ចាត់ទុកែូជាធាតុនសំរបស់អង់សុីម្ (comme participant à la structure de l’enzyme)

Les cofacteurs អាចជា ions (Ca2+, Mg2+, Mn2+,…) comme l’atome de Zinc de
l’anhydrase carbonique ou de petites molécules minérales habituellement présentes
dans les milieux biologiques, à commencer bien sûr par la molécule d’eau.
cofacteurs ខ្លះនទៀតជាmolécules plus complexes សំនោរនោយនោសិោនៅ
coenzymes.

Coenzymes
Molécule biologique intervenant comme cofacteur indispensable dans la
catalyse enzymatique d’une réaction :
- les coenzymes libres interviennent dans la réaction de manière
stoechiométrique ;
- les coenzymes liés interviennent dans la réaction de manière catalytique.
- សឹងលតប្រប់វតាី ម្ី រលាយកនងុ ទឹក ងិ កនងុ ខ្លាញ់ដែើកលែង
vitamin A (liposoluble) et

viatmine C (hydrosoluble) ជា Coenzyme .

-Coenzymes មា តួនាទីជាអ្នកទទួែ (accepteur) ិងដឹកនាំ(transporteur) radicaux

លដែោច់ដចញដេែដ្វើកាតាែីស រឺភ្ជាប់ ិងដឹកនាំ។

- des hydrogenes et des electrons dans les reactions d'oxydoreduction.
- des radicaux autres que l'hydrogene et les electrons dans les autres reactions.

lls transportent le radical d'un compose A a un compose B. La reaction globale catalysee est la
suivante :
A-R + B ⎯→ A + B-R (echange du radical R entre A et B)

La catalyse va comporter les etapes suivantes :

Y A-R + E-Co ⎯→ A + E-Co-R (etape 1 : prise en charge du radical)

Y E-Co-R + B ⎯→ B-R + E-Co (etape 2 : transport sur B)
Y E-Co ⎯→ E + Co (etape 3: dissociation de l'holoenzyme uniquement s'il s'agit
d'un coenzyme cosubstrat)

17
Un cofacteur vide est en place dans le site actif d'un holoenzyme. Lorsque le substrat se lie
au site actif, une partie en est séparée et se lie au coenzyme. Le substrat tronqué (le
produit) et la coenzyme se détachent alors de l'enzyme.

La coenzyme chargée se place dans le site actif d'une autre enzyme et cède la portion de la
molécule transportée à un autre substrat, qui une fois modifié se sépare de cette deuxième
enzyme, en même temps que la coenzyme. La coenzyme est alors prête pour un autre cycle.

Effet du groupe prosthétique. Ici, le site actif ne peut être correctement conformé
à moins qu'un ion métallique ne soit en place.

18
19
20
21
Enzymes comportant un coenzyme métallique ( cofacteur métallique)
Alcool déshydrogénase, anhydrase carbonique ................................................Zn
Arginase, aminopeptidase.................................................................................Mn
Dipeptidase.......................................................................................................Co
Phosphatase , phosphokinase............................................................................Mg
Thyrosine hydroxylase.....................................................................................Cu
Succinodéshydrgénase......................................................................................Fe
Xanthine oxydase............................................................................................Mo

22
 3.3.2.2- Site actif de l’enzyme
- Site actif គឺជាrégion tridimensionnelleដែលភ្ជាប់ក្ៅនិងធាតុបងកដែល
ជាទូក្ៅពួគេូក្លគុលដែល ន chaînes latérales ioniques ou
réactives (ex. His, Lys, Cys, Ser, Asp, Glu).
សេព័នធ (liaison) រវាងធាតុបងក( substrat)ជាេួយ ទីតាំងសក្សេម( site actif)ជាសេព័នធ
ភ្ជគក្រចើនnon-covalentes de types
- van der Waals
- électrostatiques
- ponts hydrogènes
Site actif ចែក្សជា៖
-Site de liaison/de reconnaissance/de fixation/de régulation
-Site catalytique
Enzyme
Substrat A Produit B RbtikmµenHdMeNIrkarkñúgEpñkmYyskmµrbs;
enzyme ehA site actif (ដែើ enzyme ដេែចប់ប្បតិកម្មោច់ោច់ដចញេី enzyme).

Ex. : Ribonucléase Ca enzyme mantYnaTI hydrolyse BYk RNA. Ribonucléase pSMeLIgBI1 ExS

peptide (124 AA) nigman 4 cMNg disulfure. Site catalytiqueCaGasIutGamIeNeQµaH Histidine TI

12 nig TI 119. His TI 12 manGMeBIelI OH rbs; Ribose nig His TI 119 manGMeBIelI Phosphoryle.

Acides aminés BITI 31-41 (Ca site de fixation) man 5 GasuItGamIeN. Basiques

EdlmantYnaTIP¢ab;eTA RNA.

23
 -Acétycholine esterase (Nachmanson)
Site de fixation estérasique CH3 NH2
Sérine

O C OH CH COOH
HOOC HC H2C
O HO CH2 CH COOH
NH2 HN N
CH2 NH2
Histidine
CH2 Tyrosine

N+
CH3
H3 C
CH3

Site de fixation anionique

CH3

CH3 C O C C N+ CH3 H2O

CH3COOH + HOH2C-CH2-N+(CH3)3
O H2 H2
CH3
acétylcholine A.acétique choline
Acétylcholine esterase

- Sites de fixation rbs;vaman 2 Epñk ³

. Un site estérasique P¢ab; Acétyle Rtg; សម្ព័ ធester.

. Un site anionique P¢ab;Rtg; Azote EdlmanbnÞúkviC¢man

- Site catalytiqueman 3 Acides aminés :

. Sérine et histidine P¢ab;eTA Carboxyle

. Tyrosine P¢ab;eTAGakul

karrMkil électron naMeGayសម្ព័ ធ ester RsYyCaehtunaMeGaydac;.

- សម្ព័ ធ disulfure et សម្ព័ eធ xSaymantYnaTIRKwHkñúgkarRbmUl (rapprocher) acides aminés rbs; site

actif.

- kñúg sites catalytiques rbs;Gg;sIumEdleKsÁal;mYycMnYnFMman Acides aminés : sérine, cystéine,

histidine, tyrosine et lysine mYy b¤ eRcIn.

- Enzymes hydrolytiques CaeRcIn (Enzymes protéolytiques, phosphatase alcaline,

acétylcholine esterase man sérine enAkñúg site actif.

- eKeXIjman cystéine enAkñúg site actif rbs;Gg;sIummYycMnnY FMdUcCa phosphoglycéraldéhyde

24
 déshydrogénase, alcool déshydrogénase, BYk enzymes protéolytiques dUcCa papaine.
rebóbrk Site actf : Cajwkjab;eKeRbIsarFatumYyeTAP¢ab; CaBiessCamYyGasIutGamIeN . ebI AA
enaHCa AA rbs; site actif eKeXIjGg;sIumenaHGskmµ.
Ex. :
P¢ab;edayELkeTAnwg sérine . vaCa inhibiteur des
- Le diisopropylfluorophosphate ou DFP

enzymes hydrolytiques CaBiess Acétylcholine esterase.

DFP ou diisopropylfluorophosphate
H3C O O
Sérine
H3C O
P
H3C
H3C O F H OH2C CH C OH

NH2

- Le parachloromercuribenzoate ou PCMB P¢ab;edayELkeTAnwg Cystéine.

Cystéine
O

Hg Cl H S-CH2 CH C OH

NH2

Parachloromercuribenzoate ( PCMB )
COOH

3.4- MECANISME D’ACTION DES ENZYMES ( ចលនក្ស ននសក្សេមភ្ជពរបស់ ENZYMES)

La réaction enzymatique ជាប់ទក្ស់ទងនឹងោរភ្ជាប់ substrat ក្ៅទីតាំងសក្សេម (site actif )។
នេ៉ោូដែល (modèles)៖
1- Modèle de Fisher : Clé-serrure
Dans ce modèle, la formation du complexe enzyme-substrat ES nécessite une interaction entre un
ou plusieurs groupes fonctionnels ou domaines du substrat avec des motifs de la cavité
enzymatique.
Ce modèle explique la spécificité de l’enzyme pour son substrat, mais il n’explique pas l’effet des
effecteurs

25
2- Modèle de Koshland : Ajustement induit
L’association enzyme-substrat est permise après une modification de la conformation de l’enzyme
induite par l’entrée partielle du substrat.

3- Modèle de Strain-Jenks :
L’enzyme et le substrat lorsqu’ils ne sont pas dans le milieu présentent chacun une conformation
particulière
La présence mutuelle de ces 2 molécules entraine une déformation partagée de l’enzyme et du
substrat, de manière à ce que le substrat se fixe sur les fonctions complémentaires des acides
aminés de contacts

3.4.1- La réaction enzymatique

Ex. :
- 2H2O2 → 2H2O + O2 RtUvkarfamBl 18 Kcal/mole edIm,IeTAdl; état de Transition. ebI
eRbIelah³CakatalIkr (platine) eKeRbIfamBlGs; 12Kcal/mole. EtebIeRbI Enzyme spécifique
(catalase) eKeRbIfamBlGs;Et 7Kcal/mole.

26
- Hydrolyse des protéines ebIeRbI HCL CakatalIkr eRbIfamBlGs; 20Kcal/mole. EtebI eRbI Enzyme
(Trypsine) eKeRbIfamBlGs;Et 12Kcal/mole.
3.4.1.1- Energie d’activation
.Rbtikmµcab;dMeNIkarBI état transitoire, ∆G CafamBldMeNIkarRbtikmµ (énergie de la réaction).
.famBlEdleRbIBI état initial dl; état transitoire ehA énergie d’activation

27
 . Enzyme manGMeBIticeTAelI état final rbs;lMnwg (équilibre) CacMNucmYysMxan;eRBaHkñúgeka
sikasMbUreTAedayRbtikmµeTAmk (réaction réversible).
Ex:

R-COOR’ + H2O R-COOH + R’OH

Ester Twk Hydrolyse GasIut Gakul
20% 80%
 glucoside + H2O glucose + alcool
75% 25%

eK)anlT§plbBa©b;dUcKñaebIeKecjdMeNIrBI glucoside b¤l,ay glucose et alcool. dUcenHRbtikmµ man

enzyme lMnwgbBa©b; (équilibre final) enAdEdlbu:EnþRbtikmµelÓnCagmun.

eK)anlT§plbBa©b;dUcKñaebIeK
ecjdMeNIrBI ester(courbe b)
b¤l,ay acide gras et alcool
(courbe a) dUcenHRbtikmµman

enzyme lMnwgbBa©b;enAdEdl

bu:EnþRbtikmµelOnCagmun .
Acides gras libres (%)

temps (minute)

Rbtikmµman enzyme eRcIn (réactions polyenzymatiques ) : kñúgekasikaFatubgámyY GaccUlkñúg

3.4.1.2-

voies métabolique eRcIn.

1 C→ D → E
A + B

2 L→ M → N

28
 CaeKalkarN_ enzyme minERbRbYlFatupSMrbs;lnM wgeT EtERbRbYlbrimaNeTAtamcMnYn enzyme EdlmaneRcIn
b¤ ticenAkñúgekasika .

3.4.2- sItuNðPaB nig RbtikmµeRbI enzyme (température et réaction enzymatique)

Rbtikmµmanb¤Gt; enzyme Vitesse de
réaction
sItuNðPaBbegáInel,Ón
Rbtikmµ. EtsItuNðPaBeFVI
eGay enzyme ERbePT
dUcenHel,ÓnRbtikmµman
enzymeCalT§plsrub

rvag courbe a et b KW
courbe R

3.4.3- Le pH et activité enzymatique

RbtikmµmanGg;sIumERbRbYlxøaMgCamYy pH rbs;mCÄdæan. eKeXIjmanktþa 3 ³

- pH extreme ou pH d’arrêt bMErbMrYl mineTAmk (irréversible) nUvrcnasm<½n§rbs;Gg;sIum eday

ERbePTRbUetGuIn nig krNIxøHbMErbMrYlcMNgrvag Apoenzyme et coenzyme.

- kñúgkrNImYycMnYnFM pH GacbMErbMrYl ionisation rbs;Fatubgá (substrat)
- pH GacmanGMeBIeTAelIRbtikmµ enzyme-substrat nigelI catalyse edaybMErbMrYlkarpþac; Acides aminés
rbs; Site actif.

29
activité pH
enzymatique coube B en plateau -1
-2 Pepsine

-3

-4

courbe A -5 Phosphatase acide

en cloche
-6 α glucosidase
Uréase
-7 Amylase pancréatique
Carboxypeptidase
-8 Trypsine

pH dárrêt pH optimum pH d’arrêt -9 Phosphatase alcalin

-10 Arginase

. Enzyme PaKeRcInman pH optimum BI 5eTA8.

. kñúg biologie cliniqueeKeFIV dosage d’activité enzymatiqueenA pH optimum.
. Enzymes BIrmanlkçN³edayELk (spécificité) dUcKñaEtmkBICalikaxusKñaman pH optimum
xusKña.
] ³ - Phosphatase alcaline hépatique man pH optimum ≈ 9,0
- Phosphatase acide prostatique man pH optimum ≈ 5,0

3.5- CINETIQUE ENZYMATIQUE

KWsikSaBIel,ÓnRbtikmµKImI nig ktþaEdlTak;Tg.

. rkel,ÓnRbtikmµ (la vitesse de réaction) : KWrkcMnYnplitpl (produit) EdlekIteLIgeday sar
enzyme b¤ rkcMnYnFatubgá (substrat) Edl)at;kñúgmYyxñateBl.

. skmµPaBénmU:elKulGg;sIum (l’activité moléculaire d’un enzyme) : KWCacMnnY mU:elKulFatu

bgáEdlbMElgkñúgmYynaTIeday 1 mU:elKul enzyme kñúglkçN³l¥bMput (condition optimum).
30
3.5.1 - Vitesse de réaction en fonction du temps
el,ÓnRbtikmµ (vitesse de réaction) : V= -dS/dt =dP/dt
S=Fatubgá (substrat), P=plitpl (produit), t= eBl (temps) enAeBl t eK)an S
1 1 et P1

enAeBl t eK)an S et P
2 2 2

dS = S2 - S1
dP = P2 - P1
dt = t2 - t1
- Réaction d’ordre zéro: KWCaRbtikmµEdlcMnYnFatubgábMElgkñúg 1 xñateBlefrehIyminBak;
B½n§eTAnwgkMhab;rbs;FatubgáEdlcUlrYmeLIy. eK)an el,ÓnRbtikmµ = -dc/dt = K
- dc CacMnYnfycuHrbs;Fatubgá

dt Ca variation du temps

concentration

Réaction d’ordre zéro

- Réaction d’ordre un : KWCaRbtikmµEdlcMnYnFatubgábMElgkñúg 1 xñateBlsmamaRt
(proportionnelle) eTAnwgcMnYnFatubgáEdlkMBugmankñúgRbtikmµ.

eK)an el,ÓnRbtikmµ = -dc/dt = Kc

courbe exponentielle

décroissante

concentration

Réaction d’ordre un
3.5.2- Vitesse de réaction en fonction de la concentration d’enzyme
CaTUeTARbtikmµmanGg;sIumRbRBwtþeTAedaymanFatubgáeRcInhYs (excès). kñúglkçN³enH
el,ÓnRbtikmµsmamaRteTAnwgcMnYnGg;suImEdlmanenAkñúgmCÄdæan.

31
Vitesse
De réaction minecjBI origine eRBaH
RbtikmµekItmundak; enzyme

Concentratiom d’enzyme

3.5.3- Vitesse de réaction en fonction de la concentration de substrat

- sikSaeday Victor Henri (1905) bnÞab;mk Michaelis et Menten (1913).
- el,ÓnRbtikmµminsmamaRtnwgkMhab;rbs;Fatubgá. vaekIneLIgtamkMhab;rbs;Fatubgá rYcefr
dUcenHel,ÓnRbtikmµekIneLIgy:agelOndl;kRmitGtibrma (maximum) KWCael,ÓnGtibrma (vitesse
maximum : Vmax )
Rbtikmµman enzyme :
V1 K1 V3 K3
E + S ES E + P
V2 K2

S : kMhab;rbs;Fatubgá
E : kMhab;rbs; enzyme TaMgGs;

ES : kMhab;rbs;; enzyme-substrat Edl)an KWkMhab;rbs; enzyme EdlP¢ab;

P : kMhab;rbs;plitplEdl)an

(E - ES) : kMhab;rbs; enzyme EdlminTan;P¢ab;Fatubgá (enzyme libre)

K1 : constante de vitesse de formation du complexe ES
K2 : constante de vitesse de dissociation du complexe ES
K3 : constante de vitesse de formation du produit P
RbtikmµenHGacEckCa 2 dMNak;kal (2 étapes) :
- dMNak;kalTI 1 ³ karbegáIt complexe ES (RbtikmµeTAmk)
- dMNak;kalTI 2 ³ karpþac; complexe ES edIm,I)an E nig P
- tam loi d’action de masse :
V1 = K1 E S
V2 = K2 ES
V3 = K3 ES
- Equation de Michaelis-Menten : el,ÓnRbtikmµman Enzyme smamaRt ES. el,Ónkar begáIt
32
 ES smamaRtnwg S et enzyme libre (E - ES) edaykMhab;rbs; S x<s; (élevée) dUcenH
eKGacminKit (négliser) cMnYn S EdlP¢ab;eTA enzyme. eKGacsresr ³ dES/dt = K S ( E -
1

ES ) (1) el,Ónkar)at; ES smamaRtnwg ES dUcenHeK)an ³ -dES/dt = K ES+K ES (2)
2 3

enAeBlel,ÓnRbtikmµman Enzyme : V = el,Ónkar)at;Fatubgá S = -dS/dt = el,ÓnkarekIteLIg

plitpl P = +dP/dt eK)an (1) = (2)
K1S (E - ES) = K2ES+K3ES (3)

K 2 + K3
 = Km ou (K2 + K3) / K1 = Km = constante de Michaelis
K1
ebI K mantémøtUceRbóbeFób
3 K2 => Km K2 => (3) Gacsresr ³
Km = S (E - ES) / ES (4) => ES = S E / Km + S (5)
La vitesse initiale de réaction est proportionnelle ( smamaRt) à ES :
V = K3ES
ebIeKdak;FatubgáeRcInelIslub (grand excès) eK)an vitesse maximale EdlsmamaRtnwgcMnYn enzyme
enAkñúgmCÄdæan. eKGaccat;Tuk enzyme TaMgGs;manTRmg;Ca ES ³
V = K3E
kñúg (5) CMnYs ES et E edayel,ÓnEdlsmamaRtnwgcMnYnrbs;vaeK)an ³
V = Vmax S / Km + S (6) équation de Michaelis-Menten

ebI V = ½ valeur maxima eK)an ³ S / Km + S = 1/2=> Km = S

Km Ca constante de dissociation du complexe ES témørbs;vabBa¢ak;BITMenarrbs; enzyme

eTAelIFatubgá ³
Km↑ => enzyme manTMenarexSayeTAelIFatubgá

Km↓ => enzyme manTMenarxøMageTAelIFatubgá

K et K bBa¢ak;BITMenar (affinité) rbs;Gg;suImeTAelIFatubgá

1 2

K bBa¢ak;Bk
3 I arbMElg (transformation) ES Ca P (bBa¢ak;BIGMeBIrbs;Gg;suIm ).

33
L’équation en inverse :

K/ Vmax Ca constante. ebIeKKU courbe 1/V eTAtamkarERbRbYl 1/S

eK)anbnÞat;Rtg; (droite) Edlman pente = Km/ V . bnÞat;enHkat; ordonnées Rtg; 1/V
max ma

(puisque 1/S tend alors vers zéro) kat; abscisse Rtg; -1/ Km

l,ÓnRbtikmµtamkarERbRbYlénkMhab;rbs;Fatubgá ³ rUbtMNag Lineweaver-Burk

1/V y
-
-
-
-
- 1/Km
2/Vmax --------
-
-
1/Vmax -
-

. . . . . . . . . . . . . . .

-1/Km 1/S x

3.5.4- Enzyme agissant sur plusieurs substrats simultanément

Enzymes CaeRcInmanGMeBIeTAelIFatubgá 2 EdlcUlrYmRbtikmµ. eKeXIjGacekItman ³
3.5.4.1- Complexe ternaire : Enzyme man Site de fixation rbs;FatubgáedayELkBIKña man
2krNI ³

- lMdab;fñak;karP¢ab;FatubgáminBak;B½n§Kña (indifférente) ³ A et B Fatubgá E=enzyme, P et R

plitpl
E + A  EA

EAB E + P + R
E + B  EB

- lMdab;fñak;karP¢ab;FatubgáBak;B½n§Kña (TisedAEtmYy univoque) :

E + A  EA + B  EAB E + P + R
Ex. : oxydation du substrat Edlman
coenzyme déshydrogénase Ca .
Mecanisme de formation du complexe enzymatique et de la catalyse

34
 Le NAD+ se fixe d'abord sur l'apoenzyme pour former l'holoenzyme. Ce dernier
fixe ensuite le substrat pour former un complexe ternaire au niveau duquel se
font les echanges des electrons et des protons. Les etapes sont les suivantes :
-E + NAD+ ⎯→ E-NAD+ (holoenzyme)
+ +
-E-NAD + SH2 ⎯→ H2S-E-NAD (Complexe ternaire)
-H2S-E-NAD+⎯→ S-E-NADH,H+ (Echange des electrons et des protons)
-S-E-NADH,H+ ⎯→ E-NADH,H+ + S (Liberation du produit)
-E-NADH,H+ ⎯→ E + NADH,H+ (Dissociation de l'holoenzyme)

3.5.4.2- Complexe binaire (système ping-pong)

E + A  EA → E* + P
E* + B  E*B → E + R
Ex: Transaminase : Acide aminé (substrat) e)aHbg; amine eTAeGay enzyme ehIy enzyme epÞr
Amine enHeTAeGayFatubgámYyeTót .
3.6- EFFECTEURS ENZYMATIQUES
CasarFatuKImIEdlbMErbMrlY Rbtikmµman enzyme KWCaBYk :
- Activateurs : BYkbegáInel,ÓnRbtikmµ

- Inhibiteurs : BYkbnßyel,ÓnRbtikmµ
3.6.1- Les inhibiteurs :មា េ៌រប្កុម្៖inhibiteurs irreversible et réversible
3.6.1.1-Inhibiteurs irréversibles:

3.6.1.2-Inhibiteurs réversibles: មា
A-Inhibiteurs compétitfs : manrcnasm<½n§Rbhak;RbEhlnwgFatubgá. vamanTMenar
xøaMgCagFatubgákñúgkarP¢ab;eTA enzyme edayykkénøgrbs;Fatubgá.

35
 I= inhibiteur
E + S  ES → EP → E + P
E + I  EI => Ki = E I / EI => équation (7) Gacsresr ³
1 Km  1  1 1
=  1 +   +
V V max  Ki  S  V max
Equation bgðajfa cMnYn inhibiteur enAdEdlEtkMhab;rbs;FatubgáekIneLIg
=>1/S → zéro => Produit = o => V → Vmax
témørbs; vitesse maximale enAdEdldUcGt;man inhibiteur.
Ex. :
- Acide malonique (HOOC-CH2–COOH) Ca inhibiteur compétitif rbs;
succinodéshydrogénase EdlmanFatubgáCa Acide succinique (diacide à 4 carbones). inhiteur
enHxøMageRBaHebIeKdak; 50 dgticCagFatubgá (Acide succinique) eKeXIjskmµPaB inhibition )an
50% .

- Acide fluorocitrique Ca inhibiteur compétitif rbs; Aconitase Ca enzyme manGMeBIeTA elI

Acide citrique .
CH2 –COOH CH F–COOH
| |
C(OH)-COOH C(OH)-COOH
| |
CH2 –COOH CH2 –COOH
Acide citrique Acide fluorocitrique
- Amine quaternaire Ca inhibiteur compétitif rbs; acétylcholine estérase EdlCaGñk Hydrolyse
l’acétylcholine .
H3C R1

H3C N CH2 CH2 OCOCH3 R2 N+ R4

H3C R3
acétylcholine Amine quaternaire

. Inhibiteurs compétitifs mYycMnYnmanrcnasm<n§½Rbhak;RbEhlnwg Acides aminés, bases

puriques et pyrimidique EdlCaFatupSMrbs; protéines et acides nucléiques dUcCa ³

36
fluorophénylalanine dUc Phe, 5-fluorouracile dUc uracile, 2-amino-adénine dUc adénine.
. edaysarKMnitenHehIyeKGacbBa¢ak;BI Antimétabolites EdlmanmuxgarsMxan;kñúgkar Büa)al.
EX : sulfamides et dérivés manrcnasm<n§½dUc para-aminobenzoique ជាprécurseur កនង ុ ការផែិត acide
folique .. kgVH Acide folique naMeGayemeraKxøH minGacrIklUtlas; )an. Sulfamides រារាំងenzyme ដ្វើ

ឲ្យម្ិ អាចផែិតបា enHbBa¢ak;BIGMeBI Antibactérienne rbs; Sulfamides (រចនាសម្ព័ ប្ធ បហាក់ប្បល ែ ងឹ

para-aminobenzoique ដូចដ េះវាជា Inhibiteurs compétitifs) .

NH2 NH2

COOH SO2NH2
Acide para-aminobenzoique Sulfamide

B- Inhibiteurs non compétitifs : Ca inhibiteurs EdlP¢ab;nwg Enzyme CalkçN³eTA

mkenATItaMgxusBI site actif .
Ex :
- BYkelah³F¶n;EdlGacP¢ab;eTA –SH kñúg enzyme EdlCa Cys manmuxgasMxan;.
- Fluorure GacP¢ab;eTA Mg++.
- Ethylène-diamine-tétracétate ou EDTA GacP¢ab;eTAnwgelah³mYycMnYnFM. Inhibiteurs
enHeFVIeGayEpñkmYyrbs; enzyme GskmµCaehtunaMeGayel,ÓnRbtikmµ nig vitesse maximale fy
cuHEt constante de Michaelis minERbRbYl.

37
 3.6.2- Effecteurs allostériques
Le terme allostérique vient du grec allos, autre, et stereos, forme. Les enzymes
allostériques prennent une autre forme (une autre conformation) à la suite de
la liaison du modulateur.

mansarsMxan;kñúgekasikaeRBaHvaCaGñkføwgsm<½n§Rbtikmµ. Effecteurs manlkçN³ 3 ³

1- CaTUeTArcnasm<n§½xusq¶ayBIFatubgárbs; enzyme

2- GMeBIrbs;vamanlkçN³edayELk. ÉsarFatuEdlman rcnasm<n§½dUcKñaminmanGMeBIeTAelI eLIy.

3- vamanGMeBIeTAelI enzyme sMxan;TImYyrbs; chaîne métabolique

rUbtagBIlkçN³TueTArbs; effecteurs allostériques :

* A→ B →C → D →E E man effet allostérique
Rétroinhibition ou Feedback

Ce type de régulation est appelée rétrocontrôle (inhibition par « feed-back »).

A le substrat de E1 enzyme clé, allostérique, est un modulateur positif

(= activateur allostérique, il active l’enzyme) et G, le produit final est un
modulateur négatif (= inhibiteur allostérique, il inhibe l’enzyme).

Ex : kñúg E. Coli karsMeyaK L-isoleucine BI L-thréonine

L-thréonine B → C → D → E → L-isoleucine

Thréonine désaminase

D- Isoleucine manenAFmµCatiEtminmantYnaTICa inhibiteur eT.

H MG CoA Réductase
HMG CoA Mévalonate

Changement conformationnel et flexibilité

L’hexokinase catalyse la réaction : glucose + ATP -7 glucose-6-P. C’est une étape

38
clé du métabolisme des glucides.
La fixation de glucose entraîne une modification conformationnelle indispensable à la
mise en oeuvre de la catalyse

xøHbBaÄb;karsMeyaKsarFatuEdlekasikaminRtUvkar edayminb:HBal;karsMeyaK
* Inhibiteurs

EpñkmYyeTótenAkñúg métaboliisme complexe.

D → E → F

A → B → C
L → M → N

* Précurseur rbs;Fatubgá b¤ FatubgáxøÜnÉg GacCa Activateur de l’enzyme.

L → M → N → A → B → C → D

A → B → C → D

39
 Éksareyag

1-Biochimie génétique, biologie moléculaire. Jacqueline Étienne, Éric Clauser. 8ème édition. Masson,
Paris. 2004
2-Biologie moléculaire. Simon Beaumont. Dunod, Paris, 2007
3- Principes de Biologie Moléculaire en Biologie Clinque, Nedjma Ameziane, Marc Bogard, Jérôme
Lamoril; Campus référence, Elsevier, 2005
4-Biochimie générale. Jacques-Henry Weil. 11ème édition. Dunod, Paris. 2009

FIN

40