LES ENZYMES SERIQUES

INTRODUCTION

Macromolécules protéiques
catalyse des réactions chimiques
Leur présence est physiologique à des taux bien déterminés
Dosage: diagnostic, pronostic et surveillance de maladies
 MASSE MOLECULAIRE
Tableau I-Masse moléculaire des principales enzymes utilisées en clinique

ENZYME MASSE MOLECULAIRE

Lipase 48.000 +++
Amylase 50.000 +++
Créatine kinase (CK) 80.000
Transaminase glutamique 90.000
oxaloacétique (TGO)
Phosphatase acide (PAC) 100.000
Lacticodéshydrogénase (LDH) 140.000
Phosphatase alcaline (PAL) 140.000
Transaminase glutamique pyruvique 180.000
(TGP)
5’ nucléotidase (5’ Nu) 200.000
γ glutamyl transpeptidase ( γGT) 1.000.000 +++

Taille enzyme diffusion sanguine et élimination

 LOCALISATION TISSULAIRE
Chaque tissu: équipement enzymatique adapté
Même enzyme dans différents tissus (profil enzymatique
et isoenzymes: spécificité meilleure)
Tableau II-Activité relative des enzymes dans différents tissus par rapport au sérum.

Sérum Globules foie coeur Muscle squelettique

normal rouges
TGO 1 Х 15 Х 7000 Х 8000 Х 5000

TGP 1 Х7 Х 3000 Х 400 Х 300

LDH1 1 Х 300 Х 1500 Х 1000 Х 700

CK 1 <1 < 10 Х 10 000 Х 50 000

LOCALISATION CELLULAIRE

Membranaire (PAL, γGT, 5‘ Nu)

Cytoplasmique (TGO, TGP, LDH, CK)

Mitochondriale (TGO, CK)

Lysosomiale (PAC)

Microsomale (γGT)
 LOCALISATION CELLULAIRE

Lésion débutante: ↑ perméabilité Mb

fuite enzymatique
Stade avancé: nécrose irréversible Mb, destruction cellulaire

Passage sanguin enzymes intracellulaires

Enzymes mitochondriales: gravité de la lésion

 LIBERATION, DIFFUSION
ET ELIMINATION ENZYMATIQUE
A- Libération
 Physiologique
Renouvellement cellulaire (50 millions/jour)
- Renouvellement des plaquettes et hématies
- Libération par l’endothélium vasculaire d’enzymes
- Le foie et la rate très vascularisés
Activité musculaire
- Muscle: grand volume activité importante, libération enzy
Sécrétion tissulaire
- Foie: nombreuses enzymes (coagulation, épuration lipoprotéines)
 LIBERATION, DIFFUSION
ET ELIMINATION ENZYMATIQUE
 Pathologique

Pompes ATP dépendantes: entrée K+ , rejet Ca++, Na+ et H2O

↓ ATP: Gonflement cellulaire, ↑[ Ca++] intracellulaire

Activation filaments contractiles et brèches membranaires

Fuite enzymatique Mb (souffrance cellulaire réversible)

Absence ATP: nécrose Mb, libération cellulaire (enzymes, ions)

 LIBERATION, DIFFUSION
ET ELIMINATION ENZYMATIQUE
B- Diffusion
Proximité cellulaire aux capillaires sanguins
Épaisseur Mb basale des capillaires (variable selon tissus)

Mb épaisse: passage lymphatique (muscle) qques jours

Mb semi imperméable macromolécules: passage partiel lymph

(cœur, pancréas, prostate) qques heures

Mb perméable: passage sanguin qques minutes (rate)

 LIBERATION, DIFFUSION
ET ELIMINATION ENZYMATIQUE
C- ELIMINATION
Captation enzymatique et dégradation par les macrophages du
SRE (foie, rein, intestin, …) puis élimination.

Enzymes de faible PM (amylase, lipase): élimination rénale.

Activité enzymatique (UI/L): quantité d’enzyme transformant

une micromole de substrat/minute/litre(température, pH, pression)

L’activité enzymatique dosée est la résultante des 3 étapes

 LIBERATION, DIFFUSION
ET ELIMINATION ENZYMATIQUE
La demi-vie des enzymes: temps nécessaire pour que l’activité
de l’enzyme diminue de moitié.
Dépend des 3 étapes (libération, diffusion et élimination)

Tableau III-Demi-vie sérique des enzymes.

Amylase lipase CK-MB CK TGO TGP PAL γGT PAC LDH LDH 5
1
<1j <1j <1j 1j <1j 2j 7j 4j 5j 5j < 1j
 Principes généraux des dosages
enzymatiques
Activité enzymatique en U/l (substrat produit)

Qté Produit formé Qté Substrat détruit

Méthodes colorimétriques
Substrat produit coloré (proportionnellement à l’activité enz)

Méthodes optiques (coenzyme nicotinique: 340 nm)

Pyruvate LDH lactate (transformation de NADH2 en NAD % activité de LDH)
Aspartate + α cétoglutarate ASAT OAA + glutamate

OAA + NADH2 MDH malate +NAD (réaction couplée)

 PRINCIPALES ENZYMES SERIQUES
A- Les phosphatases
Hydrolases (ester phosphorique acide phosphorique)
1- Phosphatase alcaline (PAL)
Divers tissus (os, intestin, foie, cerveau, placenta……)
Elimination biliaire, variation (âge, sexe)
Dosage: technique colorimétrique
3 isoenzymes (hépatique, osseuse, intestinale)
↑ cholestase, atteinte ostéoblastique, hyperthyroïdie
↓ déficits congénitaux, hypothyrïdie
 A- PHOSPHATASES

2- Phosphatase acide (PAC)

Prostate, GR, ostéoclaste, rein, rate, foie

Dosage colorimétrique
Pas de variation selon le sexe
↑ tumeur prostatique (PSA: diagnostic plus précoce)
↑ activité ostéoclastique (métastases osseuses)
 B- AMYLASE
Hydrolyse des liaisons α 1-4 glucosidique (amidon)
Dosage colorimétrique
Essentiellement salivaire et pancréatique, plusieurs tissus
↑↑pancréatite aigue (début 6h, max 20 à 30 h, normale 2 à 8 j)
↑pancréatite chronique et cancer du pancréas.
↑ Syndromes abdominaux aigus, parotidites…
↓ insuffisance pancréatique
Macroamylasémie (↑ sanguine isolée)
 C- TRANSAMINASES

Transfert groupement aminé d’un aa à un acide α cétonique

TGO ou ASAT: cœur, reins, muscle sq, foie (cyto, mitoch)

aspartate + α cétoglutarate glutamate + ac.Oxaloacétique
ac.Oxaloacétique + NADH2 malate + NAD+

TGP ou ALAT: foie, cœur, reins, muscle sq (cytoplasmique)

alanine + α cétoglutarate glutamate + ac. pyruvique
ac. Pyruvique + NADH2 lactate + NAD
 C- TRANSAMINASES

↑ IDM (surtout TGO: début 6h, pic 36 h et normale en 5 à 6 j),

↑ Atteinte musculaire (surtout TGO: traumatique, infectieuse)
↑ hépatite aigue: TGP > TGO (↑ avant ictère, max 15 j et
normale en 5 à 6 semaines après ictère)
↑ hépatite chronique, alcoolique, cirrhose (TGO>TGP)
N.B: - ↑ ↑ transaminases: mauvais pronostic au cours de l’IDM
- ↑ ↑ transaminases: pas de relation avec un mauvais
pronostic pour le foie (grande capacité de régénération)
 D- ALDOLASES

Enzymes de la glycolyse

Foie: fructose 1-phosphate phosphodihydroxyacétone + glycéraldéhyde

Autres: fructose 1-6 diphosphate phosphodihydroxyacétone + 3 P-glycéraldéhyde

Dosage: méthode optique (décroissance de NADH2)

3 isoenzymes: A (muscle, coeur),B (foie, rein, intestin), C (cerveau, c sg …)

↑ hépatites (Sd cytolyse), ↑ affections musculaires (myopathies,

myosites)
 E- GAMMA GLUTAMYL
TRANSPEPTIDASE (γGT)

Réactions de transfert et d’hydrolyse

γ glutamyl peptide + AA γ glutamylAA + peptide
Synthèse stimulée par l’alcool (RE et membranes Cell)
Liée aux structures cellulaires du tractus biliaire comme
la PAL mais liaison – solide: plus sensible.
Dosage: colorimétrique
↑ alcoolisme, cholestase, cytolyse, hépatite toxique
 F- CREATINE KINASE (CK)

Musculaire, myocardique et cérébrale (3 isoenzymes)

Créatine + ATP (énergie) Créatine-P + ADP

Activité labile: méthode optique (↑ DO 340 nm)

↑ précoce IDM (↑ 2 à 4 h, pic 24 h et normale en 2 à 3 j)

↑ myopathies, traumatisme (nécrose musculaire)

F- LACTATE DESHYDROGENASE (LDH)

Nombreux tissus (foie, cœur, muscle, GR…)

5 isoenzymes (LDH1: cardiaque rapide et LDH5: hépatique)
LDH5 LDH4 LDH3 LDH2 LDH1

Pyruvate + NADH2 lactate + NAD (↓ DO 340 nm)

↑ IDM (8 à 10 h, pic 48 à 72 h, normale en 2 à 3 semaines)
↑ hépatites et cirrhose
↑ anémies hémolytique et de Biermer
F- 5’ NUCLEOTIDASE (5’Nu)

Hydrolyse liaison ester en ribose 5’ P des nucléotides

Enzyme membranaire (foie, reins)

Dosage spectrophotométrique

spécificité hépatique comparée à PAL

↑ choléstase, tumeur hépatique, hépatite virale ou toxique

 ENZYMES DANS LES LESIONS
CARDIAQUES ET HEPATIQUES
A- Atteintes hépatiques
1- Hépatites
Hépatites aigues
• ↑ x15 à 150 N; précède l’ictère
• TGP > TGO
• Capacité importante de regénération hépatique
• Faible relation avec la gravité de l’atteinte
• ↑ modérée des enzymes membranaires (5’Nu, PAL, γ GT)
A- Atteintes hépatiques
Hépatites chroniques
• Hépatite persistante bon pc
 Transaminases x2 à 5 N , TGO/TGP ~ 1
 PAL normale, ↑ modérée γGT
• Hépatite agressive vers cirrhose
 Transaminases x10 N, TGO/TGP > 1
 PAL normale, ↑ franche γGT
• Hépatite toxique
 Transaminases très ↑, TGO/TGP > 1
 A- Atteintes hépatiques

2- cholestase

 ↑ enzymes membranaires avant l’ictère (PAL, 5’ Nu +++)

 ↑ 5’ Nu dans cholestase intrahépatique (x2 à 3 N)
 ↑ ↑ 5’ Nu surtout dans cholestase extrahépatique (x5 à 7 N)
3- Cirrhose
↑ modérée des transaminases, TGO/TGP > 1
 ↑ γGT: origine éthylique
 ↑ PAL et 5’ Nu: origine biliaire
A- Atteintes hépatiques

4- Ethylisme chronique
 γGT : sensible et précoce éthylisme chronique,
surveillance du sevrage (décroissance activité enzymatique)
 Alcool: inducteur et toxique
5- Métastases hépatiques
 ↑ enzymes membranaires (5’ Nu +++)
 ↑ précoce 5’ Nu
 B- Infarctus du myocarde

Diabète, HTA, âge avancé IDM indolore, ECG normal

Intérêt des enzymes: diagnostic et pronostic de l’IDM
1- Troubles biologiques
fuite ionique
• Dysfonctionnement pompes ioniques
Membranaires et dérèglement du fuite lactate ,adénosine

Métabolisme intracellulaire
• T1h:Libération des grosses molécules : enzymes, myoglobine,
protéines
• Nécrose cellulaire (irréversible): libération de tout le contenu
cellulaire.
B- Infarctus du myocarde

1- Troubles biologiques
 B- Infarctus du myocarde

2- Bilan enzymatique
Élévation précoce et peu durable de CK totale et de CK-MB:
↑ à partir de 3 h, maximum en 24 à 36 h, normale en 3 à 4 j
Élévation moins précoce et peu durable de ASAT:
↑ à partir de 6 h, maximum en 36 h, normale en 5 à 6 j
Élévation tardive et plus durable de LDH et αHBDH:
↑ à partir de 10 h, maximum en 48 à 72 h, normale en 15 j

Dater l’ischémie
Cinétique des marqueurs biologiques de l’IDM

LDH

Myoglobin
B- Infarctus du myocarde

CK-MB: 2 à 3% (valeurs physiologiques)

22% (Après IDM)

LDH1/LDH2: 0.45 à 0.74 (valeurs physiologiques)

> 0.8% (Après IDM)

CONCLUSION

Activité
enzymatique ↑

Confrontation
clinique

diagnostic Gravité
Diagnostic lésions Évolution
Evolution