TRAVAUX DIRIGES D’ENZYMOLOGIE ET CINETIQUE ENZYMATIQUE

Exercice 1

1- Qu’est-ce qu’une cinétique enzymatique ?

2- Que permet-elle de décrire et quel est son objet ?
3- Lorsqu’on effectue une cinétique enzymatique, que signifie « se placer en concentration
de substrats saturante, condition non limitante » ?
4- Que mesure-t-on pour déterminer la vitesse de la réaction enzymatique à un temps donné
?
5- Définissez la Vmax et Km
6- Dans une cinétique enzymatique classique monosubstrat :
Que signifie une vitesse initiale ? A quoi sert-elle ?

Exercice 2
Une enzyme catalyse la réaction : S -----> P. Les vitesses initiales ont été déterminées pour
chacune des concentrations initiales en substrat suivantes :

Q1: Considérant que la cinétique est michaelienne et

Q2: Si [S] = 2,5.10-5M, quelle est la vitesse initiale? Même question pour [S] = 5.10 -5M et [S]
= 0,02 M.
Q3: Si [S] = 1.10-2 M, quelle est la vitesse initiale si la quantité d'enzyme est doublée?
Q4: Si [S] = 0,04 M, quelle est la concentration en P après 3 min?

1
Exercice 3

Titrez et légendez le graphique suivant. Puis, donnez les calculs pour déterminer les 2
paramètres cinétiques

Exercice 4
Un biochimiste veut caractériser une amylase fongique. Le milieu réactionnel est composé de :
- 100 µl d’amidon 2 % (poids / volume) préparé dans le tampon acétate 20 mM pH 5,4 ;
- 100 µl de solution enzymatique contenant 15 µg de protéine.
Le milieu réactionnel est incubé à 37°C pendant 30 min. Le dosage de maltose libéré par
l’enzyme nous a donné 8,5 mg. Une étude cinétique plus approfondie a révélé au biochimiste
qu’il a travaillé en condition saturante de substrat. Déterminer :
a- La vitesse initiale de la réaction en Unité Internationale (UI).
b- L’activité spécifique en UI / mg de protéine.
c- La concentration d’enzyme libre dans le milieu réactionnel.
d- La vitesse initiale si on double la concentration d’enzyme du milieu réactionnel.
e- Quelle serait la vitesse observée en présence de substrat 25 mg / ml ?
On donne PM de maltose = 342 g/mol

Exercice 5
L’activité d’une enzyme michaélienne est une fonction hyperbolique de la concentration en
substrat du milieu réactionnel.
(a) Combien de fois [S] est-elle égale à KM quand :
- la vitesse de la réaction (v) est égale à 10% de Vmax ?
2
- la vitesse de la réaction (v) est égale à 90% de Vmax ?
(b) Déterminer le rapport [S]90% / [S]10% et en déduire le nombre de fois que varie [S] lorsque
v varie de 10 à 90% de Vmax.
(c) Que peut-on conclure, s’agissant du degré de réactivité d’une enzyme michaélienne aux
grandes variations de [S] du milieu physiologique ?

Exercice 6
Le glucose est dégradé dans l’organisme par la voie de la glycolyse. La première réaction de
cette voie est une phosphorylation du glucose qui peut être catalysée par deux enzymes
différentes : la glucokinase ou l’hexokinase. On se propose d’étudier les caractères cinétiques
de ces deux enzymes vis-à-vis de leur substrat commun, le glucose. La vitesse initiale de la
réaction a été mesurée pour des concentrations différentes en substrat à 20 °C et à pH 7. La
concentration en enzyme utilisée pour les deux séries d’expériences est la même. Les résultats
expérimentaux sont reproduits dans le tableau ci-dessous.

Vi avec la glucokinase Vi avec l’hexokinase

[Glucose] en mol/L
en µmol/L/min en µmol/L/min
5,0 x10-3 1,61 0,490
6,7 x 10-3 2,00 0,575
10,0 x 10-3 2,67 0,607
20,0 x 10-3 2,93 0,806
50,0 x 10-3 4,17 0,893

1- Déterminer les valeurs de Km et de Vmax pour ces deux enzymes.

2- Comparer les deux Km, et conclure.
3- Comparer les deux Vmax, et conclure.
4-Sachant que la glycémie normale est d’environ 5 mmol/L, indiquer si chacune de ces deux
enzymes agit dans les conditions d’obtention de la vitesse maximale.
5- Quelle serait l’influence d’une augmentation importante de la glycémie ?