Bioch Métab Examens Et Corrigés 2015 À 21

Examens &Corrigés Biochimie Métabolique (BCG) Pr. ELABBADI N.
Université Sultan Moulay Slimane

Faculté des Sciences et Techniques
Département des Sciences de la Vie
Beni-Mell
EXAMENS &CORRIGES
Biochimie Métabolique
« Biologie – Chimie - Géologie »
Année 2015 – 2021
Responsable : Pr N. ELABBADI
1
Sommaire
Dates examens Epreuves Corrigés
Juin 2015 3 27
Juin 2016 5 33
Juin 2017 8 41
Janvier2018 11 50
Janvier2019 13 54
Mai 2019 15 58
Janvier2020 17 63
Septembre 2020 19 66
Février 2021 21 68
Juin 2021 23 71
2
UNIVERSITE SULTAN MOULAY SLIMANE

Faculté des Sciences et Techniques Beni-Mellal
Examen de Biochimie Métabolique BCG [2 heures] Juin 2015 (Res. ELABBADI)
Question I (Répondre aux questions suivantes par vrai ou par faux)
1. Enzyme augmente la vitesse initiale de la réaction en stabilisant l’état de transition -
2. Enzyme réduit d’énergie libre de la transformation -
3. Enzyme réduit l’énergie d’activation -
4. Enzyme modifie la constante d’équilibre -
5. Enzyme est inchangé en fin de réaction -
6. Enzyme assure la sélectivité et spécificité de réaction -
7. Enzyme native possède une structure tertiaire -
8. Enzyme native possède une structure quaternaire -
9. Si le rapport NADH/NAD+ augmente le cycle de Krebs est inhibé -
10. Si le rapport NADH/NAD+ augmente la glycolyse est inhibé -
Question II. A. Tracer les courbes suivantes :
1/ produit en fonction du temps et 2/ produit en fonction de S 3/ 1/v en fonction de 1/S et
déterminer Vi pour différentes déterminer Km et Vmax.
concentrations de S
A. La vitesse initiale d’une catalyse enzymatique en fonction de la concentration en substrat en

absence ou en présence de 2 mM d’un inhibiteur I donne les valeurs expérimentales
suivantes :
Vitesse (µmoles/min) Vitesse (µmoles/min)
Substrat (µM)) sans inhibteur avec inhibiteur
3 10,4 4,1
5 14,5 6,4
10 22,5 11,3
30 33,8 22,6
90 40,5 33,8
a. Déterminer graphiquement la nature de l’inhibition.
b. Déterminer Km et Vmax et le Ki
c. Peut-on identifier graphiquement une activité allostérique ?
d. Comment fonctionnent les enzymes allostériques ? (3 lignes)
e. Quel est le rôle d’un inhibiteur dans les conditions physiologiques ? (3 lignes)
Question III. L’ATP est l’énergie chimique indispensable pour le bon fonctionnement des cellules.
1. Donner la structure de l’ATP.
2. Expliquer la production de l’ATP au niveau des cellules eucaryotes (des organismes

supérieurs) à partir des sucres et des lipides (4 lignes max.).
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…………………………………………………………………………………………..
…………………………………………………………………………………………..
…………………………………………………………………………………………..
3
…………………………………………………………………………………………..
3. Expliquer le rôle de l’oxygène dans la production de l’ATP (2 lignes).

…………………………………………………………………………………………..
…………………………………………………………………………………………..
4. Le transport intracellulaire (dans la cellule) de l’oxygène est assuré par : l’hémoglobine,
lipoprotéines, diffusion, myoglobine, ou l’albumine. Réponse :
5. Quel est le rôle des navettes dans la production de l’ATP (2 lignes).
…………………………………………………………………………………………..
…………………………………………………………………………………………..
Question IV. Des hépatocytes (cellules) préparés à partir de foie de rats préalablement privés de toute
alimentation au mois 48h (rats à jeun) sont incubés en présence des acides gras radioactifs, oléate ou
octanoate, libres ou sous forme acyl-carnitine en présence ou en absence de l’acide 2-
tétradécylglycidique (ATGD) selon les conditions décrites dans le tableau suivant :
Substrats ATGD (µmol/L) Formation [14CO2] nmol/g poids
frais/h
[1-14CO2] palmitate 0 105 ± 4
10 22 ± 2
[1-14CO2] ]octanoate 0 400 ± 20
10 420 ± 25
[1-14CO2] palmitoyl-Carnitine 0 100 ± 5
10 110 ± 7
On peut suivre l’oxydation des acides gras par la mesure de la production de CO2 radioactif [14CO2] à
partir d’acides gras marqués au 14C sur leur fonction acide carboxylique en présence et en absence de
l’acide 2-tétradécylglycidique (ATGD).
1) Dans le sang, le transport des acides gras « longue chaîne » est assuré par les micelles, lipoprotéines,
cellules sanguines, ou par l’eau. Réponse :
2) Dans les cellules, les acides gras « courte chaîne » traversent la membrane mitochondriale par
diffusion ou nécessitent un transport spécifique. Réponse :
3) Comment la mesure de 14CO2 peut refléter l’oxydation des acides gras intracellulaire ?
…………………………………………………………………………………………..
…………………………………………………………………………………………..
4) Commenter les résultats obtenus dans le tableau ci-dessus et proposer la cible (ou étape) où l’ATGD
exercerait son effet inhibiteur ?
Réponse : ……………………………………………………………………………………….
5) Que peut-on conclure quant au transport mitochondrial des acides gras : longue chaîne et courte
chaîne ? Réponse : …………………………………………………………………………………
Question V. (Répondre aux questions suivantes par vrai ou par faux)

1. La cétogenèse se déroule dans les mitochondries des cellules hépatiques (foie). -
Si la concentration de l’oxaloacétate intramitochondrial diminue :
2. le cycle de Krebs tournera mois vite par limitation du substrat de départ. -
3. l’acétyl-CoA sera dirigé vers la formation des corps cétoniques. -
Quel est le rôle physiologique des corps cétoniques (3 lignes).
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………………………………………………………………………………..………………………………
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4

Examen de Biochimie Métabolique
« BCG » Juin 2016 (Res. ELABBADI N.)
Durée 2h 30 min
Question I (Répondre aux questions suivantes par oui ou par non)

1. Enzyme augmente la vitesse initiale de la réaction enzymatique -
2. Enzyme augmente la variation d’énergie libre (∆G) de la transformation -
3. Enzyme baisse l’énergie d’activation -
4. L’augmentation de [S] initial augmente la Vi -
5. Enzyme modifie la constante d’équilibre (Kéq) du système -
7. Enzyme native possède une structure tertiaire et quaternaire -
8. L’enzyme allostérique fonctionnel (natif) possède une structure tertiaire et quaternaire. -
9. A l’équilibre, la vitesse de la catalyse enzymatique est nulle -
10. La vitesse initiale et la vitesse maximale sont déterminées dans la phase stationnaire -
11. Le froid (0°C et -18°C) conserve les aliments en augmentant l’énergie d’activation -
12. Vitesse initiale Vi = kcat [ES] = (Vmax x [S])/(Km + [S]) -
13. Un inhibiteur compétitif change la Vmax. -
14. Un inhibiteur non compétitif ne change pas le Km -
15. La température influence l’activité enzymatique -
16. L’activité enzymatique n’est pas sensible à la force ionique -
17. La synthèse des corps cétoniques se déroule dans le foie -
18. la biosynthèse des acides gras se fait dans le cytoplasme -
19. La β-oxydation se déroule dans la mitochondrie -
20. La biosynthèse du cholestérol est mitochondriale -
Question II
La vitesse initiale d’une catalyse enzymatique en fonction de la concentration en substrat en absence
ou en présence de 2 mM d’un inhibiteur I donne les valeurs expérimentales suivantes :

3 10,4 4,1
5 14,5 6,4
10 22,5 11,3
30 33,8 22,6
90 40,5 33,8
a. Déterminer graphiquement la nature de l’inhibition. (tracer la ou les courbes)

b. Déterminer Km et Vmax et le Ki.
…………………………………………………………………………………………………
c. Donner la signification de Vmax, Km et Ki.
…………………………………………………………………………………………………..
…………………………………………………………………………………………………..
d. Peut-on identifier graphiquement une activité allostérique ? Oui ou Non ………………….
Donner la forme de la courbe :
5
e. Donner la structure fonctionnelle des enzymes allostériques.
…………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………….
Question III
1. a/ Structure de l’ATP :………………………………………………………………….
b/ Rôle de l’ATP :………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………..
c/ Sites de synthèse d’ATP :…………………………………………………………….

…………………………………………………………………………………………..
2. a/ Donner une structure chimique des corps cétoniques : ………………………………
b/ Rôle des corps cétoniques : …………………………………………………………..

……………………………………………………………
c/ Site de synthèse des corps cétoniques :……………………………………………….

…………………………………………………………………………………………...
d/ Dans quelles conditions physiologiques les corps cétoniques sont elles synthétisés ?
…………………………………………………………………………………………..
…………………………………………………………………………………………..
6

Examen de Biochimie Métabolique TP
Durée 30 min
1/ Ecrire la réaction de transformation du succinate en fumarate en donnant les structures

chimiques.
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…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
2/ Quel est l’accepteur et le donneur d’électrons dans cette réaction ?

…………………………………………………………………………………………………..
…………………………………………………………………………………………………..
…………………………………………………………………………………………………...
3/ Donner le principe du dosage de l’activité succinate déshydrogénase.

…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
4/ Expliquer le rôle et l’ (es) avantage(s) du 2-6 dichlorophénol-indophénol dans le cadre du

TP.
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
5/ Peut on substituer 2-6 dichlorophénol-indophénol par le coenzyme naturel ?

…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
6/ Comment détermine-t-on la vitesse initiale et le temps t0 d’une réaction catalysée par une
enzyme ?
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
7/ Méthode du dosage des protéines par la méthode de Lowry.

a. expliquer comment faire une dilution de 1/1000è on utilisant des petits volumes
(entre 0,5 à 5 ml). (Dilution en cascade)
……………………………………………………………………………………….
....................................................................................................................................
………………………………………………………………………………………
b. rôle de la gamme d’étalonnage

……………………………………………………………………………………….
c/ Expliquer brièvement le dosage des protéines par la méthode de Lowry.
…………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………
7

Examen de Biochimie Métabolique (BCG) Juin 2017

Durée 1h 30 min (Res. ELABBADI N.)
Question n°1 : Enzymes

a) Structure fonctionnelle des enzymes : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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b) Rôle des enzymes : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . .

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c) Impact de la régulation enzymatique sur le métabolisme cellulaire

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d) Enzyme augmente la vitesse initiale de la réaction enzymatique oui non

e) Enzyme augmente l’énergie d’activation oui non
f) L’augmentation de [S] initiale augmente la Vi oui non
g) Enzyme modifie la constante d’équilibre (Kéq) du système oui non
h) Enzyme assure la sélectivité et spécificité de réaction oui non
i) Enzyme dénaturée possède une structure tertiaire et quaternaire oui non
j) L’enzyme allostérique fonctionnelle (natif) possède une structure secondaire. oui non
k) La vitesse maximale est déterminée dans la phase stationnaire oui non
l) Le froid conserve les aliments en baissant l’énergie d’activation oui non
Question n°2 : Métabolisme

a) Définition de l’anabolisme cellulaire : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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b) Définition du catabolisme cellulaire. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

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c) Rôle de la glycolyse et donner son bilan énergétique : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

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d) Régulation de la glycolyse : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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e) Rôle du cycle de Krebs : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8
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f) Expliquer comment l’absence d’oxygène arrête la production de l’ATP intracellulaire ?

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Question n°3 : Métabolisme des acides gras

a) Les formes absorbables des lipides au niveau des intestins : . . . . . . . . . . . . . . .
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b) Sous quelle forme les lipides sont transportés dans le sang ? . . . . . . . . . . . . . . . .

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c) Comment se fait le transport des acides gras intracellulaire vers la mitochondrie ? . . . .
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d) Le bilan énergétique de la β–oxydation par tour : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
e) Quel est le produit final de la β–oxydation ? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
f) Décrire la première étape de biosynthèse des acides gras : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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Question n°4 : Corps cétoniques
a) Donner une structure importante des corps cétoniques : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
b) Lieu de synthèse des corps cétoniques : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
c) Dans quelles conditions les corps cétoniques sont synthétisés ? . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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d) Rôle des corps cétoniques : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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Question n°5 : Cholestérol
a) Structure du cholestérol : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
b) Rôle du cholestérol : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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Examen TP Biochimie Métabolique Juin 2017

Durée 25 min (Res. ELABBADI N.)
1. Donner la structure du substrat et du produit de la réaction catalysée par la succinate

déshydrogénase :
2. Structure du 2-6 dichlorophénol-indophénol :
3. Rôle du 2-6 dichlorophénol-indophénol dans la réaction d’oxydation du succinate.

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4. Peut-on remplacer le 2 -6 dichlorophénol-indophénol par le coenzyme naturel ?

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5. Décrire brièvement le principe du dosage de l’activité urease.

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6. Expliquer pourquoi vous avez utilisé de l’eau au lieu d’une solution tamponnée pour
le dosage de l’activité urease dans la farine de soja.
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7. Décrire brièvement la méthode de dosage des protéines (méthode de Lowry) et

pourquoi vous avez fait le dosage des protéines dans le cadre du TP.
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« BCG » Janvier 201 8 (Res. ELABBADI N.)
Durée 2h
Question I (Répondre aux questions suivantes par vrai ou faux)

ATTENTION + 1 point pour une réponse juste et – 1 pour une réponse fausse.
1. Enzyme réduit la vitesse initiale de la réaction enzymatique -

2. Enzyme diminue la variation d’énergie libre (∆G) de la transformation -
3. Enzyme augmente l’énergie d’activation -
4. L’augmentation de [S] initial inhibe la Vi -
7. Enzyme native possède une structure tertiaire et quaternaire -
8. L’enzyme allostérique fonctionnel (natif) possède une structure tertiaire et quaternaire. -
10. La vitesse initiale et la vitesse maximale sont déterminées dans la phase stationnaire -
11. Le froid (0°C et -18°C) conserve les aliments en augmentant l’énergie d’activation -
13. Un inhibiteur compétitif ne change pas la Vmax. -
14. Un inhibiteur non compétitif change le Km -
15. La température influence l’activité enzymatique -
16. L’activité enzymatique n’est pas sensible à la force ionique -
17. La synthèse des corps cétoniques se déroule dans le foie -
18. La biosynthèse des acides gras se fait dans le cytoplasme -
19. La β-oxydation se déroule dans le cytoplasme -
20. la photosynthèse permet la biosynthèse des lipides -
Question II. Catabolisme des lipides chez les eucaryotes supérieurs.

Les mots clés, apport alimentaire, digestion, transport sanguin, transport cellulaire,
dégradation et production d’énergie intracellulaire, doivent vous aider dans la rédaction de
votre réponse. (30 lignes max.)
Question III
Un expérimentateur a oublié de noter les tubes correspondant aux expériences contenant enzyme et
substrat et ceux contenant enzyme, substrat et un ligand. Néanmoins, les résultats de son expérience
sont représentés dans le tableau suivant :
11
Substrat (µM)) Vitesse (µmoles/min) Vitesse (µmoles/min)

Expérience A Expérience B
3 4,1 10,4
5 6,4 14,5
10 11,3 22,5
30 22,6 33,8
90 33,8 40,5
f. Tracer les graphes des deux expériences.
g. Le ligand est présent dans l’expérience A ou B
…………………………………………………………………………………………………
h. Déterminer graphiquement l’effet du ligand sur l’activité enzymatique.

…………………………………………………………………………………………………
i. Déterminer Km =………………… ; Vmax =………………… ; Ki = …………………
j. Donner la signification du Vmax, Km et du Ki.

…………………………………………………………………………………………………..
…………………………………………………………………………………………………..
…………………………………………………………………………………………………..
k. Quelle est la structure fonctionnelle des enzymes.
…………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………….
Question IV relative aux travaux pratiques

1/ Ecrire la réaction de transformation de l’urée en donnant les structures chimiques.
…………………………………………………………………………………………………..
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
2/ Expliquer pourquoi le pH augmente lors du dosage de l’activité uréase dans la farine de

soja ?
…………………………………………………………………………………………………..
…………………………………………………………………………………………………..

…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...

TP.
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
5/ Peut on substituer 2-6 dichlorophénol-indophénol par le coenzyme naturel ?
12

« BCG » Janvier 201 9 (Res. ELABBADI N.)
Durée 2 h

1. Enzyme augmente la vitesse initiale de la réaction en baissant l’énergie d’activation -
2. Enzyme augmente la variation d’énergie libre (∆G) -
4. Enzyme assure la sélectivité et la spécificité de réaction -
8. Le froid (0°C et -18°C) conserve les aliments en réduisant l’énergie d’activation -
10. Un inhibiteur compétitif change la Vmax. -
11. Un inhibiteur non compétitif change le Km -
12. Le pH influence l’activité enzymatique par changement de charge du site actif -
13. L’activité enzymatique n’est pas sensible à la température -
14. La néoglucogenèse est à la fois mitochondriale et cytosolique -
15. La β-oxydation se déroule dans la mitochondrie -
Question II. Soit la réaction A ↔ B, catalysée par une enzyme E avec Kéq = 0,475 à 25°C et pH 7.
a/ Donner l’expression et la valeur de ∆G°’
……………………………………………………………………………………………………………….
b/ Déterminer la valeur ∆G’ si [A]i = 2 x 10-5M et [B]i= 3 x 10-2M
……………………………………………………………………………………………………………..
c/ Est-ce que la réaction est irréversible ? Répondre par oui ou non : ………………………………..
d/ Est-ce que la réaction est catalysée dans les deux sens par la même enzyme E. …………………..
e/ Donner un exemple de réaction irréversible.
…………………………………………………………………………………………………………….
f/ Le couplage de réactions permet de surmonter le problème énergétique. Ainsi une réaction défavorable
peut se faire s’elle est couplée à une autre réaction très favorable.
1. Donner un exemple de couplage chimio-osmotique
……………………………………………………………………………………………………….
2. Donner un exemple de couplage osmo-chimique
…………………………………………………………………………………………………..........
3. Donner un exemple de couplage osmo-osmotique
………………………………………………………………………………………………………..
4. Donner un exemple de couplage chimique (chimio-chimique)
………………………………………………………………………………………………….
13
Question III. Donner la structure chimique et le rôle de chaque molécule

Structure chimique rôle
ATP
NADH
Acétoacétate
Pyruvate
Glucose
Acétyl-CoA
TAG
Cholestérol
14

« B. C. G, Mai 2019 » (Res. ELABBADI N.)
Durée 1h 30 min
1. Enzyme augmente la vitesse initiale de la réaction en stabilisant l’état de transition -
2. Enzyme baisse la variation d’énergie libre de la transformation -
4. Enzyme modifie la constante d’équilibre du système -
9. Enzyme native est sensible à la température -
10. Enzyme native est insensible au pH du milieu -
Question II
1. Tracer les courbes suivantes Vi en fonction de [S] pour une enzyme Michaélienne
(classique) et allostérique (exemple l’hémoglobine et la myoglobine en fonction de la pression
partielle d’O2) et montrer la différence entre les deux fonctionnements enzymatique.
Michaélienne Allostérique
2. Rôle physiologique du fonctionnement allostérique dans la régulation des voies

métaboliques et dans la diffusion de l’oxygène dans le corps humain.
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
3. Expliquer le rôle physiologique de l’oxygène dans la production de l’ATP.
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
4. Structure de l’ATP.
15
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
Question III. Expérience [transport des acides gras dans la mitochondrie]
Des hépatocytes (cellules) préparés à partir de foie de rats préalablement privés de toute
alimentation au mois 48h sont incubés en présence des acides gras radioactifs, oléate ou
octanoate, libres ou sous forme acyl-carnitine en présence ou en absence d’un inhibiteur
l’acide 2-tétradécylglycidique (ATGD) selon les conditions décrites dans le tableau suivant :
Substrats ATGD (µmol/L) Formation [14CO2] nmol/g poids frais/h
[1-14CO2] palmitate 0 105 ± 4
10 22 ± 2
[1-14CO2] ]octanoate 0 383 ± 20
10 443 ± 28
[1-14CO2] palmitoyl-carnitine 0 101 ± 6
10 109 ± 10
On peut suivre l’oxydation des acides gras par la mesure de la production de CO2 radioactif
[14CO2] à partir d’acides gras marqués au 14C sur leur fonction acide carboxylique
1. Comment la mesure de 14CO2 peut refléter l’oxydation des acides gras intracellulaire ?.
2. Proposer la cible (ou étape) où l’ATGD exercerait son effet inhibiteur ?

…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
3. Que peut-on conclure quant au transport mitochondrial des acides gras: longue chaîne et
courte chaîne ?
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
Questions IV relatives au TP
1/ Donner le principe du dosage de l’activité succinate déshydrogénase :

…………………………………………………………………………………………………...
2/ Peut on substituer 2-6 dichlorophénol-indophénol par le coenzyme naturel ?: ……………...
3/ Donner la structure du substrat et du produit de la réaction catalysée par la succinate

déshydrogénase.
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
4/ Donner le principe du dosage de l’activité urease :

…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………..
5/ Expliquer pourquoi vous avez utilisé de l’eau au lieu d’une solution tamponnée pour le
dosage de l’activité urease dans la farine de soja.
…………………………………………………………………………………………………..
…………………………………………………………………………………………………..
16

« BCG » Janvier 2020 (Res. ELABBADI N.)
Durée 1h 30 min
1. L’énergie d’activation influence l’énergie libre (∆G) d’une transformation -
2. L’enzyme assure la spécificité de réaction -
3. L’énergie d’activation permet aux structures complexes d’exister -
4. l’énergie d’activation modifie la constante d’équilibre (Kéq) du système -
5. Enzyme allostérique native possède une structure tertiaire et quaternaire -
6. A l’équilibre, la vitesse de la catalyse enzymatique est maximale -
7. La variation du pH inhibe l’activité enzymatique -
8. L’activité enzymatique est sensible à la température -
9. La glycolyse se déroule dans le cytosol cellulaire -
10. La synthèse des corps cétoniques se fait dans la mitochondrie -
Question II. Photosynthèse

1/ Dans quel organe ou structure se fait la photosynthèse ?
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
2/ Le rôle majeur de la photosynthèse
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
3/ Quelle est la structure des enzymes chez les plantes ?
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………...
4/ Est-ce que le fonctionnement enzymatique chez les plantes est le même que chez les
animaux ? Justifier votre réponse……………………………………………..............................
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
17
Question III. Donner la structure chimique, lieu de synthèse et le rôle de chaque molécule.
Structure chimique Lieu de synthèse rôle
ATP
NADH
Acétyl-CoA
TAG
Cholestérol
Question IV (TP)
1/ Donner le principe du dosage de l’activité succinate déshydrogénase
………………………………………………………………………………………………......
…………………………………………………………………………………………………..
2/ Peut on substituer 2-6 dichlorophénol-indophénol par le coenzyme naturel ? Oui ou Non
déshydrogénase.
…………………………………………………………………………………………………...
4/ Décrire brièvement le principe du dosage de l’activité urease. ……………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
dosage de l’activité urease dans la farine de soja. ……………………………………………
…………………………………………………………………………………………………...
18

« BCG » Septembre 2020 (Res. ELABBADI N.)
elabbadinoureddine@yahoo.fr
Durée 1h
Enzymologie
1. Enzyme baisse la variation d’énergie libre (∆G) de la transformation -

10. La glycolyse se déroule dans la mitochondrie -
11/ L’enzyme catalyse une réaction biochimique dans les deux sens -
Question II. Le couplage de réactions biochimiques permet de surmonter le problème

énergétique. Ainsi une réaction défavorable peut se faire s’elle est couplée à une
autre réaction très favorable.
a) Il faut que le ∆G global des deux réactions soit supérieur à 0 (∆G >0) -
b) Il faut la présence d’un catalyseur spécifique (Enzyme) -
c) Il faut que le produit de la transformation soit indispensable pour la cellule -
Question III. Régulation du métabolisme cellulaire. Dans des conditions

physiologiques particulières (absence de glucose), les acides gras sont rapidement
oxydés via la β-oxydation avec formation de l’acétyl-CoA et le NADH,H+
mitochondrial. Ce dernier favorisera la chute de l’oxaloacétate mitochondrial.
19
a) La chute de l’oxaloacétate mitochondrial est due à sa transformation en malate -

b) Le cycle de Krebs tournera mois vite par limitation de l’oxaloacétate -
c) Le malate quittera la mitochondrie pour favoriser la formation du glucose -
d) L’acétyl-CoA sera dirigé vers la formation des corps cétoniques -
e) A jeun, le foie est l’organe qui fournit le glucose et corps cétoniques -
Question IV. Régulation du taux de cholestérol se fait essentiellement au niveau de :

a) Le cholestérol libre dans la cellule inhibe la production de récepteurs membranaires
des lipoprotéines (LDLR) -
b) Le cholestérol libre inhibe l’activité HMG-CoA réductase -
c) Le cholestérol libre stimule son estérification en stéride -.
Question V. Photosynthèse
a) Permet la synthèse de la matière organique (biomasse) -
b) Permet la régénération de l’oxygène atmosphérique -
c) Permet la conversion de l’énergie lumineuse en énergie chimique -
d) L’activité humaine augmente le CO2 atmosphérique -
e) L’augmentation de forêts et plantes baisse le CO2 atmosphérique -
f) La couche d’ozone est perturbée par l’augmentation de CO2 atmosphérique -
20

« BCG » Février 2021 (Res. ELABBADI N. et BOUDA S.)
Durée 1h 30 min
10. l’énergie libre (∆G) d’une transformation influence l’énergie d’activation -

11. L’enzyme augmente la vitesse de réaction -
12. L’énergie d’activation permet aux structures complexes d’exister -
13. l’énergie d’activation ne modifie pas la constante d’équilibre (Kéq) -
14. Enzyme allostérique native possède une structure tertiaire et quaternaire -
15. A l’équilibre, la vitesse de la catalyse enzymatique est minimale -
16. La variation du pH peut inhiber l’activité enzymatique -
17. L’activité enzymatique est insensible à la température -
18. La glycolyse se déroule dans la mitochondrie cellulaire -
10. La synthèse des corps cétoniques se fait dans la mitochondrie -
Question II. Régulation des voies métaboliques

1/ Donner la différence structurale et fonctionnelle entre Enzyme allostérique (quaternaire) et
Enzyme Michaeliènne (tertiaire).
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
2/Quels sont les sites (étapes) majeurs de régulation de la glycolyse ?
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
3/ Donner trois molécules (ligands) régulatrices de la glycolyse.
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
4/ Citer les points de Régulation du taux de cholestérol

a)…………………………………………………………………………………………
b)…………………………………………………………………………………………
c)…………………………………………………………………………………………
d)……………………………………………………………………………………….
5/ Quel est Le rôle majeur de la photosynthèse ?
21
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………………...
Structure chimique Lieu de synthèse Rôle
-
ATP -
- -
- -
NADH
Acétyl-CoA
TAG
Acétoacétate
(Corps cétoniques)
Ethanol
(Fermentation)
Cholestérol
22

Durée 1h 30 min
1/ Si Keq = 1, T = 37°C, R = 8,31 J.mol-1.K-1, alors ΔG0’ = 0 kcal.mol-1. -

2/ La concentration en enzyme double ([S0] reste saturant) alors Vmax double. -
3/ La variation de la concentration des métabolites permet de contrôler le flux d’une voie -
métabolique.
4/ Les conditions d'étude des cinétiques enzymatiques in vitro ne reflètent pas la réalité -
cellulaire.
5/ Les conditions d'étude des cinétiques enzymatiques in vitro reflètent la réalité -
cellulaire.
6/ ADP et ATP franchissent la membrane interne de la mitochondrie par transport actif. -
7/ ADP et ATP franchissent la membrane interne de la mitochondrie par transport passif. -
8/ La pyruvate kinase catalyse une réaction qui se déroule au voisinage de l’équilibre. -
9/ L’énergie d’activation modifie la constante d’équilibre (Kéq) du système -
10/ A l’équilibre, la vitesse de la catalyse enzymatique est maximale -
11/ La synthèse des corps cétoniques se fait dans la mitochondrie -
Question II
Soit la réaction : A + B <====> C + 2D catalysée par une enzyme. La variation d'énergie

libre de Gibbs standard de cette réaction ΔG0' = - 4,7 kJ/mol. R = 8,31 J.K-1.mol-1, T = 37°C
a/ Calculez la valeur de la constante d’équilibre Kéq.
b/ In vivo, les concentrations physiologiques des composés sont : [A]φ = 0,01 mM, [B]φ =
360 pM, [C]φ = 3 10-5 M, [D]φ = 2,5 µM.
Quelle est la valeur de la constante physiologique Kφ et ΔG’φ ?
Question III. Donner le lieu de synthèse (anabolisme) ou de dégradation (catabolisme) et le

rôle physiologique des composés et voies métaboliques suivants :
Lieu du métabolisme Rôle cellulaire/physiologique
Glycolyse
Cycle de Krebs
23
Phosphorylation
oxydative
Corps cétoniques
β-oxydation
Photosynthèse
ATP
NADPH
24
Acétyl-CoA
TAG
Cholestérol
25
Biochimie Métabolique
BCG
Corrigés
26
Corrigés Juin 2015

Examen de Biochimie Métabolique BCG [2 heures]
Question I (Répondre aux questions suivantes par vrai ou par faux)
1. Enzyme augmente la vitesse initiale de la réaction en stabilisant l’état de transition. vrai

2. Enzyme réduit d’énergie libre de la transformation. faux
3. Enzyme réduit l’énergie d’activation. vrai
4. Enzyme modifie la constante d’équilibre faux
5. Enzyme est inchangé en fin de réaction. vrai
6. Enzyme assure la sélectivité et spécificité de réaction. vrai
7. Enzyme native possède une structure tertiaire. vrai
8. Enzyme native possède une structure quaternaire. vrai
9. Si le rapport NADH/NAD+ augmente le cycle de Krebs est inhibé vrai
10. Si le rapport NADH/NAD+ augmente la glycolyse est inhibé vrai
Question II. A. Tracer les courbes suivantes :

1/ produit en fonction du temps et déterminer Vi pour différentes concentrations de S
Vi V4 V3 V2 V1
[ES4] pour [S4]
[ES3] pour [S3]
[ES2] pour [S2]
[ES1] pour [S1]
temps
t0 de la réaction
2/ produit en fonction de S
27
3/ 1/v en fonction de 1/S et déterminer Km et Vmax.

1/V
a tg a = Km/Vmax
1/Vmax
-1/Km
1/S
B. La vitesse initiale d’une catalyse enzymatique en fonction de la concentration en substrat en

absence ou en présence de 2 mM d’un inhibiteur I donne les valeurs expérimentales suivantes :
3 10,4 4,1
5 14,5 6,4
10 22,5 11,3
30 33,8 22,6
90 40,5 33,8
a. Déterminer graphiquement la nature de l’inhibition.
1/v (μmoles-1 min)
Avec inhibiteur
Sans inhibiteur
1/[S] (μM-1)
28
b. Déterminer Km et Vmax et le Ki
• Km = 9.09 μM
• Vmax = 40 μmoles/min
• Ki
Km’ = 28.571 μM et comme Km’ = Km (1 + [I]/Ki)
Donc Ki = [I]/[(Km’/Km – 1] = [I]/ [(28.571/9.09) -1]
Ki = 2 mM/2.143 = 0.933 mM
c. Peut-on identifier graphiquement une activité allostérique ?
OUI, une activité allostérique montre une courbe de type sigmoïdale (courbe en S) reflétant la
coopérativité entre les sous unités.
d. Comment fonctionnent les enzymes allostériques ? (3 lignes)

Une enzyme allostérique est constituée de petit nombre de polypeptides (protomères)
identiques ou différents. La transition allostérique (activation) se propage de protomère
en protomère voisin d’où coopérativité entre les protomères d’une molécule d’enzyme.
Ainsi, à faible concentration en substrat l’activité catalytique est faible mais une fois la
concentration en substrat augmente, l’activité catalytique monte en flèche reflétant la
transition allostérique
e. Quel est le rôle d’un inhibiteur dans les conditions physiologiques ? (3 lignes)
Un inhibiteur permet de contrôler la vitesse de catalyse d’une activité enzymatique et de réguler
ainsi la concentration de substrat et de produit de la réaction dans les conditions physiologique. Si
cette activité enzymatique fait partie une voie métabolique, alors un inhibiteur peut réguler toute
la voie métabolique (ex. régulation de la glycolyse par ATP, AMP).
Question III. L’ATP est l’énergie chimique indispensable pour le bon fonctionnement des cellules.
1. Donner la structure de l’ATP.
29
2. Expliquer la production de l’ATP au niveau des cellules eucaryotes (des organismes

supérieurs) à partir des sucres et des lipides (4 lignes max.).
Les sucres, notamment le glucose est oxydé en pyruvate par la voie glycolyse cytosolique avec
production d’ATP et NADH2. Le pyruvate comme les acides gras (via β-oxydation) sont
transformés en acétyl-CoA dans la mitochondrie pour intégrer le cycle de Krebs de produire
de l’énergie GTP et les coenzymes sous la forme réduites (NADH, FADH2). La ré-oxydation
des NADH, FADH2 au niveau de la chaine respiratoire permet la production d’un maximum
d’ATP intracellulaire.
3. Expliquer le rôle de l’oxygène dans la production de l’ATP (2 lignes).
L’oxygène est l’accepteur terminal des électrons de la chaine respiratoire mitochondriale et sa

présence permet l’expulsion des protons vers l’extérieur de la mitochondrie par les complexes
I, II II et IV. Le gradient de concentration de H+ (force protomotrice) permet la synthèse de
l’ATP via l’ATP-synthase.
4. Le transport intracellulaire (dans la cellule) de l’oxygène est assuré par : l’hémoglobine,
lipoprotéines, diffusion, myoglobine, ou l’albumine.
Réponse : Hémoglobine
5. Quel est le rôle des navettes dans la production de l’ATP (2 lignes).

Les navettes, navette malade-aspartate et glycérol 3-phosphate, permettent la ré-
oxydation des coenzymes cytosoliques et le transfert de leurs équivalents
électroniques vers la mitochondrie.
Question IV. Des hépatocytes (cellules) préparés à partir de foie de rats préalablement privés de toute
alimentation au mois 48h (rats à jeun) sont incubés en présence des acides gras radioactifs, oléate ou
octanoate, libres ou sous forme acyl-carnitine en présence ou en absence de l’acide 2-
tétradécylglycidique (ATGD) selon les conditions décrites dans le tableau suivant :
Substrats ATGD (µmol/L) Formation [14CO2] nmol/g poids
frais/h
[1-14CO2] palmitate 0 105 ± 4
10 22 ± 2
[1-14CO2] ]octanoate 0 400 ± 20
10 420 ± 25
[1-14CO2] palmitoyl-Carnitine 0 100 ± 5
10 110 ± 7
On peut suivre l’oxydation des acides gras par la mesure de la production de CO2 radioactif [14CO2] à
partir d’acides gras marqués au 14C sur leur fonction acide carboxylique en présence et en absence de
l’acide 2-tétradécylglycidique (ATGD).
1) Dans le sang, le transport des acides gras « longue chaîne » est assuré par les micelles, lipoprotéines,
cellules sanguines, ou par l’eau.
Réponse : lipoprotéines (LDL, HDL, VLDL)
30
2) Dans les cellules, les acides gras « courte chaîne » traversent la membrane mitochondriale par
diffusion ou nécessitent un transport spécifique.
Réponse : diffusion
3) Comment la mesure de 14CO2 peut refléter l’oxydation des acides gras intracellulaire ?
14
Les acides gras, marqués au C sur leur fonction acide carboxylique, une fois dans la
mitochondrie ils seront dégradés par la β-oxydation en [14C]acétyl-CoA radioactifs. Ces
derniers vont rejoindre le cycle de Krebs où ils seront ‘décarboxylés’ en CO2 radioactif avec
formation de GTP, NADH et FADH2. Ainsi la mesure de 14CO2 peut refléter l’oxydation des
acides gras intracellulaire
4) Commenter les résultats obtenus dans le tableau ci-dessus et proposer la cible (ou étape) où l’ATGD
exercerait son effet inhibiteur ?
L’oxydation du palmitate est réduite par la présence de l’inhibiteur ATGD alors que
l’expérience avec la palmitoyl-Carnitine ne montre aucune réduction de décarboxylation. En
revanche l’oxydation de l’octanoate (acide gras courte chaine) n’est pas inhibée par la
présence de l’ATGD. Ce résultat montre clairement que l’inhibiteur ATGD n’agit pas au
niveau du translocase permettant le passage de la forme acyl-Carnitine vers la matrice
mitochondriale. En revanche, il agit au niveau de la palmitol-carnitine transférase qui
catalyse la formation de l’acyl-carnitine à partir de l’acyl-CoA. La palmitol-carnitine
transférase située sur la face externe de la membrane interne de la mitochondrie. Le fait que
l’ATGD n’inhibe pas l’oxydation de l’octanoide (AG courte chaine) renforce la cible
palmitol-carnitine transférase, car les acides gras courte chaine passent directement dans la
matrice mitochondriale où ils seront activés en forme acyl-CoA, sans passé par le système
Carnitine.
5) Que peut-on conclure quant au transport mitochondrial des acides gras : longue chaîne et courte
chaîne ?
• Les acides gras à longue chaine (> à 10 carbones) doivent passer par la forme acyl-carnitine
pour traverser la membrane mitochondriale.
• Les acides gras à chaîne courte (2 à 10 carbones), traversent la membrane interne sous forme
d'acides gras libres puis activées en acyl-CoA directement dans la matrice.
Question V. (Répondre aux questions suivantes par vrai ou par faux)
1. La cétogenèse se déroule dans les mitochondries des cellules hépatiques (foie). vrai
Si la concentration de l’oxaloacétate intramitochondrial diminue :
2. Le cycle de Krebs tournera mois vite par limitation du substrat de départ. vrai
31
3. L’acétyl-CoA sera dirigé vers la formation des corps cétoniques. vrai

4. Quel est le rôle physiologique des corps cétoniques (3 lignes).
Corps cétoniques sont une forme transportable hydrosoluble d’unité acétyl qui constitue une
source d’énergie en absence de glucose. Le myocarde et le cortex rénal utilisent l’acétoacétate
comme source d’énergie
32
Corrigés Juin 2016
Examen de Biochimie Métabolique Durée 2h 30 min

1. Enzyme augmente la vitesse initiale de la réaction enzymatique oui
2. Enzyme augmente la variation d’énergie libre (∆G) de la transformation non
3. Enzyme baisse l’énergie d’activation oui
4. L’augmentation de [S] initial augmente la Vi oui
5. Enzyme modifie la constante d’équilibre (Kéq) du système non
6. Enzyme assure la sélectivité et spécificité de réaction oui
7. Enzyme native possède une structure tertiaire et quaternaire oui
8. L’enzyme allostérique fonctionnel (natif) possède une structure tertiaire et quaternaire. oui
9. A l’équilibre, la vitesse de la catalyse enzymatique est nulle. oui
10. La vitesse initiale et la vitesse maximale sont déterminées dans la phase stationnaire oui
11. Le froid (0°C et -18°C) conserve les aliments en augmentant l’énergie d’activation non
12. Vitesse initiale Vi = kcat [ES] = (Vmax x [S])/(Km + [S]) oui
13. Un inhibiteur compétitif change la Vmax. non
14. Un inhibiteur non compétitif ne change pas le Km non
15. La température influence l’activité enzymatique oui
16. L’activité enzymatique n’est pas sensible à la force ionique non
17. La synthèse des corps cétoniques se déroule dans le foie oui
18. la biosynthèse des acides gras se fait dans le cytoplasme oui
19. La β-oxydation se déroule dans la mitochondrie oui
20. La biosynthèse du cholestérol est mitochondriale non
Question II
La vitesse initiale d’une catalyse enzymatique en fonction de la concentration en substrat en absence
ou en présence de 2 mM d’un inhibiteur I donne les valeurs expérimentales suivantes :

3 10,4 4,1
5 14,5 6,4
10 22,5 11,3
30 33,8 22,6
90 40,5 33,8
a. Déterminer graphiquement la nature de l’inhibition. (tracer la ou les courbes)
D’après le graphe ci-dessous, l’inhibiteur est de type compétitif car le Km change alors que la Vmax
ne change pas
33
1/v (μmoles-1 min)
Avec inhibiteur
Sans inhibiteur
1/[S] (μM-1)
b. Déterminer Km et Vmax et le Ki.

• Km = 9.09 μM
• Ki
Donc Ki = [I]/[(Km’/Km) – 1] = 2 mM/ [(28.571/9.09) -1]
Ki = 2 mM/2.143 = 0.933 mM
c. Donner la signification de Vmax, Km et Ki.

• Vmax signifie la saturation de l’ensemble des sites actifs de l’enzyme
• Km c’est la constante d’affinité de l’enzyme pour son substrat (force de
reconnaissance)
• Ki c’est la constante d’affinité de l’enzyme pour son inhibiteur
d. Peut-on identifier graphiquement une activité allostérique ? Oui
Donner la forme de la courbe :
Forme sigmoïdale de la courbe reflète une activité allostérique avec phénomène de
coopérativité
34
Vmax
Vmax/2
[S] 10 2 M
e. Donner la structure fonctionnelle des enzymes allostériques.
Les enzymes allostériques ont une structure quaternaire oligomérique (dimère, tétramère).
Elles sont donc constituées de petit nombre de polypeptides (protomères) identiques ou
différents. Chaque polypeptide a une structure tertiaire. L'association de ces sous unités,
essentiellement par des liaisons non covalentes, permet la formation d’une structure
quaternaire de l'enzyme avec plusieurs sites actifs et allostériques (régulateur). En général, il y
a un site actif et un site allostérique par protomère. La fixation d’un ligand sur l’un des
protomères induit sa transition allostérique qui le fait basculer vers l’état active au inactive
selon la nature du ligand (substrat, inhibiteur, activateur). Le phénomène de transition
allostérique se propage de protomère en protomère voisin d’où coopérativité entre les
protomères d’une molécule d’enzyme.
Question III
1. a/ Structure de l’ATP :
35
b/ Rôle de l’ATP :
L’ATP molécule centrale dans les échanges énergétiques est synthétisée lors du catabolisme
cellulaire, essentiellement via glycolyse, β-oxydation, cycle de Krebs, chaine respiratoire. Le
transfert d’énergie de l’ATP (réaction exergonique, ∆G < 0) vers d’autres réactions non
favorables (endergonique, ∆G > 0) mais indisponsable pour l’organisme, se fait par couplage
biochimique. Ainsi les réactions du métabolisme qui nécessitent un apport d'énergie, telles
que les réactions de l’anabolisme (biosynthèse), contraction musculaire, transport intra- et
intercellulaire, influx nerveux, qui ne se sont pas favorable (∆G > 0) peuvent se faire bien plus
rapidement dans les cellules. l'ATP est précurseur de cofacteurs enzymatiques importants,
comme le NAD+ ou le coenzyme A. L’action de L’ATP se manifeste par transfert de groupes
phosphate associée de manière non covalente aux enzymes de la famille des kinases (étapes
d’activtions). Il est également impliqué dans les voies de signalisation cellulaire
(transduction), via le processus de phosphorylation/déphosphorylation des protéines et
d'enzymes ciblent. L’action hormonale telles que le glucagon et l'adrénaline, régulent le
métabolisme glucidique et lipidique (glycogène et lipides) via messager secondaire
intracellulaire AMP cyclique. Ce dernier est formé à partir de l’ATP sous contrôle de
l'adénylate cyclase. L’orientation du métabolisme cellulaire, selon les conditions alimentaires,
est très sensible à la charge énergétique déterminée par le rapport ATP/AMP, ce qui à la
cellule d’équilibrer entre le catabolisme et l’anabolisme notamment celui des glucidiques et
des lipidiques.
l'ATP est utilisé par les ARN polymérases dans le processus de transcription de l'ADN en
ARN ribosomique et en ARN messager, mais également dans les étapes d’activation (ARNt,
etc. ).
De manière générale, l'ATP est un intermédiaire énergétique indispensable pour les tous les
travaux et les processus biochimique cellulaire comme le montre le schéma suivant :
36
c/ Sites de synthèse d’ATP :

Site principale de synthèse de l’ATP est au niveau de l’ATP-synthase mitochondrial dans les
cellules eucaryotique. Cependan,t une partie de l’ATP est formée directement lors du
catabolisme intracellulaire, glycolyse et cycle de krebs.
2. a/ Donner une structure chimique des corps cétoniques : ………………………………
Acétoacétate -OOC-CH2-CO-CH3
b/ Rôle des corps cétoniques : …………………………………………………………..

Corps cétoniques sont une forme transportable hydrosoluble d’unités acétyle, le myocarde et
le cortex rénal utilisent l’acétoacétate comme source d’énergie
c/ Site de synthèse des corps cétoniques

Mitochondrie des cellules hépatiques essentiellement
d/ Dans quelles conditions physiologiques les corps cétoniques sont elles synthétisés ?
Au cours du jeûne ou diabète, l’oxaloacétate est utilisé par la gluconéogenèse pour former du
glucose et il est donc peu disponible pour sa condensation avec l’acétyl CoA (réduction du
cycle de Krebs). Dans ces conditions, l’acétyl CoA en provenance des lipides est dirigé vers la
formation, dans les mitochondries hépatiques, des corps cétoniques : acétoacétate, D-3-
hydroxybutyrate et acétone.
37
Examen de Biochimie Métabolique TP

Durée 30 min
1/ Ecrire la réaction de transformation du succinate en fumarate en donnant les structures

chimiques.
COOH-CH2-CH2-COOH HOOC HC HC COOH + 2H+ + 2e

Succinate Fumarate
2/ Quel est l’accepteur et le donneur d’électrons dans cette réaction ?

• Première demi-pile succinate/fumarate : le donneur est le substrat succinate
• Deuxième demi-pile 2-6 dichlorophénol-indophénol oxydé/2-6 dichlorophénol-
indophénol réduit : l’accepteur est la forme oxydée colorée.

Dosage par spectrophotométrie. En effet, le 2-6 dichlorophénol-indophénol qui participe dans
la réaction en tant que coenzyme artificiel, perd sa coloration lorsqu’il est réduit et on peut
suivre cette baisse de coloration à λ600nm (visible) en fonction du temps par
spectrophotométrie.

TP.
Le 2-6 dichlorophénol-indophénol remplace le coenzyme naturel FAD dans la réaction de
transformation du succinate en fumarate, catalysée par la succinate déshydrogénase in vitro.
C’est donc un coenzyme artificiel qui participe dans cette réaction d’oxydoréduction. La
forme oxydée du 2-6 dichlorophénol-indophénol est coloré en bleu foncé alors que la forme
réduite est incolore. Ainsi l’avantage c’est que la vitesse de réaction peut être évaluée par la
disparition de la coloration du 2-6 dichlorophénol-indophénol dans le milieu réactionnel. De
même le prix faible du 2-6 dichlorophénol-indophénol constitue un deuxième avantage
5/ Peut on substituer 2-6 dichlorophénol-indophénol par le coenzyme naturel ? OUI
6/ Comment détermine-t-on la vitesse initiale et le temps t0 d’une réaction catalysée par une
enzyme ?
38
Evolution de l'activité enzymatique en fonction du temps à une concentration donnée

La tangente permet de déterminer graphiquement la partie linéaire de la courbe, au début de la
cinétique enzymatique, reflétant les conditions initiales (S>P). Cette tangente donne la vitesse
exprimée en ∆DO/∆t, ∆pH/∆t, ∆P/∆t ou ∆S/∆t. Le temps t0 correspond à la durée de la catalyse dans la
partie linéaire de la courbe, phase stationnaire.
7/ Méthode du dosage des protéines par la méthode de Lowry.

a. expliquer comment faire une dilution de 1/1000è on utilisant des petits volumes (entre 0,5
à 5 ml). (Dilution en cascade)
Solution A : 0,5 ml + 4,5 ml = 5 ml dilution 1/10ème)
Solution B : 0,5 ml de A + 4,5 ml = 5 ml (dilution 1/100ème)
Solution C : 0,5 ml de B + 4.5 ml = 5 ml (dilution 1/1000ème)
b. Rôle de la gamme d’étalonnage

D’établir une relation entre des quantités connues de protéines (BSA) et la DOλ750 nm, c’est la
gamme étalon
c/ Expliquer brièvement le dosage des protéines par la méthode de Lowry.
Le dosage des protéines se fait par colorimétrie. Le mélange des protéines avec les réactifs
cupro-alcalin puis le Folin conduit à la formation d’un complexe coloré bleu foncé dont la
mesure de l’absorbance à 750 nm permet de déterminer la quantité de protéines présente dans
l’échantillon. Il est indispensable d’établir une relation entre des quantités connues de
protéines (BSA) et la DOλ750 nm, c’est la gamme étalon. Ainsi on peut déterminer la quantité de
39
protéines dans un échantillon inconnu, à condition que l’échantillon soit convenablement

dilué et traité dans les mêmes conditions que la gamme d’étalonnage.
Le dosage des protéines est effectué selon le tableau ci-dessous:

Gamme étalon Protéines à doser
No Tube 1 2 3 4 5 6 7 8
ml BSA [1mg/10ml] 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 0
ml extrait enzymatique dilué 0 0 0 0 0 0 0.5 1
H2O (ml) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.5 0
Réactif cupro-alcalin (ml) Ajouter 2.5 ml du réactif par tube, agiter, puis laisser reposer 10 min
Réactif folin (ml) Dans chaque tube, mettre 0.5 ml du réactif et agiter immédiatement
Après 25 min à l’obscurité, la DO est mesurée
Dosage des protéines par la méthode de Lowry

Gamme d’étalonnage
DOλ750nm
μg proteines/tube
40
Corrigés Juin 2017

Examen de Biochimie Métabolique Durée 1h 30 min
Question n°1 : Enzymes

a) Structure fonctionnelle des enzymes
Les structures tertiaire et quaternaire sont les formes fonctionnelles des protéines en général et les
enzymes en particulier.
Le repliement de la protéine (structure primaire et secondaire) sur elle-même dans l’espace
tridimensionnel forme le site actif et le site régulateur s’il existe. La structure quaternaire est formée
par l’association des sous unités et chaque sous unité à une forme tertiaire avec site actif et régulateur.
Ces structures sont stabilisées essentiellement par des liaisons non covalentes avec dans certains cas
des ponts disulfures.
b) Rôle des enzymes
Les enzymes sont des catalyseurs de réactions favorables d’un point de vue énergétique (∆G <0).
Elles augmentent la vitesse de catalyse en baissant l’énergie d’activation pour atteindre le plus
rapidement possible l’équilibre de la transformation. Les enzymes assurent également la sélectivité et
la spécificité de réaction mais également le contrôle du métabolisme cellulaire en réponse aux
différents ligands (métabolites) et hormones (via messagers secondaires et/ou via le système de
phosphorylation/déphosphorylation).
c) Impact de la régulation enzymatique sur le métabolisme cellulaire
L’ensemble des réactions biochimiques du métabolisme cellulaire sont catalysées par des
enzymes spécifiques. C’est dire à quel point la régulation enzymatique à un impact considérable sur le
métabolisme cellulaire. Les maladies comme les défaillances physiques ont pour origine ou
conséquence les activités enzymatiques.
d) Enzyme augmente la vitesse initiale de la réaction enzymatique oui

e) Enzyme augmente l’énergie d’activation non
f) L’augmentation de [S] initiale augmente la Vi oui
g) Enzyme modifie la constante d’équilibre (Kéq) du système non
h) Enzyme assure la sélectivité et spécificité de réaction oui
i) Enzyme dénaturée possède une structure tertiaire et quaternaire non
j) L’enzyme allostérique fonctionnelle (natif) possède une structure secondaire. oui
k) La vitesse maximale est déterminée dans la phase stationnaire oui
l) Le froid conserve les aliments en baissant l’énergie d’activation oui
Question n°2 : Métabolisme
41
a) Définition de l’anabolisme cellulaire :
L'anabolisme : ensemble de réactions enzymatiques permettant la biosynthèse de

macromolécules biologiques complexes, protéines, acides nucléiques, polysaccharides,
lipides, à partir de molécules de structures simples, acides aminés, nucléotides, oses
simples, glycérol et acides gras ou à partir des éléments CO2 et H2O. Ces réactions
nécessitent un apport d'énergie libre fournie généralement par l'hydrolyse de l'ATP et/ou
par le pouvoir réducteur du NAD(P) H et du FADH2.
b) Définition du catabolisme cellulaire
Le catabolisme : ensemble de réactions enzymatiques de dégradation de macromolécules

en molécules de faible taille (intermédiaires métaboliques et/ou produits terminaux communs)
ou par leur 'oxydation complète, donne du CO2, H2O. Ces réactions s'effectuent avec
formation à la fois des composés (phosphoénolpyruvate, 1.3-bis phosphoglycérate, etc.)
contenant un groupe phosphoryle à "haute énergie libre" permettant la synthèse d'ATP à partir
d'ADP et des coenzymes (transporteurs d'électrons) réduits (NAD(P) H et FADH2).
c) Rôle de la glycolyse et donner son bilan énergétique :

Chez les Eucaryotes, 2 molécules de NADH et uniquement 2 molécules d’ATP sont formées
lors de la conversion d’une molécule de glucose en 2 molécules de pyruvate.
Le rôle principal de la glycolyse est le catabolisme du glucose en pyruvate dans les conditions
aérobiques (présence d’O2) comme les conditions anaéroboiques (absence d’O2) et la production de
deux molécules d’ATP utilisables directement et deux molécules NADH qui peuvent être utilisés dans
le métabolisme ou ré-oxydés par le système de navettes permettant le transfert des électrons vers la
mitochondrie. Le pyruvate peut ainsi alimenter le cycle de Krebs en acétyl-CoA et en oxaloacétate afin
de produire un maximum d’énergie cellulaire. En absence d’oxygène, le cycle de Krebs est bloquer et
le pyruvate sera orienté vers la fermentation alcoolique ou lactique en fonction des organismes et le
type cellulaire.
d) Régulation de la glycolyse
La régulation de la glycolyse dépend essentiellement de la charge énergétique et notamment
le rapport ATP/AMP dans les cellules. Les cibles importantes de la régulation de la glycolyse
sont :
42
- L’hexokinase, enzyme allostérique qui catalyse la phosphorylation du glucose en glucose

6-phosphate (étape 1 irréversible), constitue un site de régulation de la glycolyse. En effet,
le glucose 6-phosphate, à concentration élevée, inhibe de manière allostérique les
isoenzymes I, II et III de l’hexokinase présents dans la plupart des organes. En revanche, il
n’inhibe pas l’isoenzyme IV, appelé encore glucokinase, qui prédomine dans le foie et le
pancréas
- la phosphofructokinase 1 (PFK1), enzyme allostérique qui catalyse la formation du
fructose 1,6-bisphosphate (étape 3 irréversible), est soumise à contrôle métabolique stricte
notamment par le taux de l’AMP, ATP, citrate ou Fructose 2,6-BisPhosphate (F2,6-BP).
L’activité de la PFK1 est dépendante des besoins de la cellule en énergie et en
intermédiaires métaboliques; elle est inhibée lorsque la concentration de l’ATP et du
citrate est élevée. L’activité de la PFK1 est également régulée par un activateur
allostérique, le fructose 2,6-bisphosphate (F 2,6-BP) et l’AMP. Cette enzyme est
également activée par déphosphorylation sous contrôle hormonal par l’insuline, mais
également désactivé par phosphorylation sous contrôle du glucagon.
- La pyruvate kinase, enzyme allostérique qui catalyse la formation du pyruvate à partir de
PEP (étape 10 irréversible), est inhibée par l’ATP, acétyl-CoA, alanine et activée par
l’AMP, fructose 1,6-bisphosphate. L’insuline active également la pyruvate kinase par sa
déphosphorylation alors que le glucagon l’inhibe par sa phosphorylation.
e) Rôle du cycle de Krebs :

Le cycle de Krebs ou cycle du citrate, localisé dans la mitochondrie chez les eucaryotes,
permet l'oxydation complète de l'acetyl-CoA en provenance des carbohydrates, des lipides et
des protéines. Il comporte huit réactions enzymatiques utilisées par tous les organismes
aérobies pour générer de l'énergie GTP directement et des coenzymes réduits NADH, et
FADH2 qui seront ré-oxydés dans la chaîne respiratoire afin d’assurer la plus grande part des
besoins énergétiques de la cellule. Outre l’aspect énergétique, le cycle de Krebs fournit
également des intermédiaires métaboliques en tant que précurseur pour la synthèse de certains
acides aminés ou des voies métaboliques
f) Expliquer comment l’absence d’oxygène arrête la production de l’ATP intracellulaire ?

L’oxygène moléculaire est l’accepteur terminal des électrons de la chaine respiratoire
mitochondriale. L’absence d’oxygène provoque donc l’arrête de la chaine respiratoire et par
conséquent plus de disponibilité des coenzymes NAD+ et FAD (forme oxydée) qui sont indispensable
pour le fonctionnement du cycle de Krebs. Cependant, une partie faible d’énergie est produite par la
43
glycolyse qui ne dépend pas de la présence d’O2 avec le déclenchement des voies fermentaires
(lactique, alcoolique).
Question n°3 : Métabolisme des acides gras

a) Les formes absorbables des lipides au niveau des intestins :
Chez les animaux, les acides gras et les 2-mono-acylglycéroles qui résultent de l’hydrolyse
des graisses des aliments par les lipases pancréatiques, sont absorbées par les entérocytes
(cellules absorbantes de l’intestin grêle)
b) Sous quelle forme les lipides sont transportés dans le sang ?

Les lipoprotéines formes de transport des graisses hydrophobes dans le plasma sanguin. De
structure globulaire, elles sont constituées d’un cœur hydrophobe de triglycérides, entouré de
protéines, d’esters de cholestérol et de phospholipides.
c) Comment se fait le transport des acides gras intracellulaire vers la mitochondrie ?

Avant de pénétrer dans la matrice mitochondriale pour y être oxydés, les acide gras
cytosoliques sont tout d’abord activés en acyl CoA au cours d’une réaction en deux étapes,
catalysée par l’acyl CoA synthétase, où intervient l’ATP. L’acide gras réagit avec l’ATP pour
former un acyl adénylate intermédiaire qui est ensuite attaqué par le groupe sulfhydryle du
CoA pour donner l’acyl CoA. Les deux réactions sont réversibles et la constante d’équilibre
est proche de 1, mais l’hydrolyse du PPi en deux molécules de Pi rend la formation de l’acyl
CoA irréversible.
Au niveau de la membrane mitochondriale externe, au cours d’une réaction catalysée par
la carnitine acyltransférase I, le groupe acyl est transféré de l’atome de soufre du CoA au
groupe hydroxyle de la carnitine, qui est un zwitterion, et les acyl CoA sont convertis en acyl
carnitine. C’est sous cette forme que les acides gras traversent les membranes mitochondriales
sous l’action d’une translocase et arrivent dans la matrice où ils sont à nouveau conjugués au
CoA au cours d’une réaction catalysée par la carnitine acyltransférase II.
44
Les espèces AG) à chaîne courte (2 à 10 carbones), traversent la membrane interne

mitochondriale sous forme d'acides gras libres et sont activées en acyl-CoA directement dans
la matrice.
d) Le bilan énergétique de la β–oxydation par tour/

Chaque tour de β–oxydation forme 1 NADH + 1 FADH2 + 1 acétyl-CoA
Et 1 acétyl-CoA donne 3 NADH + 1 FADH2 + 1GTP via le cycle de Krebs
Ainsi le bilan par tour de β–oxydation donne : 4 NADH + 2 FADH2 +1 GTP
1 NADH donne 3 ATP
1 FADH2 donne 2 ATP
Il y a formation de (4 x 3) + (2 x 2) +1 GTP = 17 ATP par de β–oxydation
On ne tient pas compte de l’activation de l’acide gras dans ce calcul
e) Quel est le produit final de la β–oxydation ?

Acétyl-CoA
f) Décrire la première étape de biosynthèse des acides gras :

La biosynthèse des acides gras commence par la carboxylation d’un acétyl CoA en
malonyl CoA catalysée par l’acétyl CoA carboxylase, enzyme contenant un groupe
prosthétique biotine. Un groupe carboxybiotine est formé aux dépens de l’hydrolyse d’un
ATP et le CO2 ainsi activé est transféré à l’acétyl CoA pour former le malonyl CoA. Le cycle
d’élongation commence par la formation d’acétyl ACP et de malonyl ACP à partir d’acétyl
CoA et de malonyl CoA catalysée par l’acétyl transacylase et la malonyl transacylase,
respectivement. Les acides gras à nombre impair d’atomes de carbone sont synthétisés à partir
du propionyl ACP.
L’acétyl ACP et malonyl ACP forment l’acétoacétyl ACP au cours d’une réaction
catalysée par l’enzyme de condensation acyl-malonyl ACP. Une unité à quatre atomes de
carbone est formée et le CO2 est libéré. La décarboxylation du malonyl ACP favorise la
réaction.
45
Question n°4 : Corps cétoniques

a) Donner une structure importante des corps cétoniques :
Acétoacétate -OOC-CH2-CO-CH3
Acétone : CH3-CO-CH3
D-3-hydroxybutyrate : -OOC-CH2-CHOH-CH3
b) Lieu de synthèse des corps cétoniques :

Dans les mitochondries hépatiques : acétoacétate, D-3-hydroxybutyrate et acétone.
c) Dans quelles conditions les corps cétoniques sont synthétisés ?

Au cours du jeûne ou diabète, l’oxaloacétate est utilisé par la gluconéogenèse pour former
du glucose et il est donc peu disponible pour sa condensation avec l’acétyl CoA (réduction du
cycle de Krebs). Dans ces conditions, l’acétyl CoA en provenance des lipides est dirigé vers la
formation, dans les mitochondries hépatiques, des corps cétoniques : acétoacétate, D-3-
hydroxybutyrate et acétone
d) Rôle des corps cétoniques :
Corps cétoniques sont une forme transportable hydrosoluble d’unités acétyle, le myocarde
et le cortex rénal utilisent l’acétoacétate comme source d’énergie
Question n°5 : Cholestérol

a) Structure du cholestérol :
46
b) Rôle du cholestérol :
Le cholestérol est essentiellement synthétisé dans le foie et l'intestin mais est également
apporté par l'alimentation. Le cholestérol, libre ou estérifié avec un acide gras, joue un rôle
physiologique majeur puisqu'il est un composant des membranes cellulaires et un précurseur
des hormones stéroïdiennes et des sels biliaires. C'est un élément majeur des membranes
cellulaires animales qui contribue à leur stabilité et au maintien de leurs structures en
s'intercalant entre les phospholipides. Il rigidifie la membrane car il empêche sa gélification
en évitant la cristallisation des acides gras, et diminue la perméabilité membranaire aux
molécules hydrosolubles. Il a un rôle de tampon thermique c. à. d. à 37°, il limite le
mouvement des phospholipides en diminuant la fluidité membranaire; alors qu’à des
températures plus basses, il empêche l'entassement des phospholipides. Dans la membrane,
il permet la formation de radeaux lipidiques, zone essentielle à l'ancrage de protéines
fonctionnelles. Dans les neurones, il permet la synthèse des neurotransmetteurs par
exocytose et donc la propagation de l'influx nerveux. Le métabolisme du cholestérol est
également précurseur de nombreuses molécule comme les hormones stéroïdes
(cortisol, cortisone, et aldostérone), les hormones stéroïdes sexuelles (progestérone,
œstrogènes, et testostérone), le cholécalciférol (vitamine D3), l'hème A (hème de
l’hémoglobine), l'ubiquinone ou coenzyme Q10 (chaine respiratoire), les sels biliaires
(digestion) ,etc..
47

Examen TP Biochimie Métabolique Juin 2017

Durée 25 min (Res. ELABBADI N.)
8. Donner la structure du substrat et du produit de la réaction catalysée par la succinate

déshydrogénase :
Substrat succinate: -OOC-CH2-CH2-COO-

-
Produit fumarate: OOC-CH=CH-COO-
9. Structure du 2-6 dichlorophénol-indophénol :

Cl
C CH HC CH
HO CH C N C C O
CH CH HC CH
Cl
forme oxydée colorée forme réduite incolore
10. Rôle du 2-6 dichlorophénol-indophénol dans la réaction d’oxydation du succinate.
Le 2-6 dichlorophénol-indophénol remplace le coenzyme naturel FAD dans la réaction

de transformation du succinate en fumarate, catalysée par la succinate déshydrogénase
in vitro. C’est donc un coenzyme artificiel qui participe dans cette réaction
d’oxydoréduction. La forme oxydée du 2-6 dichlorophénol-indophénol est coloré (λ
600 nm) en bleu foncé alors que la forme réduite est incolore. Ainsi l’avantage c’est
que la vitesse de réaction peut être évaluée par la disparition de la coloration du 2-6
dichlorophénol-indophénol dans le milieu réactionnel.
11. Peut-on remplacer le 2 -6 dichlorophénol-indophénol par le coenzyme naturel ? OUI
12. Décrire brièvement le principe du dosage de l’activité urease.
Le dosage de l’activité urease est basé sur la variation du pH dans le milieu

réactionnel et donc dosage par pH-métrie. En effet, l’enzyme uréase hydrolyse le
substrat urée en ammoniac et du dioxyde de carbone (CO2). Le gaz carbonique et
48
l'ammoniac formés réagissent immédiatement avec l'eau pour donner du carbonate

d'ammonium CO3(NH4)2, base faible responsable de l’augmentation du pH.
13. Expliquer pourquoi vous avez utilisé de l’eau au lieu d’une solution tamponnée pour
le dosage de l’activité urease dans la farine de soja.
Le principe du dosage de l’activité urease dans la farine de soja est basé sur la
variation du pH du milieu réactionnel. L’utilisation d’un agent tampon va empêcher la
variation du pH et c’est la raison pour laquelle on a exceptionnellement utilisé l’eau
qui très sensible aux variations du pH dans cette expérience
14. Décrire brièvement la méthode de dosage des protéines (méthode de Lowry) et

pourquoi vous avez fait le dosage des protéines dans le cadre du TP.
Le dosage des protéines se fait par colorimétrie. Le mélange des protéines avec les
réactifs cupro-alcalin puis le Folin conduit à la formation d’un complexe coloré bleu
foncé dont la mesure de l’absorbance à 750 nm permet de déterminer la quantité de
protéines présente dans l’échantillon. Il est indispensable d’établir une relation entre
des quantités connues de protéines (BSA) et la DOλ750 nm, c’est la gamme étalon. Ainsi
on peut déterminer la quantité de protéines dans un échantillon inconnu, à condition
que l’échantillon soit convenablement dilué et traité dans les mêmes conditions que la
gamme d’étalonnage.
Le dosage des protéines permet de déterminer l’activité spécifique de l’uréase et le la

succinate déshydrogénase.
Le dosage des protéines est effectué selon le tableau ci-dessous:

Gamme étalon Protéines à doser
No Tube 1 2 3 4 5 6 7 8
ml BSA [1mg/10ml] 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 0
ml extrait enzymatique dilué 0 0 0 0 0 0 0.5 1
H2O (ml) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.5 0
Réactif cupro-alcalin (ml) Ajouter 2.5 ml du réactif par tube, agiter, puis laisser reposer 10 min
Réactif folin (ml) Dans chaque tube, mettre 0.5 ml du réactif et agiter immédiatement
Après 25 min à l’obscurité, la DO est mesurée
49
Corrigés Janvier 2018

« BCG » Janvier 201 8 Durée 2h
Question I (Répondre aux questions suivantes par vrai ou faux)

ATTENTION + 1 point pour une réponse juste et – 1 pour une réponse fausse.
1. Enzyme réduit la vitesse initiale de la réaction enzymatique F
2. Enzyme diminue la variation d’énergie libre (∆G) de la transformation F
3. Enzyme augmente l’énergie d’activation F
4. L’augmentation de [S] initial inhibe la Vi F
5. Enzyme modifie la constante d’équilibre (Kéq) du système F
6. Enzyme assure la sélectivité et spécificité de réaction V
7. Enzyme native possède une structure tertiaire et quaternaire V
8. L’enzyme allostérique fonctionnel (natif) possède une structure tertiaire et quaternaire. V
9. A l’équilibre, la vitesse de la catalyse enzymatique est nulle V
10. La vitesse initiale et la vitesse maximale sont déterminées dans la phase stationnaire V
11. Le froid (0°C et -18°C) conserve les aliments en augmentant l’énergie d’activation F
12. Vitesse initiale Vi = kcat [ES] = (Vmax x [S])/(Km + [S]) V
13. Un inhibiteur compétitif ne change pas la Vmax. V
14. Un inhibiteur non compétitif change le Km F
15. La température influence l’activité enzymatique V
16. L’activité enzymatique n’est pas sensible à la force ionique V
17. La synthèse des corps cétoniques se déroule dans le foie V
18. La biosynthèse des acides gras se fait dans le cytoplasme V
19. La β-oxydation se déroule dans le cytoplasme F
20. la photosynthèse permet la biosynthèse des lipides F
Question II. Catabolisme des lipides chez les eucaryotes supérieurs.

Les mots clés, apport alimentaire, digestion, transport sanguin, transport cellulaire,
dégradation et production d’énergie intracellulaire, doivent vous aider dans la rédaction de
votre réponse. (30 lignes max.)
Chez les animaux, les lipides sont essentiellement apportés par l’alimentation, sauf si
l’alimentation est pauvre en lipides et pendant une période importante. Les acides gras, qui
résultent de l’hydrolyse des graisses des aliments par les lipases pancréatiques (digestion),
sont transportés par la lymphe, puis par le sang, des cellules intestinales vers les tissus. Ils
sont alors sous forme d’esters de glycérol, ou triglycérides (triacylglycérols), eux-mêmes
inclus dans des lipoprotéines dénommées Chylomicrons. Au contact des lipoprotéines lipases
membranaires, ces derniers auront leurs triglycérides hydrolysés et les acides gras libérés
pourront pénétrer dans les cellules où ils seront oxydés dans les mitochondries pour produire
de l’énergie, comme dans les myocytes (fibres musculaires), ou stockés sous forme de
triglycérides, comme dans les adipocytes.
50
Avant de pénétrer dans la matrice mitochondriale pour y être oxydés, les acide gras
cytosoliques notamment les acides gras longue chaine (Cn > 10) sont tout d’abord activés en
acyl CoA au cours d’une réaction en deux étapes, catalysée par l’acyl CoA synthétase, où
intervient l’ATP. L’acide gras réagit avec l’ATP pour former un acyl adénylate intermédiaire
qui est ensuite attaqué par le groupe sulfhydryle du CoA pour donner l’acyl CoA. Les deux
réactions sont réversibles et la constante d’équilibre est proche de 1, mais l’hydrolyse du PPi
en deux molécules de Pi rend la formation de l’acyl CoA irréversible.
Au niveau de la membrane mitochondriale externe, au cours d’une réaction catalysée par la
carnitine acyltransférase I, le groupe acyl (longue chaine) est transféré de l’atome de soufre du
CoA au groupe hydroxyle de la carnitine, qui est un zwitterion, et les acyl CoA sont convertis
en acyl carnitine. C’est sous cette forme que les acides gras traversent les membranes
mitochondriales sous l’action d’une translocase et arrivent dans la matrice où ils sont à
nouveau conjugués au CoA au cours d’une réaction catalysée par la carnitine acyltransférase
II. Les espèces AGs à chaîne courte (2 à 10 carbones), traversent la membrane interne
mitochondriale sous forme d'acides gras libres et sont activées en acyl-CoA directement dans
la matrice.
Au sein des mitochondries, les acyl CoA sont soumis à une séquence répétitive de quatre
réactions, dite β-oxydation, qui conduit à la formation de molécules d’acétyl CoA, de NADH
et de FADH2. Les liaisons entre groupes méthylène –CH2– sont relativement stables et la β-
oxydation est un puissant mécanisme qui permet de les rompre. L’acétyl CoA formé est
susceptible de rejoindre le cycle de l’acide citrique où il est oxydé avec création de nouvelles
molécules de NADH et de FADH2. Toutes les molécules de NADH et de FADH2 ainsi créées
pourront céder leurs électrons de haut potentiel de transfert dans la chaîne respiratoire
mitochondriale et concourir à la création d’un gradient de protons, apportant ainsi l’énergie
nécessaire à la synthèse d’ATP à partir d’ADP et de Pi par l’ATP synthase mitochondriale.
Question III
Un expérimentateur a oublié de noter les tubes correspondant aux expériences contenant enzyme et
substrat et ceux contenant enzyme, substrat et un ligand. Néanmoins, les résultats de son expérience
sont représentés dans le tableau suivant :
Substrat (µM)) Vitesse (µmoles/min) Vitesse (µmoles/min)
Expérience A Expérience B
3 4,1 10,4
5 6,4 14,5
10 11,3 22,5
30 22,6 33,8
90 33,8 40,5
51
a. Tracer les graphes des deux expériences.
1/v (μmoles-1 min)
Expérience A
Expérience B
1/[S] (μM-1)
b. Le ligand est présent dans l’expérience A ou B

D’après l’expérience le ligand est présent très probablement dans l’expérience A. Cependant,
il peut être présent dans B (peut probable vue le profile du graphe).
c. Déterminer graphiquement l’effet du ligand sur l’activité enzymatique.

Le ligand est un inhibiteur compétitif car le Vmax ne change pas alors que le Km change.
Dans l’hypothèse ou le ligand est présent dans expérience B alors c’est un activateur (peut
probable).
d. . Déterminer Km =………………… ; Vmax =………………… ; Ki =
• Km = 9.09 μM
• Ki
Donc Ki = [I]/[(Km’/Km – 1] = [I]/ [(28.571/9.09) -1]
Ki = [I]/2.143
e. Donner la signification du Vmax, Km et du Ki.

• Vmax signifie la saturation de l’ensemble des sites actifs de l’enzyme
• Km c’est la constante d’affinité de l’enzyme pour son substrat (force de reconnaissance)
• Ki c’est la constante d’affinité de l’enzyme pour son inhibiteur
52
f. Quelle est la structure fonctionnelle des enzymes.
-Structure tertiaire qui correspond au repliement de la protéine sur elle-même dans l’espace à trois
dimensions permettant la formation du site actif et le site régulateur si ce dernier existe.
- Structure quaternaire correspond à l’association des sous unités protéiques permettant la

coopérativité catalytique entre elles (sous unités) des enzymes allostériques.
Question IV relative aux travaux pratiques

1/ Ecrire la réaction de transformation de l’urée en donnant les structures chimiques.
NH2
+ H2O CO2 + 2NH3
C
O NH2
le gaz carbonique et l'ammoniac formés réagissent immédiatement avec l'eau et la réaction

se poursuit spontanément pour donner du carbonate d'ammonium selon la réaction :
2NH3 + H2O CO3(NH4)2

CO2 +
2/ Expliquer pourquoi le pH augmente lors du dosage de l’activité uréase dans la farine de

soja ?
Le carbonate d'ammonium formé est une base faible, responsable de l’augmentation du pH du
milieu réactionnel.

suivre cette baisse de coloration à λ600 nm (visible) en fonction du temps par

TP.
2-6 dichlorophénol-indophénol remplace le coenzyme naturel FAD dans la réaction de
transformation du succinate en fumarate, catalysée par la succinate déshydrogénase in vitro.
C’est donc un coenzyme artificiel qui participe dans cette réaction d’oxydoréduction. La
forme oxydée du 2-6 dichlorophénol-indophénol est coloré en bleu foncé alors que la forme
réduite est incolore. Ainsi l’avantage c’est que la vitesse de réaction peut être évaluée par la
disparition de la coloration du 2-6 dichlorophénol-indophénol dans le milieu réactionnel. De
même le prix faible du 2-6 dichlorophénol-indophénol constitue un deuxième avantage.
5/ Peut on substituer 2-6 dichlorophénol-indophénol par le coenzyme naturel ? OUI
53
Corrigés janvier 2019

« BCG » Janvier 201 9 Durée 2 h
1. Enzyme augmente la vitesse initiale de la réaction en baissant l’énergie d’activation oui

2. Enzyme augmente la variation d’énergie libre (∆G) non
3. Enzyme modifie la constante d’équilibre (Kéq) du système non
4. Enzyme assure la sélectivité et la spécificité de réaction oui
5. Enzyme native possède une structure tertiaire oui
6. Enzyme native possède une structure quaternaire oui
7. A l’équilibre, la vitesse de la catalyse enzymatique est nulle. oui
8. Le froid (0°C et -18°C) conserve les aliments en réduisant l’énergie d’activation oui
9. Vitesse initiale Vi = kcat [ES] = (Vmax x [S])/(Km + [S]) oui
10. Un inhibiteur compétitif change la Vmax. non
11. Un inhibiteur non compétitif change le Km non
12. Le pH influence l’activité enzymatique par changement de charge du site actif oui
13. L’activité enzymatique n’est pas sensible à la température non
14. La néoglucogenèse est à la fois mitochondriale et cytosolique non
15. La β-oxydation se déroule dans la mitochondrie oui
Question II. Soit la réaction A ↔ B, catalysée par une enzyme E avec Kéq = 0,475 à 25°C et pH 7.
a/ Donner l’expression et la valeur de ∆G°’.
R, constante des gaz parfaits = 8,315 J/mole degré = 1,987 cal/mole degré
T température absolue exprimée en degrés Kelvin (°K) (273 + T en °C)
∆G°’= - RT lnKéq = -8.315 (J/mol K) (273 + 25) (K) ln 0.475

= 1,844 Kj/mol
b/ Déterminer la valeur ∆G’ si [A]i = 2 x 10-5M et [B]i= 3 x 10-2M

∆G’ = ∆G°’ + RT ln([B]/[A]) = 1,844 Kj/mol + 8.315 (J/mol K) (273 + 25) K ln(3 x 10-2M/2 x 10-5M)
= 1,844 Kj/mol + 2477.87(J/mol) ln 1500
= 1,844 Kj/mol + 18,121Kj/mol = 19.965 Kj/mol
Réaction devient favorable dans le sens inverse (B vers A) dans les conditions de concentrations
initiales
c/ Est-ce que la réaction est irréversible ? Répondre par oui ou non : …………Non.
d/ Est-ce que la réaction est catalysée dans les deux sens par la même enzyme E. Oui
e/ Donner un exemple de réaction irréversible.

PEP en Pyruvate (glycolyse), Glucose en Glucose 6-phosphate (glycolyse), ATP en ADP
54
f/ Le couplage de réactions permet de surmonter le problème énergétique. Ainsi une réaction défavorable
peut se faire s’elle est couplée à une autre réaction très favorable.
1) Donner un exemple de couplage chimio-osmotique

Au niveau de la chaine respiratoire, la ré-oxydation de NADH en NAD+ couplée à l’expulsion de H+
vers l’extérieur de la mitochondrie.
2) Donner un exemple de couplage osmo-chimique

L’entrer des protons vers la mitochondrie (forte concentration de H+ à l’extérieur) permet d’apportr
suffisamment d’énergie libre pour que l’ATP synthase catalyse la phosphorylation de l’ADP en ATP.
C’est un couplage osmo-chimique.
3) Donner un exemple de couplage osmo-osmotique

Couplage entre le passage des protons vers l’intérieur de la mitochondrie est couplé à celui de l’enter
du phosphate inorganique (Pi) nécessaire à la phosphorylation de l’ADP en ATP intramitochondrial.
4) Donner un exemple de couplage chimique (chimio-chimique)

Lors du métabolisme cellulaire notamment le catabolisme, toutes les réactions (étapes)
permettant la synthèse ou l’hydrolyse de l’ATP, sont des réactions couplées. Glycolyse
réaction de phosphorylation du glucose (étape 1), du fructose 6-phosphate (étape 3), synthèse
d’ATP (étape 7 et 10).
Question III. Donner la structure chimique et le rôle de chaque molécule
Structure chimique rôle

Travaux cellulaires :
-métabolisme,
ATP - contraction
- musculaire,
- réflexion,
- etc…
55
-Production d’énergie (chaine respiratoire)
NADH - réaction d’oxydo-réduction

(métabolisme)
Corps cétoniques sont une forme

transportable hydrosoluble d’unités
Acétoacétate - acétyle, Le myocarde et le cortex rénal
OOC-CH2-CO-CH3
utilisent l’acétoacétate comme source
d’énergie
Métabolite important formé par la

gycolyse, cycle des pentoses phasphates,
Pyruvate etc. Il peut donner de l’oxaloacétate,
acétyl-CoA pour le cycle de Krebs, mais
(CH3-CO-COOH)
également précurseur de la synthèse du
glucose (néoglucogenèse), acides gras et
certains aminoacides comme l’alanine. En
absence d’O2 le pyruvate peut engendrer
de l’ethanol (microorganisme) ou l’acide
lactique (muscle, levure, etc.)
Le carburant principal de toutes les cellules

vivantes. En effet, l'énergie chimique
libérée lors du catabolisme du glucose par
la glycolyse, le cycle de Krebs et la chaîne
respiratoire, est stockée sous forme d'ATP.
Glucose Précurseur de structure de réserve

énergétique, l'amidon et le glycogène, mais
également des lipides, de certains
aminoacides, des acides nucléiques, et des
sucres.
Rôle structural cas de cellulose
Acétyl-CoA CH3-CO-S-CoA Intermédiaire métabolique important dans

la synthèse des lipides, sucre mais
également la production d’énergie
cellulaire
56
Forme de stockage d’énergie et de

transport des acides gras
TAG
Fluidité membranaire
Précurseur de nombreuses molécules :
-hormones stéroïdes
-cholécalciférol (vitamine D3)
Cholestérol - L'hème A,
- L'ubiquinone ou coenzyme Q10,
- Les sels biliaires
57
Corrigés Mai 2019

« B. C. G, Mai 2019 » Durée 1h 30 min (Res. ELABBADI N.)

1. Enzyme augmente la vitesse initiale de la réaction en stabilisant l’état de transition oui
2. Enzyme baisse la variation d’énergie libre de la transformation non
3. Enzyme baisse l’énergie d’activation oui
4. Enzyme modifie la constante d’équilibre du système non
5. Enzyme est inchangé en fin de réaction oui
6. Enzyme assure la sélectivité et spécificité de réaction oui
7. Enzyme native possède une structure tertiaire oui
8. Enzyme native possède une structure quaternaire oui
9. Enzyme native est sensible à la température oui
10. Enzyme native est insensible au pH du milieu non
Question II
1) Tracer les courbes suivantes Vi en fonction de [S] pour une enzyme Michaélienne
(classique) et allostérique (exemple l’hémoglobine et la myoglobine en fonction de la pression
partielle d’O2) et montrer la différence entre les deux fonctionnements enzymatique.
Michaélienne courbe en bleu hyperbolique typique Allostérique courbe en jaune sigmoïdale

d’une catalyse enzymatique selon le modèle (forme S) typique du phénomène de
Michaélien ou Vi=(Vmax [S])/(Km + [S]). coopérativité entre les sous unités
Exemple : Myoglobine qui assure le transport de (structure quaternaire). Exemple :
l’O2 intracellulaire Hémoglobine qui assure le transport de
l’O2 dans le sang jusqu’aux cellules cibles
58
2) Rôle physiologique du fonctionnement allostérique dans la régulation des voies

métaboliques et dans la diffusion de l’oxygène dans le corps humain.
En général, les voies métaboliques intracellulaires possèdent des enzymes allostériques et

notamment au début de la voie. Ces enzymes sont régulées de manière allostérique par des
intermédiaires métaboliques (glucose-6-phosphate inhibe hexokinase, fructose 1,6-
bisphosphate stimule pyruvate kinase) ou par le produit final (retro-inhibition). Ce système
permet une autorégulation de la voie métabolique en fonction des concentrations
intracellulaires des métabolites intermédiaires et du produit terminal, mais également les
conditions physiologiques (manque ou pas d’énergie). Le deuxième niveau de régulation est
l’intervention hormonale. Concernant la diffusion de l’oxygène dans corps humain, le
fonctionnement allostérique de l’hémoglobine se traduit par un changement d’affinité pour
l’oxygène. A forte concentration en O2 (poumons), l’hémoglobine prend la forme la plus
affine pour son substrat et à faible concentration en O2, elle devient moins affine à l’O2 qui
sera libéré puis pris en charge immédiatement par la myoglobine intracellulaire. Ainsi le
fonctionnement allostérique à un rôle physiologique important dans la diffusion de l’oxygène.
3) Expliquer le rôle physiologique de l’oxygène dans la production de l’ATP.

L’oxygène moléculaire en provenance de la respiration via le sang (hémoglobine) est
l’accepteur terminal des électrons (oxydant) de la chaine respiratoire mitochondrial. C’est ce
qui permet à la cellule de produire un maximum d’énergie sous forme d’ATP. L’absence d’O2
provoque l’arrêt immédiat de la production d’ATP mitochondrial et par conséquent la mort
cellulaire, d’où le rôle physiologique vital de l’oxygène.
4) Structure de l’ATP.
Question III. Expérience [transport des acides gras dans la mitochondrie]

Des hépatocytes (cellules) préparés à partir de foie de rats préalablement privés de toute
alimentation au mois 48h sont incubés en présence des acides gras radioactifs, oléate ou
octanoate, libres ou sous forme acyl-carnitine en présence ou en absence d’un inhibiteur
l’acide 2-tétradécylglycidique (ATGD) selon les conditions décrites dans le tableau suivant :
59
Substrats ATGD (µmol/L) Formation [14CO2] nmol/g poids frais/h

[1-14CO2] palmitate 0 105 ± 4
10 22 ± 2
[1-14CO2] ]octanoate 0 383 ± 20
10 443 ± 28
[1-14CO2] palmitoyl-carnitine 0 101 ± 6
10 109 ± 10
On peut suivre l’oxydation des acides gras par la mesure de la production de CO2 radioactif
[14CO2] à partir d’acides gras marqués au 14C sur leur fonction acide carboxylique
1/ Comment la mesure de 14CO2 peut refléter l’oxydation des acides gras intracellulaire ?
Les acides gras, marqués au 14C sur leur fonction acide carboxylique, une fois dans la
mitochondrie ils seront dégradés par la β-oxydation en [14C]acétyl-CoA radioactifs. Ces
derniers vont rejoindre le cycle de Krebs où ils seront ‘décarboxylés’ en CO2 radioactif avec
formation de GTP, NADH et FADH2. Ainsi la mesure de 14CO2 peut refléter l’oxydation des
acides gras intracellulaire
a/ activation des acides gras: Palmitate +CoA-SH +ATP Palmitoyl-CoA +AMP +PPi
b/ transport des AGs

vers la mitochondrie
b/ β-oxydation et cycle de krebs
*CO2 radioactif
Le CO2 radioactif est formé lors du cycle de l’acide citrique (cycle de Krebs)
60
2/ Proposer la cible (ou étape) où l’ATGD exercerait son effet inhibiteur ?
L’oxydation du palmitate est réduite par la présence de l’inhibiteur ATGD alors que
l’expérience avec la palmitoyl-Carnitine ne montre aucune réduction de décarboxylation. En
revanche l’oxydation de l’octanoate (acide gras courte chaine) n’est pas inhibée par la
présence de l’ATGD. Ce résultat montre clairement que l’inhibiteur ATGD n’agit pas au
niveau du translocase permettant le passage de la forme acyl-Carnitine vers la matrice
mitochondriale. En revanche, il agit au niveau de la palmitol-carnitine transférase qui
catalyse la formation de l’acyl-carnitine à partir de l’acyl-CoA. La palmitol-carnitine
transférase située sur la face externe de la membrane interne de la mitochondrie. Le fait que
l’ATGD n’inhibe pas l’oxydation de l’octanoide (AG courte chaine) renforce la cible
palmitol-carnitine transférase, car les acides gras courte chaine passent directement dans la
matrice mitochondriale où ils seront activés en forme acyl-CoA, sans passé par le système
Carnitine.
3 Que peut-on conclure quant au transport mitochondrial des acides gras : longue chaîne
et courte chaîne ?
- Les acides gras libre longue chaine (> 10 carbones) sont activés dans la membrane
mitochondriale externe par des acyl-CoA synthétases qui les transforment en thioesters
d'acyl-CoA, composés riches en énergie. Ces acyl-CoA ne traversent pas la membrane
interne mitochondriale. Le groupe acyl est lié de façon transitoire à la L-carnitine pour
former l'acyl-carnitine. Ce dernier est transporté à travers la membrane interne
mitochondriale. Une fois dans la mitochondrie, l'acyl-CoA est régénéré puis libéré dans la
matrice où il intègre la β-oxydation.
- les espèces AG) à chaîne courte (2 à 10 carbones), traversent la membrane interne sous
forme d'acides gras libres et sont activées en acyl-CoA directement dans la matrice.
Questions IV relatives au TP
1/ Donner le principe du dosage de l’activité succinate déshydrogénase:
Dosage par spectrophotométrie : l’activité succinate déshydrogénase catalyse l’oxydation du

succinate en fumarate et en même temps la réduction du 2-6 dichlorophénol-indophénol
(coenzyme artificiel) en forme réduite. La forme oxydée du 2-6 dichlorophénol-indophénol
est colorée en bleu foncé alors que la forme réduite est incolore. Ce qui permet de suivre
61
l’évolution de la réaction par diminution de l’intensité de coloration du milieu réactionnel par

spectrophotométrie (DO λ600nm).
2/ Peut on substituer 2-6 dichlorophénol-indophénol par le coenzyme naturel ?: Oui

déshydrogénase.
-
OOC-CH2-CH2-COO- -
OOC-CH1=CH1-COO-
Substrat (succinate) Produit (fumarate)
4/ Donner le principe du dosage de l’activité urease :
Le dosage de l’activité urease est basé sur la variation du pH dans le milieu réactionnel et
donc dosage par pH-métrie. En effet, l’enzyme uréase hydrolyse le substrat urée en
ammoniac et du dioxyde de carbone (CO2). Le gaz carbonique et l'ammoniac formés
réagissent immédiatement avec l'eau pour donner du carbonate d'ammonium CO3(NH4)2, base
faible responsable de l’augmentation du pH.
Le principe du dosage de l’activité urease dans la farine de soja est basé sur la variation du
pH du milieu réactionnel. L’utilisation d’un agent tampon va empêcher la variation du pH et
c’est la raison pour laquelle on a exceptionnellement utilisé l’eau qui très sensible aux
variations du pH dans cette expérience.
62
Corrigés (janvier 2020)
1 L’énergie d’activation influence l’énergie libre (∆G) d’une transformation non

2 L’enzyme assure la spécificité de réaction non
3 L’énergie d’activation permet aux structures complexes d’exister non
4 l’énergie d’activation modifie la constante d’équilibre (Kéq) du système non
5 Enzyme allostérique native possède une structure tertiaire et quaternaire oui
6 A l’équilibre, la vitesse de la catalyse enzymatique est maximale non
7 La variation du pH inhibe l’activité enzymatique oui
8 L’activité enzymatique est sensible à la température oui
9 La glycolyse se déroule dans le cytosol cellulaire oui
10 La synthèse des corps cétoniques se fait dans la mitochondrie oui
Question II. Photosynthèse
1/ Dans quel organe ou structure se fait la photosynthèse ?

Dans les thylacoides des chloroplastes, situées dans les feuilles des plantes
2/ Le rôle majeur de la photosynthèse

La conversion de l’énergie lumineuse en énergie chimique avec formation de la biomasse
(glucides), à partir du CO2 atmosphérique et de l'eau absorbée par les racines. Parallèlement à
cette réduction de CO2 par l’eau, il y a libération d’oxygène dans l’atmosphère.
3/ Quelle est la structure des enzymes chez les plantes ?

Exactement la même structure protéique que chez les animaux. C’est l’enchainement des
aminoacides (liaison peptidique) qui donne la structure primaire. Cette dernière évolue
(maturation) vers la structure secondaire, tertiaire et quaternaire. La structure fonctionnelle
des enzymes est tertiaire et/ou quaternaire.
4/ Est-ce que le fonctionnement enzymatique chez les plantes est le même que chez les
animaux ? Justifier votre réponse
En général le fonctionnement enzymatique chez les plantes est le même que chez les animaux
(exemple les enzymes de la glycolyse, cycle de Krebs, etc.). Cependant, il y des différences
structurales et fonctionnelles dues à la spécificité cellulaire et tissulaire.
63
- Mitochondrie : -métabolisme,
chaine respiratoire, - contraction musculaire,
ATP
cycle de krebs) - réflexion,
- Cytosol : glycolyse - etc…
- Thylacoide
-Production d’énergie
- Mitochondrie : cycle
(chaine respiratoire)
de krebs, β-oxydation
NADH - Réaction d’oxydo-
- Cytosol : glycolyse
réduction (métabolisme)
Mitochondrie Intermédiaire métabolique

(β-oxydation) important dans la synthèse
Acétyl-CoA CH3-CO-S-CoA des lipides, sucre mais
également la production
d’énergie cellulaire (cycle
de Krebs, corps
cétoniques)
Dans le réticulum Forme de stockage

endoplasmique des d’énergie et de transport
TAG cellules intestinales, des acides gras
tissu adipeux
(adipocytes), cellules
du foie
Essentiellement Précurseur de nombreuses
synthétisé dans le molécules :
Cholestérol cytoplasme des -hormones stéroïdes
-cholécalciférol (vitamine D3)
cellules de foie et
- L'hème A,
l'intestin mais est - L'ubiquinone ou coenzyme
également apporté par Q10,
l'alimentation - Les sels biliaires
64
Question IV (TP)
1/ Donner le principe du dosage de l’activité succinate déshydrogénase

suivre cette baisse de coloration à λ600 nm (visible) en fonction du temps par
2/ Peut on substituer 2-6 dichlorophénol-indophénol par le coenzyme naturel ? Oui

déshydrogénase.
Substrat succinate: -OOC-CH2-CH2-COO-
-
Produit fumarate: OOC-CH=CH-COO-
4/ Décrire brièvement le principe du dosage de l’activité urease.

Le dosage de l’activité urease est basé sur la variation du pH dans le milieu réactionnel et
donc dosage par pH-métrie. En effet, l’enzyme uréase hydrolyse le substrat urée en
ammoniac et du dioxyde de carbone (CO2). Le gaz carbonique et l'ammoniac formés
réagissent immédiatement avec l'eau pour donner du carbonate d'ammonium CO3(NH4)2, base
faible responsable de l’augmentation du pH.
Le principe du dosage de l’activité urease dans la farine de soja est basé sur la variation du pH du
milieu réactionnel. L’utilisation d’un agent tampon va empêcher la variation du pH et c’est la
raison pour laquelle on a exceptionnellement utilisé l’eau qui très sensible aux variations du pH
dans cette expérience.
65

« BCG » Septembre 2020 (Res. ELABBADI N.)
elabbadinoureddine@yahoo.fr
Durée 1h
Enzymologie
1. Enzyme baisse la variation d’énergie libre (∆G) de la transformation -

10. La glycolyse se déroule dans la mitochondrie -
11/ L’enzyme catalyse une réaction biochimique dans les deux sens -
Question II. Le couplage de réactions biochimiques permet de surmonter le problème

énergétique. Ainsi une réaction défavorable peut se faire s’elle est couplée à une
autre réaction très favorable.
d) Il faut que le ∆G global des deux réactions soit supérieur à 0 (∆G >0) -
e) Il faut la présence d’un catalyseur spécifique (Enzyme) -
f) Il faut que le produit de la transformation soit indispensable pour la cellule -
Question III. Régulation du métabolisme cellulaire. Dans des conditions

physiologiques particulières (absence de glucose), les acides gras sont rapidement
oxydés via la β-oxydation avec formation de l’acétyl-CoA et le NADH,H+
mitochondrial. Ce dernier favorisera la chute de l’oxaloacétate mitochondrial.
66
f) La chute de l’oxaloacétate mitochondrial est due à sa transformation en malate -

g) Le cycle de Krebs tournera mois vite par limitation de l’oxaloacétate -
h) Le malate quittera la mitochondrie pour favoriser la formation du glucose -
i) L’acétyl-CoA sera dirigé vers la formation des corps cétoniques -
j) A jeun, le foie est l’organe qui fournit le glucose et corps cétoniques -
Question IV. Régulation du taux de cholestérol se fait essentiellement au niveau de :

4 Le cholestérol libre dans la cellule inhibe la production de récepteurs membranaires
des lipoprotéines (LDLR) -
5 Le cholestérol libre inhibe l’activité HMG-CoA réductase -
6 Le cholestérol libre stimule son estérification en stéride -.
Question V. Photosynthèse
c) Permet la synthèse de la matière organique (biomasse) -
d) Permet la régénération de l’oxygène atmosphérique -
e) Permet la conversion de l’énergie lumineuse en énergie chimique -
f) L’activité humaine augmente le CO2 atmosphérique -
g) L’augmentation de forêts et plantes baisse le CO2 atmosphérique -
h) La couche d’ozone est perturbée par l’augmentation de CO2 atmosphérique -
67
Corrigés (février 2021)
19. l’énergie libre (∆G) d’une transformation influence l’énergie d’activation non
20. L’enzyme augmente la vitesse de réaction oui
21. L’énergie d’activation permet aux structures complexes d’exister oui
22. l’énergie d’activation ne modifie pas la constante d’équilibre (Kéq) oui
23. Enzyme allostérique native possède une structure tertiaire et quaternaire oui
24. A l’équilibre, la vitesse de la catalyse enzymatique est minimale oui
25. La variation du pH peut inhiber l’activité enzymatique oui
26. L’activité enzymatique est insensible à la température non
27. La glycolyse se déroule dans la mitochondrie cellulaire non
10. La synthèse des corps cétoniques se fait dans la mitochondrie oui
Question II. Régulation des voies métaboliques

1/ Donner la différence structurale et fonctionnelle entre Enzyme allostérique (quaternaire) et
Enzyme Michaeliènne (tertiaire).
• Enzyme Michaeliènne est une protéine (AAs > 100) avec un repliement de la structure
primaire sur elle-même dans l’espace à trois dimension. Enzyme allostérique est formé de
sous unités et chaque sous unité à une structure tertiaire.
• Fonctionnement hyperbolique pour l’enzyme Michaeliènne et sigmoïdale pour l’enzyme
allostérique avec le phénomène de coopérativité entre les sous unités
2 /Quels sont les sites (étapes) majeurs de régulation de la glycolyse ?

Les sites (étapes) majeurs de régulation de la glycolyse se situent au niveau des enzymes
catalysant les trois réactions irréversibles de la glycolyse à savoir étape 1 (hexokinase), 3
(fructose kinase) et 10 (pyruvate kinase).
3/ Donner trois molécules (ligands) régulatrices de la glycolyse.

• l’AMP, ATP, citrate ou Fructose 2,6-BisPhosphate (F2, 6-BP) au niveau de la
phosphofructokinase 1 (PFK1).
• Glucose 6-phosphate, à concentration élevée, inhibe de manière allostérique les
isoenzymes I, II et III de l’hexokinase (présents dans la plupart des organes)
l’isoenzyme IV, appelé encore glucokinase, qui prédomine dans le foie et le pancréas
• Pyruvate kinase est stimulé par fructose 1,6-bisphosphate et inhibée par l’ATP.
68
4/ Citer les points de Régulation du taux de cholestérol intracellulaire

a) Transformation cholestérol en coprostanol non absorbable au niveau intestinal
b) Cholestérol inhibe la transcription du gène qui code ses propres récepteurs membranaires
des lipoprotéines (LDLR)) et par conséquent le flux entrant de cholestérol dans la cellule
est diminué.
c) Transformation du thioester β-hydroxy-β-méthyl-glutaryl-CoA (HMG-CoA) en
mévalonate, catalysée par le HMG-CoA réductase est une étape essentielle et limitante
dans la synthèse du cholestérol intracellulaire. Cette enzyme est inhibée par le taux
intracellulaire de cholestérol libre grâce à l'activation de récepteurs nucléaires.
d) Le cholestérol circule dans le sang sous forme de lipoprotéines. L'estérification du
cholestérol est une étape importante et est catalysée par la Lecithin Cholesterol
AcylTransferase (LCAT). Le cholestérol libre stimule son estérification en stéride.
5/ Quel est le rôle majeur de la photosynthèse ?

C’est la conversion de l’énergie lumineuse en énergie chimique (biomasse essentiellement
glucidique) suite à la réduction du CO2 atmosphérique par l’eau. Cette réduction permet la
formation de l’oxygène atmosphérique.
- Mitochondrie : chaine -métabolisme,
respiratoire, cycle de - contraction
ATP
krebs) - musculaire,
- Cytosol : glycolyse - réflexion,
- Thylacoide - etc…
-Production d’énergie
- Mitochondrie : cycle
(chaine respiratoire)
de krebs, β-oxydation
NADH - réaction d’oxydo-
- Cytosol : glycolyse
réduction (métabolisme)
69
Mitochondrie: β- Intermédiaire
oxydation métabolique important
Acétyl-CoA CH3-CO-S-CoA dans la synthèse des
lipides, sucre mais
également la production
d’énergie cellulaire
Dans le réticulum Forme de stockage

endoplasmique des d’énergie et de transport
TAG cellules intestinales, des acides gras
tissu adipeux
(adipocytes), cellules
du foie
Acétoacétate OOC-CH2-CO-CH3 Mitochondries Corps cétoniques sont

hépatiques une forme transportable
(Corps cétoniques)
hydrosoluble d’unités
acétyle, Le myocarde et
le cortex rénal utilisent
l’acétoacétate comme
source d’énergie
Ethanol CH3-CH2-OH Fermentation Formation de NAD+ en

alcoolique absence d O2
(Fermentation) (anaérobique)
Essentiellement Précurseur de nombreuses
synthétisé dans le foie molécules :
Cholestérol -hormones stéroïdes
et l'intestin mais est -cholécalciférol (vitamine
également apporté par D3)
l'alimentation - L'hème A,
- L'ubiquinone ou
coenzyme Q10,
70
Corrigés juin 2021

Durée 1h 30 min
1/ Si Keq = 1, T = 37°C, R = 8,31 J.mol-1.K-1, alors ΔG0’ = 0 kcal.mol-1. oui

2/ La concentration en enzyme double ([S0] reste saturant) alors Vmax double. oui
3/ La variation de la concentration des métabolites permet de contrôler le flux d’une voie non
métabolique.
4/ Les conditions d'étude des cinétiques enzymatiques in vitro ne reflètent pas la réalité oui
cellulaire.
5/ Les conditions d'étude des cinétiques enzymatiques in vitro reflètent la réalité non
cellulaire.
6/ ADP et ATP franchissent la membrane interne de la mitochondrie par transport actif. oui
7/ ADP et ATP franchissent la membrane interne de la mitochondrie par transport passif. non
8/ La pyruvate kinase catalyse une réaction qui se déroule au voisinage de l’équilibre. non
9/ L’énergie d’activation modifie la constante d’équilibre (Kéq) du système non
10/ A l’équilibre, la vitesse de la catalyse enzymatique est maximale non
11/ La synthèse des corps cétoniques se fait dans la mitochondrie oui
Question II
Soit la réaction : A + B <====> C + 2D catalysée par une enzyme. La variation d'énergie
libre de Gibbs standard de cette réaction ΔG0' = - 4,7 kJ/mol. R = 8,31 J.K-1.mol-1, T = 37°C
a/ Calculez la valeur de la constante d’équilibre Kéq.
ΔG0' = -RT ln Kéq et donc Kéq = exp [- ΔG0'/RT]
Kéq = 0,161
b/ In vivo, les concentrations physiologiques des composés sont : [A]φ = 0,01 mM, [B]φ =
360 pM, [C]φ = 3 10-5 M, [D]φ = 2,5 µM.
Quelle est la valeur de la constante physiologique Kφ et ΔG’φ ?
• Kφ = ([C] x [D]2)/([A] [B]) = 5,208 10-2 M.
• ΔG’φ = ΔG0' + R T ln ([C] x [D]2)/([A] [B])
= ΔG0' + R T ln 5,208 10-2 M
= - 4,7 kJ/mol + 8,31 (J.K-1.mol-1) (273 + 37)K ln (5,208 10-2 M)
= -4,7 kJ/mol + 8,31 (J.K-1.mol-1) 310 K x -2.9549
71
= -4,7 kJ/mol – 7.612 kJ/mol = -12.312 kJ/mol
Réaction devient très favorable dans les conditions physiologiques
Question III. Donner le lieu de synthèse (anabolisme) ou de dégradation (catabolisme) et le

rôle physiologique des composés et voies métaboliques suivants :
Lieu du métabolisme Rôle cellulaire/physiologique
Voie majeure du catabolisme du

glucose intracellulaire avec
glycolyse Cytosol production ATP, NADH, pyruvate
Cycle de Krebs Mitochondrie Voie majeure de production

d’énergie directe GTP et NADH/
FADH2 à partir glucides, lipides et
protéine en présence d’oxygène
Phosphoryalation de l’ADP en ATP

au niveau de l’ATP synthase
(couplage osmo-chimique) située
dans la membrane interne de la
Phosphorylation Mitochondrie
mitochondrie grâce au gradient de
oxydative
concentration de H+ (force
osmotique). Ce gradient de H+ est
formé grâce au couplage des
réactions d’oxydoréductions à
travers la chaine respiratoire avec
l’expulsion des protons vers
l’extérieur de la mitochondrie
(couplage chimio-osmotique)..
-Corps cétoniques sont une forme
Corps cétoniques Mitochondrie des cellules transportable hydrosoluble d’unité
hépatiques essentiellement. acétyl.
-Source d’énergie en absence de
glucose
β-oxydation Mitochondrie Voie de dégradation des lipides

notamment les acides gras avec
production de NADH, FADH2 et
de l’acétyl-CoA
La conversion de l’énergie solaire
72
en biomasse végétale (glucides) à

Photosynthèse Thylacoides des chloroplastes partir du dioxyde de carbone (CO2)
situées dans les feuilles. atmosphérique et de l'eau absorbée
par les racines. Parallèlement à
cette réduction de CO2 par l’eau, il
y a libération d’oxygène
Cytosol
-métabolisme,
ATP Mitochondrie - contraction musculaire,
Chloroplaste plantes - réflexion,

-transport
- etc…
Cytosol NADPH est le donneur majeur des

électrons dans le métabolisme
NADPH Plaste chez les plantes biosynthétique intracellulaire. La
forme réduite NADPH est formée
principalement par la voie des
pentoses phosphates (phase
oxydative en présence ou absence
d’O2.
Acétyl-CoA Mitochondrie Intermédiaire métabolique

important dans la synthèse des
lipides, sucre mais également la
production d’énergie cellulaire
Dans le réticulum endoplasmique Forme de stockage d’énergie et de

des cellules intestinales, tissu transport des acides gras
TAG adipeux (adipocytes), cellules du
foie
Essentiellement synthétisé dans le Précurseur de nombreuses
foie et l'intestin mais est molécules :
Cholestérol également apporté par -hormones stéroïdes
l'alimentation -cholécalciférol (vitamine D3)
- L'hème A,
- L'ubiquinone ou coenzyme Q10,
73

Bioch Métab Examens Et Corrigés 2015 À 21

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Examens &Corrigés Biochimie Métabolique (BCG) Pr. ELABBADI N.

Université Sultan Moulay Slimane

Année 2015 – 2021

Dates examens Epreuves Corrigés

UNIVERSITE SULTAN MOULAY SLIMANE

A. La vitesse initiale d’une catalyse enzymatique en fonction de la concentration en substrat en

2. Expliquer la production de l’ATP au niveau des cellules eucaryotes (des organismes

3. Expliquer le rôle de l’oxygène dans la production de l’ATP (2 lignes).

Question V. (Répondre aux questions suivantes par vrai ou par faux)

UNIVERSITE SULTAN MOULAY SLIMANE

Question I (Répondre aux questions suivantes par oui ou par non)

Vitesse (µmoles/min) Vitesse (µmoles/min)

a. Déterminer graphiquement la nature de l’inhibition. (tracer la ou les courbes)

e. Donner la structure fonctionnelle des enzymes allostériques.

1. a/ Structure de l’ATP :………………………………………………………………….

b/ Rôle de l’ATP :………………………………………………………………………

c/ Sites de synthèse d’ATP :…………………………………………………………….

2. a/ Donner une structure chimique des corps cétoniques : ………………………………

b/ Rôle des corps cétoniques : …………………………………………………………..

c/ Site de synthèse des corps cétoniques :……………………………………………….

UNIVERSITE SULTAN MOULAY SLIMANE

1/ Ecrire la réaction de transformation du succinate en fumarate en donnant les structures

2/ Quel est l’accepteur et le donneur d’électrons dans cette réaction ?

3/ Donner le principe du dosage de l’activité succinate déshydrogénase.

4/ Expliquer le rôle et l’ (es) avantage(s) du 2-6 dichlorophénol-indophénol dans le cadre du

5/ Peut on substituer 2-6 dichlorophénol-indophénol par le coenzyme naturel ?

7/ Méthode du dosage des protéines par la méthode de Lowry.

b. rôle de la gamme d’étalonnage

UNIVERSITE SULTAN MOULAY SLIMANE

Examen de Biochimie Métabolique (BCG) Juin 2017

Question n°1 : Enzymes

b) Rôle des enzymes : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . .

c) Impact de la régulation enzymatique sur le métabolisme cellulaire

d) Enzyme augmente la vitesse initiale de la réaction enzymatique oui non

Question n°2 : Métabolisme

b) Définition du catabolisme cellulaire. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

c) Rôle de la glycolyse et donner son bilan énergétique : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

e) Rôle du cycle de Krebs : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

f) Expliquer comment l’absence d’oxygène arrête la production de l’ATP intracellulaire ?

Question n°3 : Métabolisme des acides gras

b) Sous quelle forme les lipides sont transportés dans le sang ? . . . . . . . . . . . . . . . .

UNIVERSITE SULTAN MOULAY SLIMANE

Examen TP Biochimie Métabolique Juin 2017

1. Donner la structure du substrat et du produit de la réaction catalysée par la succinate

2. Structure du 2-6 dichlorophénol-indophénol :

3. Rôle du 2-6 dichlorophénol-indophénol dans la réaction d’oxydation du succinate.

4. Peut-on remplacer le 2 -6 dichlorophénol-indophénol par le coenzyme naturel ?

5. Décrire brièvement le principe du dosage de l’activité urease.

7. Décrire brièvement la méthode de dosage des protéines (méthode de Lowry) et

UNIVERSITE SULTAN MOULAY SLIMANE

Question I (Répondre aux questions suivantes par vrai ou faux)

1. Enzyme réduit la vitesse initiale de la réaction enzymatique -

Question II. Catabolisme des lipides chez les eucaryotes supérieurs.

Substrat (µM)) Vitesse (µmoles/min) Vitesse (µmoles/min)

h. Déterminer graphiquement l’effet du ligand sur l’activité enzymatique.

i. Déterminer Km =………………… ; Vmax =………………… ; Ki = …………………

j. Donner la signification du Vmax, Km et du Ki.

k. Quelle est la structure fonctionnelle des enzymes.

Question IV relative aux travaux pratiques

2/ Expliquer pourquoi le pH augmente lors du dosage de l’activité uréase dans la farine de

3/ Donner le principe du dosage de l’activité succinate déshydrogénase.

4/ Expliquer le rôle et l’ (es) avantage(s) du 2-6 dichlorophénol-indophénol dans le cadre du

5/ Peut on substituer 2-6 dichlorophénol-indophénol par le coenzyme naturel ?