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THEME : Diversité et complémentarité des métabolismes

Dans la partie « Du carbone minéral aux composants du vivant : la photoautotrophie pour le carbone » Niveau : Spécialité TS

TP SPECTRE D'ABSORPTION

EXTRAIT DU BO:
Notions et contenus :
La photosynthèse est la succession de deux phases : dans les thylakoïdes, une phase photochimique dans laquelle grâce à la
collecte des photons par les pigments, …
Activités envisageables :
 Séparation de pigments photosynthétiques par chromatographie.
 Étude des spectres d’absorption de pigments chlorophylliens.
 Comparaison du spectre d’action et du spectre d’absorption pour un végétal.

CADRE PÉDAGOGIQUE :
On cherche à comprendre comment la photosynthèse rend les êtres vivants chlorophylliens autotrophes.
On se propose alors de découvrir les propriétés des pigments végétaux vis-à-vis de la lumière solaire.
On émet l’hypothèse selon laquelle les pigments absorbent la totalité des longueurs d’onde de la lumière blanche.

Objectifs de méthode :
 Réaliser : suivre un protocole
 Raisonner : adopter une démarche explicative

Objectifs de connaissances :
Les plantes chlorophylliennes absorbent la lumière principalement dans les longueurs d’onde bleu et rouge.

Coin laboratoire:
Gestion du temps : TP réalisable le jour même, pas de préparation préalable.
Achat à prévoir : épinards, produits chimiques : alcool Réf. 382980, piles pour l’appareil Mesura® Color Réf.22020

MATÉRIEL:
 Matériel frais : épinards
 Matériel de mesure : un colorimètre autonome : Mesura-color Réf.22020
 ( vérifier la mise en place de 2 piles LR6 – 1,5 volts) Réf. 04760
 Matériel d’extraction de la chlorophylle :
- mortier, Réf. 00115 (mortier et pillon)
- pilon,
- sable, Réf. 800980
- ciseaux, Réf. 00654
- entonnoir, Réf. 06564
- filtre, Réf. 007410
- dispositif de filtration Réf. 00698 (Support pour entonnoir)
 Verrerie :
- cuve à face parallèle, livrée avec l’appareil de mesure
- pipettes 5 ml Réf. 06715
 produits chimiques : alcool à 90°, Réf. 800980
 Sécurité :
particularité : odeur d’alcool  aération à mettre en œuvre + fermer le flacon aussitôt après le prélèvement de façon
hermétique

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Activités

On se propose de découvrir les propriétés des pigments végétaux vis-à-vis de la lumière.

Hypothèse : les pigments absorbent la totalité des longueurs d’onde de la lumière.

1- Proposer une conséquence vérifiable pour valider l’hypothèse.

2- Réaliser la manipulation décrite dans le protocole d’extraction de la chlorophylle brute.
3- Réaliser des mesures d’absorbance de la solution de chlorophylle brute pour éprouver l’hypothèse.
4- Construire un tableau de résultats.
5- Tracer le graphe illustrant l’absorbance d’une solution de chlorophylle brute d’épinards en fonction
des longueurs d’onde du spectre de la lumière blanche, on obtient le spectre d’absorption.
6- Exploiter le graphe obtenu pour tester l’hypothèse.
7- Conclure en reliant au problème initial.

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PROTOCOLE EXPÉRIMENTAL:
1- Laver une feuille d’épinard et enlever la nervure centrale. Découper en fins lambeaux à l’aide de ciseaux.
2- Broyer dans un mortier avec un peu de sable (rôle d’abrasif) dans un peu d’alcool à 90°.
3- Filtrer le jus obtenu, on recueille une solution alcoolique de chlorophylle brute.
4- Placer 3 ml de cette solution dans une cuve à faces parallèles et fermer à l’aide du bouchon noir fourni.
5- Sélectionner la mesure de l’absorbance.
6- Etalonner avec une cuve remplie d’eau en appuyant simultanément sur les 2 boutons de la face avant de l’appareil, la
valeur de l’absorbance s’affiche au bout de quelques secondes soit 0,00.
7- Placer alors la cuve de chlorophylle brute dans son emplacement puis réaliser des mesures nécessaires sachant que l’on
a à disposition 6 longueurs d’onde différentes : 470 nm, 567nm, 585 nm, 635 nm, 655 nm, 700 nm ainsi que la lumière
blanche.
.
Exemple de résultats avec Mesura Color

Tableau de Absorbance A
mesures : d’une solution de
longueur d'ondes chlorophylle brute
en nm d’épinards
470 0,099
567 0,039
585 0,058
635 0,093
655 0,162
700 0,076

Graphe correspondant tracé avec un tableur (Excel)

% d'Absorbance en fonction de la
longueur d'onde

0,2

0,15
absorbance

0,1 Absorbance A

0,05

0
0 500 1000
longueurs d'ondes

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