TP2:SEPARATION ET DOSAGE DES PIGMENTS

CLOROPHYLLIENS
 INTRODUCTION
LES ORGANISMES CHLOROPHYLLIENS SONT CAPABLES DE SYNTHÉTISER DES MOLÉCULES
ORGANIQUES
SIMPLES SOUS L’ACTION DE LA LUMIÈRE VISIBLE. CETTE SYNTHÈSE NÉCESSITANT LA LUMIÈRE
COMME
SOURCE D'ÉNERGIE S'APPELLE LA PHOTOSYNTHÈSE. L'UTILISATION DE L'ÉNERGIE LUMINEUSE
EST RENDUE
POSSIBLE GRÂCE À L'EXISTENCE DE PIGMENTS : MOLÉCULES CAPABLES D’ABSORBER CERTAINES
LONGUEURS
D'ONDE LORSQU'ELLES SONT ÉCLAIRÉES PAR DE LA LUMIÈRE BLANCHE. CETTE PROPRIÉTÉ LEUR
DONNE UNE
COULEUR DÉTERMINÉE.
LES CHLOROPHYLLES SONT LES PIGMENTS MAJEURS IMPLIQUÉS DANS LA CAPTURE DES
PHOTONS. LA
• LA REACTION TOTAL DE LA PHOTOSYNTHÈSES
CHLOROPHYLLE EST SYNTHÉTISÉE ET DÉGRADÉE DANS L'ENVELOPPE DU CHLOROPLASTE, MAIS
ELLE N'EST
PRÉSENTE ET ACTIVE COMME PIGMENT QUE DANS LES THYLACOÏDES.
 A-RÉALISATION DU SPECTRE
D'ABSORPTION :
PRINCIPE
LA LUMIÈRE BLANCHE EST CONSTITUÉE D'UN ENSEMBLE DE COULEURS
DIFFÉRENTES QUI CONSTITUENT LE SPECTRE LUMI- NEUX. CE SPECTRE EST
POLYCHROMATIQUE ET CONTINU : IL CONTIENT TOUTES LES NUANCES DE
COULEURS ENTRE LE VIOLET(400NM) ET LE ROUGE(750NM). S'EST DÉCOMPOSÉE
ET ON PEUT OBSERVER LES COULEURS DE L'ARC-EN-CIEL À LA SORTIE DU
MODE OPÉRATOIRE
PRISME.

EXTRACTION DES PIGMENTS FOLIAIRES

 DÉCOUPER FINEMENT 0,5 G DE FEUILLES DE MATÉRIEL VÉGÉTAL (VERBENACEAE”LANTANIER”).
 -BROYER À L'AIDE DU PILAN EN AJOUTANT UNE PINCÉE DU CARBONATE DE CALCIUM POUR
NEUTRALISER L'ACIDITÉ DU MILIEU.
 AJOUTER 10 ML D'ACÉTONE À 80 % ET CONTINUER À BROYER.
 LAISSER DÉCONTER ET FILTRER (ENTONNOIR+ FILTRE) DANS UN BÊCHAR.
 LA SOLUTION VERT FONCÉE OBTENUE EST UNE SOLUTION ALCOOLIQUE DE PIGMENTS FOLIAIRES.
 MESURE DE L’ABSORBANCE DE LA
CHLOROPHYLLE BRUTE
UTILISATION DU SPERECTROPHOTOMÈTRE:
ON A PRÉPARÉ DEUX CUVES À SPECTROPHOTOMÈTRE UNE CONTENANT
UNIQUEMENT DE L'ACÉTONE ET L'AUTRE CONTENANT DE LA CHLOROPHYLLE
PUIS ON RÈGLE LE SPECTROPHOTOMÈTRE SUR LA LONGUEUR D'ONDE 440NM,
RÈGLE ENSUITE LE 0 À L'AIDE DE LA CUVE CONTENANT L'ACÉTONE. PUIS ON
REFAIT LE MÊME TRAVAIL JUSQU'À LA LONGUEUR D'ONDE 720 NM ET ON PREND
LES MESURES DE LA DENSITÉ OPTIQUE.
 DOSAGE COLORIMÉTRIQUE DES
CHLOROPHYLLES:

Longueur 3 4 4 4 4 4 5 5 5 5 5 6 6 6 6 6 6 6 6 7 7
d’onde 8 0 2 4 6 8 0 2 4 6 8 0 2 4 4 5 6 6 8 0 2
(mm) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 5 2 0 3 0 0 0

1 1 0 0
0, 1, 1, 1, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0
, , , ,
9 0 5 5 1 6 2 0 0 0 1 1 2 3 4 6 ,
D.O 0 0 1 0
3 8 6 7 7 9 0 8 8 9 5 7 3 0 0 1 0
1 9 4 1
6 9 0 1 6 8 2 2 5 8 2 2 0 1 1 7 0
2 9 4 9

LES QUANTITÉS DE CHLOROPHYLLE CONTENU DANS 1 GRAMME DE

MATIÈRE FRAÎCHE AVEC L'UTILISATION DES ÉQUATIONS
PRÉCÉDENTE:
 Ca=(12,7X1,039)-(2,69X0,401)=12,116 mg/L
Cb=(22,9X0,401)-(4,68X1,039)=4,33 mg/L
C(a+b)=17,152mg/L

INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS

PUISQU’IL S’AGIT DES FEUILLES VERTES (SIÉGE DE LA PHOTOSYNTHÈSE),C’EST
NORMAL QU’ON TROUVE TOUS LES PIGMENTS, SURTOUT DE LA CHLOROPHYLLE A
ET DE MA CHLOROPHYLLE B RESPONSABLES DE LA COULEUR VERTE.

CONCLUSION
LA PROPRIÉTÉ DE L’ABSORBANCE À UNE LONGUEUR D’ONDE DONNÉE CONFÉRE
AUX PIGMENTS UNE COULEUR DÉTERMINÉE LORSQU’ILS SONT ÉCLAIRÉS PAR DE
LA LUMIÈRE BLANCHE
 B-SEPARATION DES PIGMENTS
CHLOROPHILLIENS
PRINCIPE
LA CHROMATOGRPHIE EST UNE TECHNIQUE DE SÈPARATION DE COMPOSÈS
CHIMIQUES .CELLE-CI EST BASÈ FIXE (BANDELETTE DE PAPIER
SPÈCIAL),L'AUTRE MOBILE (ÉLUANT),APRES UN CERTAIN TEMPS DE MIGRATION ,
LE CHROMATOGRAME MONTRE DES TACHES DES COMPOSES MIGRANTS
CARACTÉRISES PAR LEURE RF(RF=h2/H)
PREPARATION DU SUPPORT
 COUPER DES BANDELETTES DE PAPIER WHATMAN
 TRACER UN TRAIT AU CRAYON À 2CM D'UNE BAGUETTES EN VERRE UN PETIT MORCEAU DE FEUILLE
L'EMPLACEMENT PRÉVU ,RÉPÉTER L'OPÉRATION 3 FOIS EN RENOUVELANT LE MORCEAU DE FEUILLE (LA TACHE
DOIT ÊTRE AUSSI PETITE ET FONCÉE QUE POSSIBLE)
 SUSPENDRE LA BANDE DE PAPIER DANS LA CUVETTE EN VÉRIFIANT QUE LES DÈPÔTS DE PIGMENTS SOIENT
SITUÉS AU-DESSUS DU NIVEAU DE SOLVANT .
 LAISSER MIGRER LE SOLVANT À L'OBSCURITÉ PENDANT 40MN
 ARRÉTER LA CHROMATOGRPHIE , MARQUER AUSSITÔT LE FRONT DU SOLVANT ET ENTOURER LES DIFFÉRENTES
 CALCULE DU RF POUR CHAQUE TACHE

H=16,3cm
h2(1)=11,6 cm
h2(2)=11,3 cm
RF1=0,711
RF2=0,69