Cyclodextrines:

Généralités
 STRUCTURE DES CYCLODEXTRINES
NATURELLES

O OH
HO OH
O O 4 6
OH HO O
5 2
HO HO 1
O OH O 3 HO
O n
HO
O OH OH n = 6, a - cyclodextrine
HO
O n = 7, b - cyclodextrine
HO n = 8, g - cyclodextrine
OH
O HO O
OH

O HO OH HO OH
OH OH OH HO OH HO
O O
HO O HO O O
O O
O HO O O
O

HO HO
HO

b - Cyclodextrine
Forme spatiale
3
 a-CD b-CD g-CD
Nombre d’unités glucoses 6 7 8
Formule brute C36H60O30 C42H70O35 C48H80O40
Masse Molaire (g.mol-1) 972 1135 1297
Solubilité dans l’eau (g.L-1)
145 18,5 232
à 25 °C
Ø de la cavité (Å)
4,7 – 5,3 6,0 – 6,5 7,5 – 8,3
petit côté - grand côté
Hauteur (Å) 7,8 7,8 7,8
Volume de la cavité (Å3) 174 262 427
Nombre de molécules
6 11-12 18
d’eau
K1 :1 moyen (M-1) 130±8 490±8 350±9
OH
 OH6

OH2
OH3
 Quelques données bibliographiques:

• 250 publications en moyenne par mois

• 3 000 par an depuis 10 ans
• 112 866 références par scifinder (mot-clé: cyclodextrin)

Cyclodextrines - Histoire, propriétés, chimie & applications

Nadia Morin-Crini, Sophie Fourmentin, Grégorio Crini (2015), PU de
Franche-Comté - PUFC

Des congrès:
• International cyclodextrins Symposium: ICS
• European cyclodextrins: EuroCD
• http://www.clubcyclodextrines.fr/ en France SFCy
 Schematic representation of the cyclization reaction catalyzed by CGTase

After the first, bond-cleavage step, a covalent

intermediate is formed. In the second step the
linear chain assumes a cyclic conformation,
which is denoted as the circularization step. In
the third step, a new glycosidic bond is
formed with the 4-OH group of the glucose
unit in subsite +1. The catalytic residues
involved in bond cleavage are Asp-229 and
Glu-257 (the latter is not shown). The
formation of -cyclodextrin (eight glucose
units) is illustrated, but CGTase also produces
the smaller - and -cyclodextrins (six and seven
glucoses, respectively) and larger
cyclodextrins.

Uitdehaag, J. C. M. et al. J. Biol. Chem. 1999;274:34868-34876

Stereo picture indicating the maltononaose (7) (gray) and gamma-cyclodextrin (black)
conformation in the CGTase active site

Uitdehaag, J. C. M. et al. J. Biol. Chem. 1999;274:34868-34876

 Overview of the interactions between CGTase and maltononaose (7) (A) or gamma-
cyclodextrin (B)

For clarity, not all interactions at subsites 2, 1, and +1 are shown. Symm rel.
contacts, contacts made to a symmetry-related CGTase molecule in the
crystal.
Uitdehaag, J. C. M. et al. J. Biol. Chem. 1999;274:34868-34876
Production des Cyclodextrines

Lestrem
 Les cyclodextrines commerciales

• Roquette Frères (France) : b-CD

• Wacker (Allemagne) : b et g-CD, HPb et g-
CD, Rameb
• Janssen (USA) HPb-CD
• Cyclolab (Budapest, Hongrie)
Les cyclodextrines
Complexe d’inclusion

CD I CD/I

Conséquences possibles :
 Modification des propriétés physico-chimiques de la molécule invitée
 Modification de la réactivité chimique de la molécule invitée
 Stabilisation de substances sensibles à la lumière, à l’oxydation,…
 Fixation de substances volatiles

Szejtli, J. Cyclodextrins and their inclusion complexes; Akadaemiai Kiadao, 1982.

13
 Les cyclodextrines commerciales
Applications

Augmentation de la biodisponibilité
Libération contrôlée
Masquage

Séparation Protection

Extraction sélective
Solubilisation de PA
Les cyclodextrines
Applications

Industrie
pharmaceutique

Industrie Substrat Produits

alimentaire Cosmétologie
Phase organique

Phase aqueuse

Nanoréacteur

= Nano-objets +
Rhodium

Agrochimie Chimie

Enzymologie Environnement

Textile

15
Exemples de l’utilisation de CDs dans le secteur alimentaire : Epices dont les aromes
sont stabilisés par des CDs (a)41 ; beurre pauvre en cholestérol (b)42 ; bananes
stockées non emballées (1), en film PVC de contrôle (2) et en film contenait 2,9% de
complexe imazalil / b-CD (3) pendant 12 jours à 13 ° C (c).43
Quelques produits désodorisants Febreze® contenant la HP-b-CD
 Applications des cyclodextrines

 Solubilisation de composés insolubles

dans l'eau.
 Protection et masquage d'effets
secondaires
 Utilisation comme micro-réacteurs pour la
synthèse stéréosélective
 Résolution chirale
 H
N O

Cl CHOH
N

Cl
 Cyclodextrines
applications biologiques
Quelques exemples ….
 BENEFITS OF CYCLODEXTRINS IN THE DEVELOPMENT OF MIDAZOLAM
PHARMACEUTICAL FORMULATION

David Mathiron1, Frédéric Marçon2, Serge Pilard1, Jean-

Marc Dubaele2 et Florence Djedaini-Pilard3
1)Plateforme-analytique, Université de Picardie Jules Verne, 33 rue Saint-
Leu, 80039 Amiens, France;
2) Pharmacie Centrale, CHU, place Victor Pauchet, 80054 Amiens, France ;
3) Laboratoire des Glucides FRE3517, Université de Picardie Jules Verne, 33
rue Saint-Leu, 80039 Amiens, France

F. Marçon, D. Mathiron, S. Pilard, A.S. Lemaire-Hurtel, J.M. Dubaele and F. Djedaini-Pilard, Int. J.
Pharm, 2009, 379, 244-250
En 2006, 1/5e de la population européenne était âgée de moins de 16 ans ce
qui représentait environ 100 millions d’individus répartis dans les différentes
tranches d’âge : prématurés, nouveau-nés, nourrissons, enfants,
adolescents.
En pratique, 30 à 90 % des médicaments utilisés en pédiatrie n’ont pas été
développés ou testés chez l’enfant par l’industrie ce qui oblige à recourir aux
médicaments destinés aux adultes en dehors de leur autorisation de mise sur le
marché (unlicensed) ou à des préparations réalisées extemporanément par les
pharmacies (off label).
Les études relatent que 7-63% des prescriptions sont réalisées hors
autorisation de mise sur le marché (AMM) en pédiatrie, (90% dans certains
services de réanimation), ce pourcentage variant en fonction de la spécialité
médicale et de l’âge des enfants.
Cette absence de données ou de formes pharmaceutiques adaptées à la
pédiatrie expose à un risque d’effets indésirables (p.ex. liés aux excipients
toxiques chez l’enfant comme l’éthanol ou à la pharmacologie mal connue), un
risque d’inefficacité (p.ex. lié à la pharmacologie mal connue ou aux
problématiques d’administration des formes adultes inadaptées), et de perte de
chance (retard d’accès à l’innovation déjà disponible chez l’adulte).
Entre 2006 – 2016, l’agence européenne du médicament (EMA)
recensait une liste des besoins de développement prioritaire : « Pediatric
Needs » afin de répondre à cette problématique. Cette liste recense pour
plus de 350 substances actives (SA) un besoin portant sur : une
formulation adaptée à l’âge ; une étude pharmacocinétique ; une étude
d’efficacité ; une étude de sureté.

Sur ces 350 substances actives, 20 % concernent des médicaments

inscrits sur la liste des médicaments essentiels de l’OMS et 50 % de ces
« pediatric needs » portent sur des formulations adaptées aux enfants.
Malgré les politiques incitatives mises en place par l’EMA et à destination
des industrielles, un bilan établit en 2018 que moins de 15 % des
besoins exprimés ont été couverts.
 Midazolam (MDZ) est un médicament appartenant à la classe des benzodiazépines
N
N

N C18H13ClFN3
Cl Exact Mass: 325,0782

Action sur les récépteurs GABAA du SNC : Picrotoxin

GABA site
Chloride
channel
site Steroid
site
Barbiturate
Benzodiazepine
site
site

+ +

- -

Effets : - anxiolytique
- myorelaxant Agent anesthésique préopératoire
- amnésique
 Mise au point d’une formulation orale pédiatrique

Problèmes liés au MDZ :

10,3mg.mL-1 à pH 3,4 à 25°C selon Ali et Upadhyay (2008)
•Faible solubilité aqueuse < 1mg.mL-1 à pH physiologique selon Loftsson (2002, BCS)
0,055mg.mL-1 à pH 8 selon March (US2012/0022051 A1)
H
•Amertume très prononcée H3C
1'
N H3C N+ H2O
1''
H3C
H
N+
2' 2''
10' N 10'' N
N
9' 9'' 3''
3'
H3O+ NH3+
H3O+
N N O
•Forme active peu stable Cl
8' pKa = 6.1
Cl
pKa = 1.7
Cl 8''
7' F 7'' F
F
6' 6''
4' 4''
5' 5''

CDs : capacité de former 1’

10’
2’
3’

des complexes d’inclusion 9’

8’
7’ 4’

g-CD 6’ 5’
 Problematic

N
Midazolam (MDZ) administered in pre-anesthesia
medication in the pediactric population by oral route H3C

N
But
N
- Strong bitterness
- Low solubility in aqueous solution F
- Low chemical stability of the active closed form
Cl

Development of midazolam oral formulation

accepted by children

Vectorization
 K
MDZ Complex
CD

23
g-CD, no bitterness,
22
sweety solution
Concentation of midazolam (mM)

21

20
b-CD, weak bitterness
19

18

17
a-CD, strong bitterness
16

15
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

Concentration of CDs (mM)

Phase solubility diagram of midazolam in citric acid buffer (4.2 g/L) at

25°C: a-CD (), b-CD () and g-CD ().
 K
H5

H3

OH 6
n n’ 4 6

5 2
O

HO
1
3 OH

1 O H3
3 5H5 2 4
8

5.3 5.2 5.1 5.0 4.9 4.8 4.7 4.6 4.5 4.4 4.3 4.2 4.1 4.0 3.9 3.8 3.7 3.6 3.5 3.4 ppm

1 H3
33 H5
5
5 2 4

5.3 5.2 5.1 5.0 4.9 4.8 4.7 4.6 4.5 4.4 4.3 4.2 4.1 4.0 3.9 3.8 3.7 3.6 3.5 3.4 ppm

Caracterization of inclusion complexe gCD/MDZ by 1H-NMR

(10mM in D2O with 40mM of citric acid)
 Job plot obtenu à partir du déplacement chimique
des protons 1, 2, 3, 4 et 5 de la gamma CD

Variation de déplacement chimique

5

observée.[gamma CD] 4 Proton H1

Proton H2
3 Proton H3
Proton H4
2 Proton H5

0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2
Ratio

maximum at r = 0.5
Stoichiometrie 1/1

NMR détermination of the associate constant

K= 283 M-1 at 300K
 1’ 2’
3’
Structure of MDZ/gCD inclusion complex 10’
9’
T ROESY experiment in D2O, 40mM citric acid 8’
7’ 4’
6’
5’
9’ 10’ 5’-7’ 2’8’ 6’ 4’

ppm

4 3.6

2 3.7
1’ 2’
3’ 3.8
5
10’
6 3.9
9’ 3
4.0
8’
7’ 4’ 4.1

6’ 5’ 4.2

4.3

4.4

8.0 7.9 7.8 7.7 7.6 7.5 7.4 7.3 7.2 ppm
 Proposed model of MDZ/gCD inclusion complex

N
H3C

N N
H6
H3C
N
H5 + N

N
F

g-CD F Cl

Cl

Stoichiométrie 1/1
K= 283 M-1 at 300K
 Influence des additifs sur la stabilité du complexe
dans la formulation finale

L’addition d’arome d’orange

conduit à un précipité dans la formulation

Pourquoi ?
 Influence des additifs sur la stabilité du complexe
dans la formulation finale

Sans arome orange

5.1 5.0 4.9 4.8 4.7 4.6 4.5 4.4 4.3 4.2 4.1 4.0 3.9 3.8 3.7 3.6 3.5 3.4 ppm

+ 10 µL d’arome orange

5.1 5.0 4.9 4.8 4.7 4.6 4.5 4.4 4.3 4.2 4.1 4.0 3.9 3.8 3.7 3.6 3.5 3.4 ppm

+20 µL d’arome orange

5.1 5.0 4.9 4.8 4.7 4.6 4.5 4.4 4.3 4.2 4.1 4.0 3.9 3.8 3.7 3.6 3.5 3.4 ppm

Figure 3 : Spectres RMN 1H (300MHz, 300K) partiels de la g CD dans la

formulation en l’absence et en présence de l’arôme orange
 N
H3C

N N
H3C
N
N

g-CD N
F

F Cl

Cl

Précipité
 Final Formulation

Ingrédients Quantités Rôles

Midazolam 200 mg Principe actif

Agent solubilisant &

g-CD 8000 mg
masquant d’amertume

Sucralose 150 mg Edulcorant

Ac. Citrique 420 mg Acidifiant

Arôme orange XII gouttes Aromatisant

Eau QSP 100 mL

 Effect of sterilization on Midazolam stability

3.88 7.96
100

Midazolam Midazolam
open form closed form
MH+ 500
MH+ 344 MH+ 326

MH+ 518
%

15 Time
3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00

LC-UV (220 nm) chromatogram of the g-CD/midazolam

formulation following steam (bottom) and filtration (top) sterilization process.
 Reversible midazolam ring opening occuring in aqueous
solution

Lipophilic closed Form (pH> 4) Ionic opened Form (pH< 2)

pH biodisponibility

pH Lipophilic closed Form

absorption through the buccal mucosa

 CDs displace the equilibrium in favor of MDZ closed-form

100

90

80

70

60

50
1H NMR

40 LC/UV-DAD

30

20

10

0
MDZ 1 b-CD/2 g-CD/3 RAMEB/
4 DIMEB/
5
MDZ MDZ MDZ MDZ
Estimation of MDZ closed-form percentage (2.5 mM of MDZ in D2O with 22 mM of citric
acid) in the absence and in the presence of CDs (25 mM) using 1H NMR and LC/UV-DAD.
 Stability studies of formulations
100

95
% MDZ remaining

90

No CD
85
g-CD
gamma-CD
80
RAMEB
75

70
0 1 2 3 4
Time (months)

Midazolam formulations stability in the absence of CD and in the

presence of g-CD, RAMEB studied upon a period of three months.
Drawback of the oral route:the hepatic and intestinal metabolism

Metabolisation

Voie F tmax Cmax

Références bibliographiques
d’administration (%) (min) (ng/mL)

Orale 27 53 25 Payne et al., 1989

Intrarectale 18 30 15,4 Payne et al., 1989

Intramusculaire 87 15 93,1 Payne et al., 1989
Intranasale 78 10,2 72,2 Walberg et al., 1991
 Du coté du CHU…
• Protocole de recherche clinique : « évaluation
pharmacocinétique du MDZ après administration unique d’une forme
orale nouvelle », population cible les enfants de 2 ans à 11 ans.
Recherche du Cmax et Tmax et AUC.

• Mise en place d’un essai Clinique en 2012 midazolam

injectable versus midazolam solution buvable à 2mg/mL et midazolam
solution sublinguale à 5mg/mL développée par la pharmacie centrale
chez l’adulte sain (détermination du profil pharmacocinétique). Étude
chez 6 volontaires sains. (EUDRACT-2012-003047-30)

• Obtention d’une Autorisation Temporaire d’Utilisation ATU

en 2012 au CHU d’Amiens
Ozalin : 1er Sédatif oral pédiatrique commercialisé dans 7 pays de l’UE

2009-2013
Complexe Midazolam/g-Cyclodextrine : Etudes physico-chimique, formulation et 1ers essais cliniques

• - Amertume
• + Solubilité
• + Stabilité chimique
• + Acceptabilité
• + Administration

2010-2015
Transfert de Technologie Indications thérapeutiques: prémédication avant la chirurgie
et pour les procédures diagnostiques et thérapeutiques, fin de
vie. Pédiatrie, Gériatrie

• 7 AMM Europe: 17 octobre 2018

• 18 novembre 2019 : avis favorable de la Haute
Autorité de Santé (HAS), France
2016-2019 • Septembre 2019: commercialisation au Royaune Uni
• Mars 2020: utilisation Service Réanimation en Italie
AMM et commercialisation
References :
 F. Marçon, D. Mathiron, S. Pilard, A.S. Lemaire-Hurtel, J.M.
Dubaele, F. Djedaini-Pilard Development and formulation
of a 0.2% oral solution of midazolam containing g-
cyclodextrin, International Journal of Pharmaceutics, 2009,
379, 244-250
 D. Mathiron, F. Marçon, J.M Dubaele, D. Cailleu, S. Pilard,
F. Djedaïni-Pilard Benefits of methylated cyclodextrins in
the development of midazolam pharmaceutical formulations,
Journal of Pharmaceutical Sciences, 2013, 102, 7, 2102-
2111
 K. A. Lyseng-Williamson, Midazolam oral solution
(Ozalin®): a profile of its use for procedural sedation
or premedication before anaesthesia in childrenDrugs &
Therapy Perspectives, 2019, doi.org/10.1007/s40267-019-
00629-5