Travaux Pratique

Chimie Organique IA
Semestre d’été 2009

Extraction et séparation de pigments

27 mai 2009 1 Coralie Fournier

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Semestre d’été 2009

1. But de l’expérience
Le but de cette expérience est de séparer la chlorophylle a et la chlorophylle b présentes dans les
feuilles d’épinards. La séparation poura avoir lieue grâce à la éthode de chromatographie sur couche mince.
Pour finir les absorbances de ces deux type d chlorophylles seront mesurées.

2. Principe de la méthode

Schéma de la molécule de chlorophylle :

H3C

N N

Mg

N N

H3C CH3

O
O

OCH3
O
O

Dans la chlorophylle a le groupe R est un groupe CH3 alors que dans la chlorophylle b le groupr R est
un groupe CHO. C’est cette différence entre des deux groupe qui nous permettra de séparer sur CCM nos
deux chlorophylles, grâce à leur différence d’absorption. Lors de la mesure de l’absorbance, il est impossible
de déterminer sur le spectre quelle part revient à quel pigment, c’est pourquoi il faut préalablement les
séparer. La structure des chlorophylles étant différente, leurs longueurs d’ondes maximales sont distinctes.
Les chlorophylles sont des molécules liposolubles, c’est-à-dire qu’elles peuvent être séparées des
lipides à l’aide de solvants organique. Ces pour cela qu’il est ossible d’extraire les chlorophylles des feuilles
d’épinards en broyant celles-ci dans de l’éthanol.

3. Partie expérimentale
0.6 g d’épinard ont été pesés, puis mélangés dans de l’éthanol et de l’acétone. Le tout à macéré
pendant environs dix minutes avant d’être filtré puis passé au rotavapor. Quelques mililitres de
dichlorométhane sont ajoutés aux produits, puis le mélange est déposé en ligne sur une couche mince de
silice. Elle est alors placée dans une cuve avec du solvant qui permettra la migration des différents pigments
contenus dans les épinards.
Les lignes de pigments correspondant à la chlorophylle a et b sont alors récupérées en les grattant
puis mélangées à quelques mililitre d’éthanol afin de pouvoir mesurer leur absorbance.

27 mai 2009 2 Coralie Fournier

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4. Résultats
• Schéma de la plaque de CCM

En étudiant le spectre d’absorption (mis en annexe) nous remarquons deux piques maximums pour la
chlorophylle a qui se situent à environs 420 nm et 666 nm.
En ce qui concerne la chlorophylle b les piques se situent à 437 nm et 655 nm.

5. Discussion
Les résultats théoriques attendu pour la chlorophylle a sont 453 nm et 662 nm. Pour le
premier pique nous obtnons une longueur d’onde beaucoup plus petite (420 nm), le deuxième pique est quant
à lui nettement plus proche (666 nm)
Pour la chlorophylle b nous attendions des piques situés à 430 nm et 642 nm. Les deux
piques obtenus expérimentalement sont assez proche, mais tout de même pas très très bons.
Les spectre d’absorbtion expériemntal n’est pas très bon, le premier pique pour la
chlorophylle a n’est pas visible, de plus les absorption située entre 500 et 650 nm de l’ongeur d’onde sont un
peu élevé pour la chlorophyle a. Cela est certainement du au fait que lors de la séparation sur la CCM, les
deux chlorophylles a et b ne se sont pas bien séparées.

27 mai 2009 3 Coralie Fournier