ProC® Global

Domaines d’utilisation
ProC® Global est un test de coagulation qui permet de déterminer la capacité anticoagulante
du système de la protéine C dans le plasma humain, afin de diagnostiquer les états déficitaires
héréditaires ou acquis du système de la protéine C. Utilisé en association avec le
Siemens Healthcare Diagnostics Plasma exempt de facteur V de la coagulation, ProC® Global
permet le dosage du facteur V Leiden.

Intérêt diagnostique
Le système de la protéine C est un mécanisme important pour la régulation de l’activité de
coagulation. Il consiste en l’action simultanée de la protéine C activée (PCa) et de son
cofacteur, la protéine S, qui inactivent les cofacteurs procoagulants, facteur VIIIa et facteur Va.
Des désordres de ce système augmentent le risque de thrombose. Parmi ces désordres, il a
surtout été décrit jusqu’à présent des déficits ou défauts d’inhibiteurs, ainsi que des
autoanticorps1.
Un déficit héréditaire du système de la protéine C a été décrit en 1993 dans les cas de
thromboses veineuses à forte prévalence familiale2. Ce déficit est dû à une mutation du
facteur V (facteur V Leiden) qui touche le site de clivage du facteur Va destiné à la PCa3. Le
facteur Va Leiden est ainsi moins sensible à la PCa que le facteur Va normal. Des études ont
montré que la prévalence de cette mutation était d’env. 20 % chez les patients atteints de
différentes complications thromboemboliques veineuses. Environ 80 % de l’ensemble des
patients ayant une sensibilité réduite à la PCa sont également porteurs de facteur V Leiden4.
La présence de tels désordres peut être vérifiée en mesurant le temps de coagulation en
présence d’un système de la protéine C activé. La détermination de la capacité anticoagulante
du système de la protéine C à l’aide du test ProC® Global permet ainsi d’identifier les sujets
ayant un potentiel anticoagulant diminué du système de la protéine C (états déficitaires
héréditaires ou acquis en protéine C ou en protéine S, facteur V Leiden, auto-anticorps, etc.),
et qui présentent donc un risque thromboembolique plus élevé5.
En testant l’échantillon en présence d’un plasma exempt de facteur V de la coagulation, on
peut ainsi révéler de façon spécifique un facteur V Leiden (ProC® Global/FV)6.

Principe de la méthode
L’incubation du plasma de patient avec l’activateur de la protéine C (venin d’Agkistrodon
contortrix) et un activateur de contact entraîne l’activation de la protéine C endogène et de la
voie intrinsèque de la cascade de la coagulation. La coagulation est déclenchée par l’addition
d’ions calcium. La présence de protéine C activée, conjuguée à celle de protéine S endogène,
entraîne l’inactivation des cofacteurs procoagulants VIIIa et Va. Ceci ralentit la formation du
caillot. On mesure le temps d’apparition du caillot lié à l’activité de la protéine C
(PCAT = Protein C Activity dependent clotting Time). Dans le cas de plasmas ayant une
capacité du système de la protéine C diminuée, l’allongement du temps de coagulation est
moins prononcé.
Les déficits en facteurs procoagulants et les concentrations très élevées d’héparine doivent
être préalablement dépistés, dans la mesure où, entraînant un allongement du temps de
coagulation, ils peuvent ainsi compenser une diminution de la capacité du système de la
protéine C. Comme contrôle, utiliser le PCAT/0 qui doit être trouvé inférieur ou égal à

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60 secondes. Ce PCAT/0 doit être trouvé à l’intérieur du domaine de référence. Ce contrôle de

validité est particulièrement nécessaire pour les patients sous traitement à l’héparine ou sous
anticoagulants. L’échantillon peut également, avant son utilisation dans le test, être mélangé
au 1/5 avec un plasma exempt de facteur V de la coagulation. L’influence des autres facteurs
se trouvant ainsi minimisée, une diminution du ratio normalisé ne peut pratiquement être due
qu’à la présence de facteur V Leiden.

Réactifs
Contenu des conditionnements
ProC® Global, Coffret, REF OQLS de
4 x 5 ml, REAGENT APTT , Réactif TCA pour ProC® Global
4x 2 ml, ACTIVATOR , Réactif activateur pour ProC® Global
4 x 2 ml, BUFFER , Tampon pour ProC® Global
Composition
Réactif TCA pour ProC® Global, liquide : particules de dioxyde de silicium, phospholipides
végétaux (0,25 g/l), chlorure de sodium et Hépès, pH 7,6
Agent de conservation : azide de sodium (< 1 g/l).
Réactif activateur pour ProC® Global, lyophilisé : extrait de venin d’Agkistrodon contortrix
(PROTAC) (100 U/l), Hépès, neutralisateur de l’héparine : bromure d’hexadiméthrine (11 mg/l),
pH 7,4.
Conservateurs : 5‑chloro‑2‑méthyl‑4‑isothiazol‑3‑one (7,5 mg/l)
2‑méthyl‑4‑isothiazol‑3‑one (2,5 mg/l)
Tampon pour ProC® Global, liquide : Hépès, neutralisateur de l’héparine : bromure
d’héxadiméthrine (11 mg/l), pH 7,4
Conservateurs : 5‑chloro‑2‑méthyl‑4‑isothiazol‑3‑one (7,5 mg/l)
2‑méthyl‑4‑isothiazol‑3‑one (2,5 mg/l)
Mises en garde et précautions d'emploi
A n'utiliser que pour un usage in-vitro.
Contient de l’azite de sodium (< 0,1 %) comme conservateur. L’ azite de sodium peut
réagir avec les tuyaux d’évacuation en cuivre ou en plomb et former des composés
explosifs. L’évacuer conformément aux réglementations locales.

Préparation des réactifs

La bonne réalisation du test n’est garantie que si on utilise des réactifs provenant de coffrets
portant le même numéro de lot ; les combinaisons possibles de réactifs provenant de
différents lots sont indiquées sur l’étiquette de chaque coffret.
Réactif activateur pour ProC® Global : reconstituer le contenu du flacon par 2 ml d’eau
distillée, puis laisser le réactif au moins 5 minutes à 15 à 25 °C, en le retournant par
intermittence.
Réactif TCA pour ProC® Global : agiter brièvement le Réactif TCA pour ProC® Global et le
porter à la température ambiante (15 à 25 °C). Au-delà de 24 heures, réagiter le réactif avant
emploi.
Porter le Tampon pour ProC® Global à 15 à 25 °C, et la Solution de chlorure de calcium
0,025 mol/l à 37 °C.
Agiter de nouveau brièvement les réactifs avant leur emploi.
Stabilités et conditions de conservation
Conserver le coffret de test fermé entre 2 et 8 °C. Ne pas utiliser après la date d’expiration
mentionnée sur l’étiquette.

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Stabilités après reconstitution ou première ouverture

Température REAGENT APTT ACTIVATOR BUFFER

+15 à +25 °C1) 24 heures 24 heures 24 heures

15 °C1) 2 jours 2 jours 2 jours
+2 à +8 °C2) 2 semaines 2 semaines 2 semaines
−20 °C2),3) - 4 semaines 4 semaines
1) flacon ouvert 2) flacon fermé 3) ne congeler qu'une seule fois
Les données de stabilité sur appareil sont indiquées dans les protocoles d’adaptation des
différents automates de coagulation.
Autres réactifs et matériel nécessaires
Solution de chlorure de calcium, REF ORHO
Plasma standard humain, REF ORKL
Plasma de contrôle N , REF ORKE
ProC® Plasma de contrôle, REF OQKE
Plasma exempt de Facteur V de la coagulation, REF ORSM
Automate de coagulation
Appareils
ProC® Global peut être utilisé sur un grand nombre d’automates de coagulation.
Des protocoles d’adaptation sont proposés par Siemens.

Échantillons à tester
Pour obtenir les plasmas, prélever 1 volume de solution de citrate de sodium (0,11 mol/l) avec
9 volumes de sang veineux, et mélanger avec précaution en évitant la formation de mousse.
Centrifuger aussitôt 10 min. à au moins 1 500 x g. Prélever le surnageant en veillant à ne
pas aspirer de plaquettes. Si l’échantillon doit être congelé, centrifuger de nouveau le plasma
prélevé, et congeler rapidement le surnageant dans un récipient en plastique bien fermé.
Stabilité de l'échantillon
15 à 25 °C 4 heures
−20 °C 1 mois
Décongeler les plasmas conservés à −20 °C en 10 minutes à 37 °C, et les tester dans les
2 heures qui suivent.

Réalisation du test
Méthode manuelle:
Porter les tubes à essai à 37 °C avant le début du test.
Schéma de pipetage pour la détermination de PCAT et PCAT/0 :

ProC® Global ProC® Global/FV

PCAT PCAT/0 PCAT PCAT/0

Plasma citraté 100 µl 100 µl 20 µl 20 µl

Plasma exempt de Facteur V de la coagulation - - 80 µl 80 µl
Réactif activateur pour ProC® Global 100 µl - 100 µl -
Tampon pour ProC® Global - 100 µl - 100 µl

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ProC® Global ProC® Global/FV

PCAT PCAT/0 PCAT PCAT/0

Réactif TCA pour ProC® Global 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl

Laisser incuber 3 minutes à 37 °C

Solution de chlorure de calcium (37 °C) 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl

Déclencher le chronomètre ou la chambre de mesure du coagulomètre au moment de

l’addition de la solution de chlorure de calcium, et mesurer le temps de coagulation.
Pour la mesure, toujours utiliser la même combinaison de réactifs et d’appareil que pour
l’étalonnage. Le PCAT et le PCAT/0 de chaque échantillon doivent être mesurés dans une
même série. Si le test est effectué sur un appareil manuel, il est recommandé d’effectuer les
dosages en double.
Exploitation
Afin d’assurer la comparaison possible de résultats obtenus dans plusieurs laboratoires
travaillant avec du matériel différent et donc potentiellement divergents, il est recommandé
de calculer le ratio normalisé (NR). Pour cela, calculer le rapport entre PCAT et PCAT/0, et le
multiplier par un facteur de calibration (FC) correspondant au rapport entre un Plasma
standard humain (SHP) et la valeur de sensibilité (SV) de ce SHP :
NR = (PCAT:PCAT/0)échantillon x FC
FC = SV/(PCAT:PCAT/0)SHP
Le facteur de calibration doit être recalculé tous les mois pour chaque appareil et à chaque
changement de lot de réactif.
Contrôle de qualité interne
Domaine normal : Plasma de contrôle N
Domaine thérapeutique : ProC® Plasma de contrôle
Au début de chaque série de tests, à chaque changement de flacon de réactif et au moins une
fois toutes les 8 heures de travail, introduire deux contrôles (un dans le domaine normal et un
dans le domaine thérapeutique). Traiter les contrôles comme des échantillons de patients. Il
est recommandé à chaque laboratoire de déterminer ses propres domaines de confiance pour
les contrôles. Ceux‑ci correspondent généralement à ± 2 à ± 2,5 déviations standard (s) par
rapport à la valeur moyenne des contrôles. Si les valeurs des contrôles sortent de leur domaine
de confiance respectif, vérifier les contrôles, les réactifs et l’appareil. Avant de rendre des
résultats de patients, il est recommandé de documenter toutes les mesures qui ont été prises
pour déterminer et résoudre le problème. Etablir de nouveaux domaines de confiance à
chaque nouveau lot de réactif ou de contrôle.

Limites du test
Une préactivation des échantillons due à un prélérement d'échantillon incorrect (repérable par
des déviations systématiques par rapport au domaine de référence du PCAT/0) peut entraîner
des résultats erronés. Avec des échantillons congelés, on peut obtenir une sensibilité
diminuée, si les éléments cellulaires n’ont pas été soigneusement éliminés lors de la
préparation du plasma.
Pour le calcul du ratio normalisé, n’utiliser que des échantillons dont le PCAT/0 a été trouvé
inférieur à 60 secondes, sinon l’efficacité du système de la protéine C ne peut être clairement
mesurée. Un allongement du PCAT/0 peut également être dû à la présence d'anticoagulants de
type lupique.
Les échantillons de patients sous anticoagulants oraux sont généralement trouvés en deçà du
seuil de décision, car les traitements aux AVK entraînent notamment une diminution des
activités de protéine C et de protéine S. Les réactifs du ProC® Global contiennent un

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neutralisateur de l’héparine, permettant de tester des échantillons contenant jusqu’à 0,8 U

d’héparine/ml.
La plasmine perturbe la protéine C7. Les échantillons de patients sous traitement fibrinolytique
peuvent donc donner des résultats faussement positifs (temps de coagulation réduits).
Siemens a validé l’utilisation de ces réactifs sur plusieurs analyseurs afin d’optimiser les
performances du produit et répondre à ses spécifications. Les modifications apportées par
l’utilisateur ne sont pas sous la responsabilité de Siemens dans la mesure où elles peuvent
affecter les performances du système et les résultats des dosages. Il est de la responsabilité de
l’utilisateur de valider toutes modifications apportées à ces instructions ou à l’utilisation des
réactifs sur les analyseurs autres que ceux mentionnés dans les protocoles d’application
Siemens ou dans la présente notice d’utilisation.
Les résultats de ce test doivent toujours être interprétés en rapport avec les antécédents
médicaux du patient, les signes cliniques et autres constatations.

Valeurs normales
Le PCAT et le PCAT/0 ont été mesurés sur le BCT® sur des échantillons d’adultes sains, non
porteurs de la mutation du facteur V Leiden. La médiane, le domaine compris entre les valeurs
obtenues des 5ème et 95ème percentiles en secondes, ainsi que les ratios normalisés sont
indiqués dans le tableau. Indépendamment de cela, chaque laboratoire doit établir ses propres
domaines de référence.

ProC® Global ProC® Global/FV

médiane domaine médiane domaine

PCAT (sec) 132 85 - > 200 151 128 - 173

PCAT/0 (sec) 44 35 - 55 78 68 - 91
Ratio normalisé 0,94 0,69 - > 1,56 0,99 0,86 - 1,10
n (nombre d'échantillons) 234 234 243 243

Caractéristiques du test
Précision
Sur le BCT®, on a trouvé pour le ratio normalisé des coefficients de répétabilité (CV intra‑essai)
compris entre 2,2 et 6,6 %, et des coefficients de reproductibilité (CV inter‑essais) compris
entre 1,5 et 8,2 %.
Sensibilité et spécificité
Comme seuil de décision pour la présence de facteur V Leiden ou d’un déficit en protéine C ou
S, il a été déterminé de façon empirique pour le test ProC® Global (sans utilisation d’un plasma
exempt de facteur V de la coagulation) un ratio normalisé de 0,8. Ce seuil de décision permet
avec une grande sensibilité de révéler les différentes modifications évoquées du système de la
protéine C. Une étude clinique a déterminé les données de sensibilité suivantes (données
entre parenthèses indiquant le domaine de confiance à 95 %) : 100 % (94,4 % ‑ 100,0 %)
vis‑à‑vis du facteur V Leiden, 92 % (80,4 – 97,7 %) vis‑à‑vis d‘un déficit en protéine C (activité
< 70 % de la normale), et 89 % (79,7 – 94,7 %) vis‑à‑vis d‘un déficit en protéine S (activité
< 60 % de la normale). Simultanément, ce seuil de décision a donné une spécificité de 79 %
(domaine de confiance à 95 % : 73,7 – 84,5 %) sur des échantillons de donneurs de sang
sains. Dans des cas de déficit symptomatique de protéine S, le test ProC® Global a donné une
sensibilité de 92,3 %, une fois exclus du calcul les cas sans thrombose manifeste8.
Sur des échantillons normaux, une diminution du ratio normalisé peut également être due à
une activité augmentée de facteur V ou VIII, ou encore à la présence d'anticoagulants de type
lupique5. Avec le ProC® Global utilisé en association avec un Plasma exempt de facteur V de la
coagulation, un seuil de décision de 0,7 comme ratio normalisé a donné une sensibilité de

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98 % (domaine de confiance à 95 % : 91,8 – 99,7 %) vis‑à‑vis du facteur V Leiden, et une

spécificité de 99 % (96,4 – 99,7 %).

Littérature
1. Esmon CT. Protein S and protein C ‑ Biochemistry, physiology, and clinical manifestation of
deficiencies. Trends Cardiovasc Med 1992; 2: 214‑9.
2. Dahlbäck B, Carlsson M, Svensson PJ. Familial thrombophilia due to a previously
unrecognized mechanism characterized by poor anticoagulant response to activated
protein C: prediction of a cofactor to activated protein C. Proc Natl Acad Sci USA 1993; 90:
1004‑8.
3. Bertina RM, Koeleman BPC, Koster T, et al. Mutation in blood coagulation factor V
associated with resistance to activated protein C. Nature 1994; 369: 64‑7.
4. Koster T, Rosendaal FR, de Ronde H, et al. Venous thrombosis due to poor anticoagulant
response to activated protein C: Leiden thrombophilia study. Lancet 1993; 342: 1503‑6.
5. Kraus M, Noah M, Fickenscher K. The PCAT - a simple screening assay for assessing the
functionality of the protein C anticoagulant pathway. Thromb Res 1995; 79: 217-22.
6. Kraus M, Zander N, Fickenscher K. Coagulation assay with improved specificity to factor V
mutants insensitive to activated Protein C. Thromb Res 1995; 80: 255-64.
7. Váradi K, Philapitsch A, Santa T, Schwarz HP. Activation and inactivation of human protein
C by plasmin. Thromb Haemost 1994; 71: 615-21.
8. Gemmati D, Serino ML, Tognazzo S, et al. The reduced sensitivity of the ProC Global test in
protein S deficient subjects reflects a reduction in the associated thrombotic risk. Blood
Coag Fibrinolysis 2001, 12:691-7.

Définition des symboles

Ne pas réutiliser YYYY-MM-DD Utiliser jusque

LOT Code du lot REF Référence du catalogue

Attention voir notice d’instructions Fabricant

Mandataire dans la Communauté

EC REP Contenu suffisant pour « n » tests
européenne

Risques biologiques IVD Dispositif médical de diagnostic in vitro

Limites de température Consulter les instructions d’utilisation

Non stérile Marquage CE

CONTENTS Contenu Volume de reconstitution

Maintenir hors de portée de la lumière

LEVEL Niveau
du soleil et de la chaleur

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BCT et ProC sont des marques commerciales de Siemens Healthcare Diagnostics.

PROTAC est une marque commerciale de Pentapharm.

© 2008 Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH.

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