Université Mustapha Ben Boulaid Batna-2

Faculté : SNV
Département : Microbiologie/Biochimie
Spécialité : Microbiologie (L3)
TD2 d’enzymologie
Exercice01 : La créatine phosphokinase (CPK) est une enzyme présente dans les cellules
musculaires. Elle catalyse la réaction suivante:
Créatine + ATP <------> Créatine-phosphate + ADP
1- La purification de la CPK à partir du muscle squelettique de lapin a été faite selon le protocole
suivant:

- Calculer le taux de purification pour tous les extraits par rapport à E1

- La dernière étape est-elle indispensable ?
Exercice 02 : Dans les globules rouges humains, l’activité spécifique de lactico-déshydrogénase
normale est de 4 UI /ml de globules rouges à 25 °C.
Quel sera le temps nécessaire à la transformation de 264 μg d’acide pyruvique (PM : 88) en acide
lactique par 0,5 ml de globules rouges à cette même température.
Expliquer brièvement votre réponse.

Solution exercice 01 :

Extrait Etapes Protéine Activité Activité Rendement% Indice de

totale(mg) enzymatique spécifique purification
totale(UI) totale (UI/mg
E01 40000 189000 4.725 100 01
E02 9050 179000 19.77 94.7 4.18
E03 3250 143000 44 75.66 3.31
E04 2970 138000 46.46 73.01 9.83
E05 2480 129000 52.016 68.25 11.008
E 06 2150 112500 52.325 59.25 11.05

-Calcul du taux ( indice) de purification :

On calcule le taux de purification( consulter le tableau de purification chapitre 03) selon

la formule suivante : indice de purification =

1
NB : l’extrait initial est toujours l’extrait de départ qui correspond dans notre cas à l’extrait 01
( E01)

Les extraits obtenus sont les suivants :( E02 ; E03 ; E04 ; E05 et E06).

*Pour calculer le taux de purification , on doit en premier lieu calculer l’activité spécifique(AS) de
l’enzyme dans chaque extrait( E01,E02 ;E03 ;E04 ;E05 et E06) selon la formule suivante( voir
chapitre 03)

AS =

AS dans l’extrait E01(extrait initial)= 189000/40000 = 4.725 UI/mg ou μ mole/min/mg

AS E02 = 179000/ 9050 = 19.77 UI/mg ou μ mole/min/mg
AS E03 = 143000/3250 = 44 UI/mg ou μ mole/min/mg
AS E04 = 138000/2970 = 46.46 UI/mg ou μ mole/min/mg
AS E05 = 129000/2480 = 52.016 UI/mg ou μ mole/min/mg
AS E06 = 112500/2150 = 52.325 UI/mg ou μ mole/min/mg

Indice de purification de E01 = E01/E01 = 4.725/4.725 = 01 fois

Indice de purification de E02 = E02/E01 = 19.77/4.725= 4.18 fois
Indice de purification de E03 = E03/E01 = 44/4.725 = 3.31 fois
Indice de purification de E04 = E04/E01 = 46.46/4.725 = 9.83 fois
Indice de purification de E05 = E05/E01 = 52.016/4.725= 11.008 fois
Indice de purification de E06 = E06/E01 = 52.235/4.725= 11.05 fois

Calcul du rendement :
Pour déterminer que la dernière étape est nécessaire ou non on doit calculer aussi le
rendement des différents extraits selon la formule suivante ( voir chapitre 03) :
Rendement =

Rendement de l’extrait E01 = E01/E01 = 18900/189000 = 100%

Rendement de l’extrait E02 = E02/E01 = 17900/189000 = 94.7%
Rendement de l’extrait E03 = E03/E01 = 143000/189000 = 75.66%
Rendement de l’extrait E04 = E04/E01 = 138000/189000 = 73.01%
Rendement de l’extrait E05 = E05/E01 = 129000/189000 = 68.25%
Rendement de l’extrait E06 = E06/E01 = 112500/189000 = 59.25%
NB : ces résultats sont enregistrés sur le tableau ci-dessus

A partir de ces résultats on constate que les indices de purification les plus élevés sont ceux
des extraits E05 et E06 qui possède le même indice de purification (E05 = E06 = 11 fois
pas d’augmentation d’indice de purification)

2
et on constate ainsi la perte de protéine lors de l’étape 06 (rendement = 59.25%) par rapport
à l’étape 5 (rendement = 68.25%) qui nous permet de conclure que la dernière étape n’est
pas nécessaire.

Solution exercice 02 :

On calcule l’activité spécifique du lactate déshydrogénase(LDH) dans 0.5 ml de GR

4UI/ml de globule rouge à 25C°= 4 μ mole/min/ml
On a 4UI/ml = μ M

4μM 1ml
X μM 0.50 ml

X = 4x0.5/1 = 2 μM
Donc l’activité spécifique de l’enzyme LDH dans 0.5 ml est de l’ordre : 2 μM/min
- pour déterminer le temps nécessaire de transformation de l’acide pyruvique en acide lactique
par 0.5 ml de globule rouge, On doit calculer en premier lieu le nombre de mole de l’acide
pyruvique transformé par LDH
Nombre de moles = masse en g/poids moléculaire
= 264x10-6 g/ 88
= 3x10-6 mole/L = 3 μM

Donc à t° 25 C° , 0.5 ml de GR transforme 3 μ M en x minutes

On a

2μM transformés en 1 min(60S)

3 μM transformés en x min( secondes)

X= 3x60/ 2 = 180/2 = 90 secondes ( 1min 30secondes)