Département de Microbiologie et de Biochimie Niveau : Master 2 Microbiologie Appliquée

Corrigé type de l’examen de ASN S1 2019-2020

Exercice1 : (6 pts)
- Définir un métabolite secondaire. (1.5 pts)
- Sont des molécules organiques qui ont généralement une fonction extrinsèque qui affecte
principalement d’autres organismes en dehors du producteur. Les métabolites secondaires ne sont
pas essentiels à la survie, mais augmentent la compétitivité de l'organisme dans son
environnement
- Sont des composés chimiques synthétisés par les plantes (c.-à-d. des composés phytochimiques)
qui assurent des fonctions non essentielles, de sorte que leur absence n'est pas létale pour
l'organisme
- Quels sont les rôles biologiques des métabolites secondaires ? (1.5 pts)

- Molécules d’intérêt pharmacologique, agronomique et cosmétique

- Marquent l’identité d’une espèce, familles ou genres donc des outils moléculaires pour
l’exploration du monde vivant
- Médiateurs chimiques pour la compréhension des interactions entre les organismes vivants dans
les écosystèmes.
- Attraction des pollinisateurs
- Protection de l’attaque des pathogènes ou des herbivores
- Ils participent à des réponses allélopathiques (compétition entre les plantes pour la ……
- La régulation de la croissance.

- Citer les principaux métabolites secondaires.

o Les composés phénoliques (1pt)
o Les composés terpéniques (1pt)
o Les alcaloïdes (1pt)

- Dessiner, dans un schéma représentatif, les principales voies métaboliques des terpènes et des
polyphénols. En expliquant les différentes étapes constituant chaque voie métabolique.

(1pt)

- Biosynthèse des terpènes (1pt)

Le précurseur universel de tous les terpènes est l’acide mévalonique obtenu après condensation
enzymatique de trois molécules d’acétyl CoA. Sa phosphorylation suivie d’une décarboxylation aboutie
à l’unité isoprénique de base : le pyrophosphate d’isopentényle (IPP).
 - Biosynthèse des polyphénols (1pt)

La majeure partie des composés aromatiques est constituée de la famille des phényl propanoides,
qui dérivent de la phénylalanine ou de la tyrosine. La désamination de cet acide aminé par une enzyme
clé: la phénylalanine ammonia-lyase (PAL), conduit à l’acide cinnamique par la réaction suivante.

La seconde voie, voie du MEP (nommée voie indépendante du mévalonate) est spécifique de certaines
bactéries et plantes. Elle débute par la condensation d’une unité pyruvate (C3) avec une unité
glycéraldéhyde-3-phosphate (C3) et conduit au méthyl erythritol phosphate (MEP) un composé
intermédiaire en C5. Plusieurs étapes enzymatiques conduisent ensuite à la synthèse de l’IPP.

Exercice II (6pt)
Après broyage d'un gramme de yaourt dans neuf millilitres d'eau stérile, il effectue une galerie de dilutions
au dixième, ensemence des boites de Petri avec 0.2 ml de chaque dilution et obtient les résultats suivants

:
À l'aide de ces résultats, calculez la concentration cellulaire du yaourt (en Cell. / g).
On ne considère que les valeurs comprises entre 30 et 300 colonies, qui correspondent aux comptages des
boites inoculées par 0.2 ml de la solution dans le tube "-5" (0.5pt)
Moyenne du nombre de colonies : 100 colonies
Concentration cellulaire dans la solution "-5" : 100 / 0.2 = 500 Cell / ml (0.5pt)
Concentration cellulaire dans l'échantillon "Mère" : 500 x 105 = 5.107 Cell. / ml (0.5pt)
L'échantillon "Mère" est constitué d'un gramme de yaourt et de 9 ml d'eau.
L'échantillon " Mère " a donc pour volume 9 + 1 = 10 ml et le yaourt est donc dilué 10 fois dans
l'échantillon Mère.
La concentration cellulaire dans le yaourt est donc : 5.108 Cell. / ml, soit 5.108 Cell. / g (0.5pt)
- Par comptage à la cellule de Thoma sur le tube (2),
Volume dans lequel les 8 cellules ont été comptées : 16 x (0.05 x 0.05 x 0.1) = 0.004 mm3 (0.5pt)
 Concentration cellulaire dans la solution du tube(2) : 8 / 0.004 = 2000 Cell. / mm3, soit 2.106 Cell/ ml
(0.5pt)
Concentration cellulaire dans l'échantillon "direct" : 2.106 x 102 = 2.108 Cell. / ml (0.5pt)
Concentration cellulaire dans le yaourt (même raisonnement que précédemment) : 2.109 Cell. / g
(0.5pt)
Que suggère la comparaison des résultats obtenus par les deux méthodes de dénombrement ?
(1pt)
Lorsque la méthode de comptage direct est utilisée, on obtient une concentration cellulaire supérieure
à celle obtenue par la méthode des boites. La méthode des boites ne permet de comptabiliser que les
cellules vivantes, les cellules mortes ne pouvant donner naissance à des colonies. En revanche, le
comptage direct prend en compte les cellules vivantes et les cellules mortes.
Calcul : IL y avait donc (2.109 - 5.108) / 2.109 = 75 % de cellules mortes dans le yaourt (0.5 pt)
3- Comment vous y prendriez-vous pour démontrer que les bactéries du yaourt sont Gram
positives
Par coloration violette (0.5 pt)
Exercice 3:
Dessiner l’allure du graphe EI(%)= f (concentrations)
EI % pouvoir de piègeage des radicaux libres DPPH
Concentration 80.0
Absorbance EI %
(mg/L) 70.0

12.5 0.972 13.2 60.0 (1pt)

50.0
25 0.903 19.4
40.0
50 0.812 27.5
30.0
100 0.463 58.7
20.0
200 0.307 72.6 10.0

400 0.267 76.2 0.0

0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420
1.12 (1pt)

- Déterminer les valeurs EC50 du produit.

IC50= 80g/l (1pt)
Exercice 4: (4pts)
Déterminer à quel type de métabolites secondaires appartiennent t-ils ces produits naturelles

1-Polyphénols 2- Alkaloides 3- Polyphénols 4- Terpène

(1pt) (1pt) (1pt) (1pt)

Dr. Kheniche Abdelhakim