ACTIVITES ANALYTIQUES Référence : FOR-PR18-AA-01

Formulaire Version : 01
Dossier de validation/vérification des méthodes d’analyse Date d’app : 20/06/2023
microbiologiques des aliments Page : 1/ 6

Tableau des matières :

1- Introduction
2- Matrice
3- Matériaux utilisés
4- Echantillonnage et analyse
5- Conclusion finale

Type de validation : Vérification secondaire d’une méthode de référence

Désignation de la méthode : Méthode horizontale pour le dénombrement des

bactéries lactiques mésophiles, technique par comptage des colonies à 30 degrés

Référence de la méthode : ISO 15214 :1998

Technique : Dilution - ensemencement sur milieu de culture solide - dénombrement

Domaine d'application : Microbiologie des aliments : produits destinés à la

consommation humaine, l’alimentation animale et aux échantillons d’environnement.

Période de validation de la méthode : du 02/03/2022 Jusqu’à 20/03/2022

Clô turé le 25/03/2022

Date et Visa de responsable de département :

Ce document ne peut être reproduit ou diffusé en externe sans autorisation préalable d’ANOUAL LABS.
 ACTIVITES ANALYTIQUES Référence : FOR-PR18-AA-01
Formulaire Version : 01
Dossier de validation/vérification des méthodes d’analyse Date d’app : 20/06/2023
microbiologiques des aliments Page : 2/ 6

1/ Introduction :
Ce dossier répond aux exigences de la procédure de validation des méthodes d’analyses PR-AA-18.
La méthode appliquée étant une méthode de référence examinée, la validation a été réalisée de
manière secondaire pour vérifier la capacité du laboratoire d’appliquer cette méthode.

2/ Matrice :
Vérification de la mise en œuvre :

Catégorie Matrice

Produits carnés Viande hachée

Vérification des matrices :

On choisit des matrices difficiles, chacune parmi une catégorie d’aliment différente appartenant à
notre domaine d’application, en plus d’une matrice d’aliment pour animaux (voir le tableau ci-
dessous).

Catégorie Matrice Caractéristique difficile

Produits carnés Viande hachée Charge microbienne
Lait cru et produits laitier Lait cru Charge microbienne
Produits de la mer Sardine congelée Charge microbienne
Produits pâ tisserie Cake Faible activité en eau
Produit frais et fruits Salade variée Acidité
Aliments pour animaux et
Farine de poisson Faible activité en eau
animaux de compagnie
Ecouvillon prélevé à partir
Echantillons d’environnement -
d’une surface alimentaire

3/ Matériaux utilisés :
 Diluant Bouillon eau peptonée tamponnée (EPT)
 Diluant Bouillon Eau peptonnée au TWEEN 80
 Souche de référence Lactococcus lactis subsp. lactis WDCM 00016
 Gélose pour dénombrement MRS
 Matériel courant de laboratoire

4/ Echantillonnage et analyse :
Généralités :
Puisque c’est une méthode de référence non validées, seule la vérification des matrices (d’aliments)
est effectuée, car il n’existe pas de données de validation disponibles pour la comparaison.
La vérification se concentre sur les matrices (d’aliments) qui font partie du domaine d’application
de la méthode de référence et du domaine d’application du laboratoire :
Matrice (d’aliment) difficile parmi chaque catégorie (d’aliment) revendiquée dans le domaine d’ap-
plication de la méthode de référence, qui est également une catégorie (d’aliment) soumise à essai
dans le domaine d’application du laboratoire
Détermination du biais estimé (ebiais) :
Vérification des matrices :

Ce document ne peut être reproduit ou diffusé en externe sans autorisation préalable d’ANOUAL LABS.
 ACTIVITES ANALYTIQUES Référence : FOR-PR18-AA-01
Formulaire Version : 01
Dossier de validation/vérification des méthodes d’analyse Date d’app : 20/06/2023
microbiologiques des aliments Page : 3/ 6

Contamination artificielle des matrices à trois niveaux d’ensemencement dans la suspension mère.
 Un essai de la suspension d’inoculum sans matrice d’aliment.
 Analyse d’un échantillon non ensemencé (Contrô le négatif).
 3 niveaux de contamination : Analyse d’un échantillon en double (contaminé artificiellement par
1mL) pour chaque matrice ;

Le tableau suivant présente les résultats obtenus lors des tests, le détail des analyses dans les fiches
de paillasse :

eBiais: diffé-
Viande hachée Pour comparaison rence absolue
entre les résul-
Résultat
Résultat Résultat Ma- tats de la ma-
Suspen-
moyen Ma- trice trice (d’aliment)
sion
trice (d’ali- (d’aliment)
Niveau Resul- d’inoculum
Resultats ment) artifi- artificielle- artificiellement
Essais de l'ino- tats en [sans ma-
contaminée par
en log ciellement ment conta-
culum UFC/g trice d’ali-
contaminée minée prise d’essai et
ment)]
(log10 ufc/g (log10 ufc/ ceux de la sus-
(log10
ou ml) prise d’essai) pension d’inocu-
ufc/ml)
lum
3,9637878
essai 1
9200 3
103 3,95 4,95 5,06 0,11
3,9395192
essai 2
8700 5
4,8808135
essai 1
104 76000 9 4,94 5,94 6,86 0,08
essai 2 100000 5
5,8976270
essai 1
790000 9
105 5,93 6,93 7,80 0,13
5,9637878
essai 2
920000 3

Lait liquide Pour comparaison eBiais: diffé-

rence absolue
Résultat entre les résul-
Résultat Résultat Ma-
Suspension tats de la ma-
moyen Ma- trice trice (d’aliment)
trice (d’ali- (d’aliment)
Niveau Resul- d’inoculum
Resultats ment) artifi- artificielle-
Essais de l'ino- tats en [sans ma- artificiellement
en log ciellement ment conta-
culum UFC/g trice d’ali- contaminée par
contaminée minée prise d’essai et
ment)]
(log10 ufc/g (log10 ufc/ ceux de la sus-
(log10
ou ml) prise d’essai) pension d’inocu-
ufc/ml)
lum
3,8450980
essai 1
7000 4
103 3,81 4,81 4,8 0,09
3,7708520
essai 2
5900 1
4,6901960
essai 1
49000 8
104 4,63 5,63 5,74 0,11
4,5682017
essai 2
37000 2

Ce document ne peut être reproduit ou diffusé en externe sans autorisation préalable d’ANOUAL LABS.
 ACTIVITES ANALYTIQUES Référence : FOR-PR18-AA-01
Formulaire Version : 01
Dossier de validation/vérification des méthodes d’analyse Date d’app : 20/06/2023
microbiologiques des aliments Page : 4/ 6

5,6434526
essai 1
440000 8
105 5,71 6,71 7 0,29
5,7781512
essai 2
600000 5

Sardine congelé Pour comparaison eBiais: diffé-

rence absolue
Résultat entre les résul-
Résultat Résultat Ma- tats de la ma-
Suspen-
moyen Ma- trice trice (d’aliment)
sion
trice (d’ali- (d’aliment)
Niveau Resul- d’inoculum
Resultats ment) artifi- artificielle-
Essais de l'ino- tats en [sans ma- artificiellement
en log ciellement ment conta-
culum UFC/g trice d’ali- contaminée par
contaminée minée prise d’essai et
ment)]
(log10 ufc/g (log10 ufc/ ceux de la sus-
(log10
ou ml) prise d’essai) pension d’inocu-
ufc/ml)
lum
essai 1 10000 4
103 3,95 4,95 4,82 0,13
essai 2 7800 3,8920946
4,9637878
essai 1
104 92000 3 4,98 5,98 6,15 0,17
essai 2 100000 5
120000 6,0791812
essai 1
0 5
105 6,01 7,01 7,08 0,07
5,9493900
essai 2
890000 1

Cake Pour comparaison eBiais: diffé-

rence absolue
entre les résul-
Résultat Résultat Ma- Résultat tats de la ma-
moyen Ma- trice Suspension trice (d’ali-
trice (d’ali- (d’aliment) d’inoculum ment)
Niveau Resul-
Resultats ment) artifi- artificielle- [sans ma- artificiellement
Essais de l'ino- tats en
en log ciellement ment conta- trice d’ali- contaminée par
culum UFC/g
contaminée minée ment)] prise d’essai et
(log10 ufc/g (log10 ufc/ (log10 ceux de la sus-
ou ml) prise d’essai) ufc/ml) pension d’inocu-
lum
3,7781512
essai 1
6000 5
10 3
3,84 4,84 4,73 0,11
3,9084850
essai 2
8100 2
essai 1 78000 4,8920946
104 4,7781512 4,84 5,84 6,10 0,26
essai 2
60000 5

Ce document ne peut être reproduit ou diffusé en externe sans autorisation préalable d’ANOUAL LABS.
 ACTIVITES ANALYTIQUES Référence : FOR-PR18-AA-01
Formulaire Version : 01
Dossier de validation/vérification des méthodes d’analyse Date d’app : 20/06/2023
microbiologiques des aliments Page : 5/ 6

5,9542425
essai 1
105 900000 1 5,92 6,92 6,81 0,11
essai 2 780000 5,8920946

Salade variée Pour comparaison eBiais: différence ab-

Résultat solue entre les ré-
Résultat moyen Résultat Ma- Suspension sultats de la matrice
Matrice (d’ali- trice (d’aliment)
ment) artifi- (d’aliment) d’inoculum artificiellement
Niveau de Resultats Resultats en contaminée par
Essais ciellement artificiellement [sans ma-
l'inoculum en UFC/g log
contaminée contaminée trice d’ali- prise d’essai et ceux
(log10 ufc/g ou (log10 ufc/ ment)] de la suspension
ml) prise d’essai) (log10 d’inoculum
ufc/ml)
4,3424226
essai 1
22000 8
103 4,49 5,49 5,75 0,26
4,6434526
essai 2
44000 8
5,7708520
essai 1
590000 1
104 5,71 6,71 6,87 0,16
5,6434526
essai 2
440000 8
6,7993405
essai 1
6300000 5
105 6,82 7,82 7,95 0,13
6,8450980
essai 2
7000000 4

Farine de poisson Pour comparaison eBiais: diffé-

rence absolue
Essais Niveau Resul- Resultats Résultat Résultat Ma- Résultat
tats en en log moyen Ma- trice Suspen- entre les résul-
de l'ino- tats de la ma-
culum UFC/g trice (d’ali- (d’aliment) sion
ment) artifi- artificielle- d’inoculum trice (d’aliment)
ciellement ment conta- [sans ma-
contaminée minée trice d’ali- artificiellement
(log10 ufc/g (log10 ufc/ ment)] contaminée par
ou ml) prise d’essai) (log10 prise d’essai et

Ce document ne peut être reproduit ou diffusé en externe sans autorisation préalable d’ANOUAL LABS.
 ACTIVITES ANALYTIQUES Référence : FOR-PR18-AA-01
Formulaire Version : 01
Dossier de validation/vérification des méthodes d’analyse Date d’app : 20/06/2023
microbiologiques des aliments Page : 6/ 6

ufc/ml) ceux de la sus-

pension d’inocu-
4,1760912
essai 1 15000
6
103 4,16 5,16 5,30 0,14
4,1461280
essai 2 14000
4
4,9637878
essai 1 92000
3
104 4,95 5,95 5,62 0,33
4,9294189
essai 2 85000
3
5,6532125
essai 1
450000 1
105 5,69 6,69 6,36 0,29
5,7323937
essai 2
540000 6

5/ Conclusion final :
Valeurs biais estimé (ebiais) obtenues d’après l’étude de validation
Matrices Niveau Niveau Niveau Limite Résultat de
inférieur intermédiair supérieur d’acceptabilité vérification
e
Viande hachée 0,11 0,08 0,13 < 0,5 log10 Conforme
Lait cru 0,09 0,11 0,29 < 0,5 log10 Conforme
Sardine congelé 0,13 0,17 0,07 < 0,5 log10 Conforme
Cake 0,11 0,26 0,11 < 0,5 log10 Conforme
Salade 0,26 0,16 0,13 < 0,5 log10 Conforme
Farine de poisson 0,14 0,33 0,29 < 0,5 log10 Conforme

 Les résultats montrent que le biais estimé est ≤ 0,5log10 par niveau de contamination, ce qui signifie
que le laboratoire est capable d’appliquer correctement la méthode.

Ce document ne peut être reproduit ou diffusé en externe sans autorisation préalable d’ANOUAL LABS.