Support de formation en fluorimétre

Le principe d’analyse histamine :

Cette méthode est procède par l’extraction de l’histamine , pour une solution de
l’acide trichloracétique puis fixée sur une colonne remplie d’une résine échangeuse
d’ions et éluée par l’acide chlorhydrique, le dosage est effectué par fluorimétre prés
addition d’ortho-phtalaldéhyde (OPA) .

1er chapitre : préparation de réactif

Tous les réactifs doivent être de qualité analytique. L’eau utilisée doit être distillée.
 -Solution d’acide trichloré acétique (10%) TCA.
 -Tampon acétate 0,2 N préparé en dissolvant 8,2g d’acétate de Sodium anhydre
dans quelques ml d’eau, en complétant un 1litre avec de l’eau.

Il faut ajuster le PH avec l’acide acétique à 4,62.

 -Solution d’acide chlorhydrique 0,2 N

 -Solution d‘acide chlorhydrique 0,7 N
 -Solution d’hydroxyde de Sodium 1N
 -Solution d’ortho-phtalaldéhyde (OPA) à 1g / 100 ml de méthanol.
2eme chapitre :préparation de la résine et colonnes

Mettre en suspension 1,2g à 1.7g de résine Amberlite CG 50 dans la quantité

nécessaire et suffisante de tampon acétate pour maintenir le PH à 4.62. Transférer
dans la colonne. La hauteur de la colonne doit être de 5cm.
3eme chapitre : préparation de solutions mère et fille

La Solution mère d'histamine1000 à 1 g/L

Dans une fiole jaugée d'un litre son introduite 0,1672 g d'histamine, et compléter au
trait de jauge avec HCL 0,1 N.

Solution fille (10 ppm). Introduire 1 ml de la solution mère dans une fiole jaugée de
100 ml et compléter au trait de jauge par l'HCL 0,1 N.

Les solutions pour étalonnage :

45ppm : 0.5 ml solution fille +HCL 0.2 dans fiole de 100 ml

90 ppm : 1ml ml solution fille +HCL 0.2 dans fiole de 100 ml

180 ppm : 2ml ml solution fille +HCL 0.2 dans fiole de 100 ml
270 ppm : 3ml ml solution fille +HCL 0.2 dans fiole de 100 ml

Mode de préparation des solutions étalons

4émé chapitre : préparation d’histamine (l’échantillon de poisson):

Prélever environ 1 kg de poisson du bas d’une caisse Broyer la chaire du poisson

Peser un échantillon de 5g du poisson haché.
Ajout de 45ml de TCA à 10 % Homogénéiser dans un homogénéisateur pendant
2min, puis Filtrer sur papier filtre.
Dans un bécher placer 20ml de tampon acétate et ajouter 0,2ml d’extrait TCA,
Transfert sur la colonne
Laver le bécher avec 30ml de tampon acétate
Laver la colonne avec 100ml de tampon acétate
Eliminer les solutions de lavage
Eluer l’histamine de colonne avec 20ml d’acide chlorhydrique 0,2N (Hcl).
 Mesure de l’histamine :
Transférer 2ml de l’éluât dans un tube et ajouter 1ml de NoaH 1N, en agitant
après chaque addition, et on ajoute 0,1ml d’OPA à 1%, après exactement 3min et
demi, ajouter 2ml d’Hcl 0,7N.

On met la solution de l’histamine dans le tube de mesure, et on fait la lecture dans la

pareille Fluorométer.

5eme chapitre :la courbe d’étalonnage

Voir les fiches joint de la courbe d’étalonnage TEST01 et TEST02.

 Fiche de présence
nom et prénom Fonction Signature

Réalisé par :

Adil AHEJJAM