UNIVERSITE CHOUAIB DOUKKALI

FACULTE DES SCIENCES

EL JADIDA
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DEPARTEMENT DE CHIMIE

Master CAQ
TP : Thymoquinone

Réalisé par : MAKBOUL Abdelghani

ERRIZQI Hamza
ESSAOUI Hamid

Encadrée par : Mr. A. MOUZDAHIR

Année Universitaire 2020/2021

Table des matières
Introduction ....................................................................... 3
I-Sources de thymoquinone .............................................. 4
II-isolation ........................................................................ 4

• Principe.............................................................................. 4
• Méthode ............................................................................. 5
III- Purification ................................................................. 7
IV-Les spectres :................................................................ 9
V-Questionne ................................................................... 14
Conclusion ....................................................................... 16

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 Introduction

Thymoquinone, est une molécule de monoterpène est chimiquement connue sous le nom de 2-
méthyl-5-isopropyl-1, 4-benzoquinone. Il est abondamment présent dans les graines de Nigelle
sativa L. qui est populairement connu sous le nom de cumin noir ou de graines noires et appartient à
la famille Renonculacée. Un grand nombre d’études ont révélé que la thymoquinone est le
constituant actif majeur dans l’huile de N. sativa ce constituant est responsable de la majorité des
propriétés pharmacologiques. Les activités organo- protective salutaires de thymoquinone dans les
modèles animaux expérimentaux de différentes maladies humaines sont attribuées aux propriétés
anti-oxydantes et anti-inflammatoires puissantes. Thymoquinone a également été montré pour
modifier de nombreuses voies moléculaires et de signalisation dans de nombreuses maladies
inflammatoires et dégénératives, y compris le cancer. Thymoquinone a été rapporté pour posséder
la lipophilicité puissante et la biodisponibilité limitée et montre la sensibilité de lumière et de
chaleur. Au total, ces propriétés physicochimiques encombrant la formulation réussie pour la
livraison du médicament sous forme de dosages oraux et restreignent le développement
pharmaceutique. Dans un passé récent, de nombreux efforts ont été entrepris pour améliorer la
biodisponibilité pour l’utilisation clinique en manipulant les paramètres physicochimiques. La
présente revue visait à fournir des informations sur les caractéristiques physicochimiques, la
pharmacocinétique et les méthodes pour promouvoir le développement pharmaceutique et
approuver l’utilisation clinique du QT à l’avenir en surmontant les obstacles physicochimiques
associés. Il énumère également brièvement les cibles pharmacologiques et moléculaires de la
thymoquinone ainsi que les propriétés pharmacologiques dans diverses maladies et le mécanisme
moléculaire sous-jacent. Bien que, un nombre convaincant d’études expérimentales sont
disponibles, mais les études humaines ne sont pas disponibles avec la thymoquinone en dépit de la
longue histoire de l’utilisation du cumin noir dans différentes maladies. Ainsi, les études cliniques
comprenant des études pharmacocinétiques et des études de toxicité réglementaire sont nécessaires
pour encourager le développement clinique de la thymoquinone.

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I-Sources de thymoquinone
N. sativa dont les graines communément appelées cumin noir sont la principale source naturelle de
TQ. Outre la famille des Renonculacées, la présence de QT dans plusieurs autres genres de la
famille des Lamiacées, y compris Agas tache, Coridothymus, Monarda, Mosla, Organum,
Saturaient Thymus, a également été signalée. Il a également été trouvé dans le genre Tétralines, et
sous forme de glycoside dans les genres Cupressus et Juniper de la famille des Cupressacées. Les
traces de QT ont également été trouvées dans nigelle arvensis graines. TQ dans de nombreuses
espèces végétales est présent sous des formes dimériques et réduites telles que la dithymoquinone
(DTQ) et la thym hydroquinone (TQ), la seconde étant considérée comme un composé avec des
activités pharmacologiques potentielles, y compris antibactérienne, antifongique. Anti-
inflammatoire, anti-oxydant, et inhibiteur de cholinestérase d’acétyle. La présence de QT dans
diverses parties des plantes ainsi que dans leur famille et leur espèce sont fournies dans le tableau.

Tableau 1. La teneur en thymoquinone dans différentes plantes.

II-isolation
Principe
La thymoquinone est d’abord obtenue comme composant d’une huile essentielle obtenue par
distillation à la vapeur d’huile de graines noires, puis extraite du distillat et enrichie deux fois par
chromatographie de colonne. Il est finalement purifié par la sublimation dans le vide. La substance
qui en résulte est cristalline, jaune et son point de fusion est conforme à la valeur de la littérature.

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 Méthode
L'huile de graine noire est une huile grasse, c'est-à-dire qu'elle se compose presque entièrement de
triglycérides qui, en pressant les graines de carvi noir, sont expulsées et collectées. La quantité
d'huile essentielle trouvée dans l'huile de graine noire est d'environ 0,5 à 1%. De cela, environ un
tiers est la thymoquinone, qui donne à l'huile de graines noires sa couleur jaune.

La pression de vapeur de la thymoquinone (C₁₀ H₁₂ O₂; M 164,2 g × mol − 1), qui par rapport à
l'huile grasse, est petite, est suffisamment élevée à 100 ° C pour la rendre volatile à la vapeur. La
thymoquinone est également suffisamment hydrophobe pour ne pas être retenue par l'eau par trop
de liaisons hydrogène. En revanche, la pression de vapeur d'un triglycéride (MW 850 g × mol − 1 si
l'on suppose qu'il contient trois acides gras en C18) même à 100 ° C est beaucoup trop faible, pour
être de la vapeur volatile. Depuis entre les principaux composants de l'huile grasse (environ 99%) et
le composant mineur thymoquinone, les seules interactions sont des forces de van der Waals faibles,
l'huile grasse ne peut pas retenir la thymoquinone qui y est dissoute. Vapeur à env. 100 ° C peut
donc transporter la thymoquinone dans un azéotrope.

Le défi expérimental réside dans l’exécution technique de la distillation de telle sorte que ni le
danger ne se présente ni un accident ne se produit.

En principe, différentes précautions sont appropriées. Comme le point d’ébullition de l’eau est
atteint, l’huile de graines noires ne doit pas être autorisé à former une couche fermée qui nage sur
l’eau. Si cela devait se produire et que l’eau était mise à ébullition par le chauffage d’en bas,
puisque sa vaporisation serait empêchée par l’huile, l’eau surchaufferait. En atteignant un certain
point, l’eau surchauffée se vaporiserait de façon explosive. Il est à craindre que le choc qui en
résulte pourrait provoquer l’huile chaude et l’eau à jaillissant ou même que l’appareil éclate. Cela
peut être mieux empêché par le passage de vapeur produite à l’extérieur (voir photographie de
l’appareil) à travers un large tube de livraison en verre. Ceci produit une convection vigoureuse
dans le flacon qui mélange complètement l’eau et l’huile, de sorte qu’une émulsion chaude et
tourbillonnante se forme. Si la vapeur ne peut pas être produite Exeter- Nelly et un processus plus
simple est nécessaire qui ne nécessite que de l’eau bouillante et de l’huile ensemble dans un flacon,
alors le mélange d’huile et d’eau doit être vigoureusement agité. Pour cela, un agitateur de lame
CPG est approprié, mais pas un agitateur magnétique, ce qui ne serait pas assez efficace.

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Fig. 1 : Un fruit noir de carvi est une capsule grande et gonflée composée de trois à sept follicules unis.

Fig. 2 : Chaque capsule contient des graines noires nu-mérous qui peuvent être utilisées comme épice.

L’appareil utilisé ici (photographie de la figure 4 montre la distillation des fleurs de camomille) a la
construction générale suivante (par laquelle la taille des flacons peut être changée).

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Gauche : générateur de vapeur chauffé électriquement, entrée de puissance 750 Watt, taille de
flacon 2 L, rempli de 1 - 1,5 L d’eau distillée, reliant tube de polyéthylène. Tous les tubes sont
sécurisés avec des clips jubilaires.

Milieu à gauche : Flacon de sécurité, flacon de fond rond de 2 L, relié comme une bouteille de
lavage au gaz. La fonction du flacon est que, dans le cas d’un vide partiel (par exemple parce que
l’alimentation du générateur de vapeur est coupée), le liquide qui est aspiré hors du flacon de
distillation est conservé et non aspiré dans le générateur de vapeur. Ce flacon est chauffé
doucement, pour éviter l’accumulation de condensat. Le volume du flacon doit être suffisant pour
pouvoir nécessairement contenir l’ensemble du contenu du flacon de distillation. Étant donné que le
flacon de distillation a un volume de 4 L et est à moitié rempli, le volume de la fiole de sécurité doit
être de 2 L.

Milieu à droite : Flacon de distillation, ici une fiole à trois cous de 4 L avec un délivré- tube Évry
pour la vapeur et toujours la tête avec condenseur Liebig. Le flacon est à moitié rempli de la
substance à distiller (ici fleurs de camomille) et de l’eau. En outre, il est chauffé doucement, pour
éviter une augmentation du niveau de l’eau. Comme décrit ci-dessus, il faut veiller à ce que les
effets de vapeur entrants suffi- convection ceint et la formation d’une émulsion, de sorte que la
surface n’est pas scellée par une couche d’huile. Pendant la distillation, la vapeur traverse le liquide
bouillant et transporte avec elle les composés volatils de vapeur de l’huile essentielle. Dans le cas
de l’huile de graines noires, un flacon à trois cous de 1 L a été utilisé comme flacon de
distillation.

Droite : Récepteur, flacon de 1 L refroidi à l’eau glacée. En raison de la quantité de vapeur utilisée
ici, le condenseur Liebig relativement inefficace ne peut pas refroidir le distillat à température
ambiante. Cependant, un condenseur Liebig est advenu- tagues, quand, comme c’est le cas avec la
thymoquinone, une substance qui est un solide et se solidifie dans le condenseur est impliqué. L’eau
de refroidissement peut être éteinte pendant une courte période, pour permettre à la thymoquinone
de fondre et de couler dans le récepteur. L’eau de refroidissement peut ensuite être allumée à
nouveau.

Matériel de départ

100% huile naturelle de graines noires pressées à froid pure (Nigella sativa) du fournisseur de sport
hippique Loesdau (72406 Bisingen-Hohenzollern), qui est vendu comme aliment pour chevaux, a
été utilisé.

III- Purification

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L’huile de graines noires jaune foncé (300 g) et l’eau (400 g) sont remplies dans le flacon de 1 L à
trois cous de l’appareil de distillation de vapeur décrit ci-dessus. Deux phases se forment,
cependant, comme décrit ci-dessus, lorsque la vapeur est passée à travers une émulsion se forme, à
partir de laquelle le distillat de vapeur est reporté comme un azéotrope. Le distillat (1500 ml) est
collecté. Cristaux de thymoquinone qui lidify dans le condenseur sont dissous dans l’éther
méthylique tert-butyl (100 ml, MTBE). Le distillat est extrait quatre fois dans un entonnoir
séparateur avec MTBE (4×125 ml). La phase aqueuse est jetée et les phases organiques unitaires
séchées sur MgSO4 et filtrées. Le solvant est retiré à la sécheresse sous vide sur un évaporateur
rotatif. Une huile brunâtre et visqueuse contenant des cristaux (991 mg) est obtenue. Un spectre
RMN H1 dans CDCl3 montre que besi des signaux des signaux de thymoquinone dans la région 0,8
- 2,4 ppm, putativement de l’hydrocarboné aliphatiques dans l’huile essentielle, sont à voir.

Fig. 3 : Le carvi noir est une plante à fleurs annuelle, originaire du sud et du sud-ouest Asie.

L’huile essentielle est purifiée en deux étapes chromatographique de colonne séquentielle st

Colonne Chromatographie sept dimensions de la colonne : diamètre = 12 mm ; longueur = phase
stationnaire de 230 mm : gel de silice 60 0,040 – 0,063 mm, phase Merck Mobile : n-hexane/acétate
d’éthyle (15 :1, v/v)

Débit : 10 mL×min−1

Volume de fractions : 10 ml pendant l’élution, un front jaune se sépare clairement des autres
bandes. Les fractions sont collectées et testés optiquement (apparence jaune) et par TLC pour la
thymoquinone. Pour TLC, le même éluant que pour la chromatographie colombe peut être utilisé.
La valeur Rf de thymoquinone est 0.44. Toute thymoquinone contenant fractions sont unies et
l’évacuant enlevé sous vide sur le rota-évaporateur de seigle. Un solide jaune (660 mg) reste, son

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spectre RMN H1 en CDCl3 montre, que la quantité des impuretés aliphatiques a défroissé et une
pureté de 90% peut être estimée. Ce matériau est utilisé pour une autre étape chromatographie
colonne.

Fig. 4 : L’appareil utilisé pour la vapeur distillation de colonne Chromatographie

Les fractions à apparence jaune sont collectées et testées optiquement et par TLC pour le contenu de la
thymoquinone. La fraction 2 - 11 sont unitaires et le solvant enlevé par distillation sous vide. Un solide jaune
reste (490 mg) plus pur que le matériau de départ de l’étape chromatographique à et se compose
principalement de thymoquinone. Un spectre RMN H1 dans CDCl3 montre, cependant, que les traces
d’impuretés doivent encore être enlevées. Pour ce faire, l’échantillon est placé dans un flacon de fond rond
(250 ml) et laissé à température ambiante sous vide fin (pompe à huile, 0,1 mbar). Après cinq heures, les
impuretés se sont évaporées et le thymoquinone n’a sublimé sur le mur de la partie supérieure du flacon.

IV-Les spectres :
Spectre UV-Vis dans l’éthanol

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 Spectre IR dans KBr

Spectre RMN H1 dans CDCl3 à 400 MHz

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Spectre COSY

Spectre NOESY

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Spectre RMN 13C

Spectre HSQC

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 Spectre HMBC

Spectre de masse par IE

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V-Questionne

A-Pourquoi la thymoquinone est-elle jaune ?

Parce que la thymoquinone a une absorbance maximale à ⅄= 440 nm qui corresponde au couleur
bleu, donc le couleur complémentaire est le jaune.

B-Quelle est l’origine du nom de la classe de substances connues sous le nom de quinones ?

La benzoquinone ou quinone (C6H4O2), découverte en 1838 par Wosrerenski, chimiste polonais,

dont on utilise les propriétés rédox dans la technique de développement photographique. C'est l'un
des deux isomères de la cyclohexadienedione. L'orthobenzoquinone est la 1,2-dione, alors que la
parabenzoquinone, est la 1,4-dione.

Le nom « thymoquinone » a été donné pour la première fois en 1871 par Carstanjen du
« Laboratoire Kolbe » à Leipzig. Par un examen approfondi de ses réactions, il a trouvé la bonne
formule moléculaire, mais pas la structure chimique correcte.

C-Habituellement, dans une distillation azéotropique dans le laboratoire un entraineur est utilisé
pour enlever l’eau et non pas comme dans le cas décrit ici, que l’eau elle-même est utilisée comme
l’entraineur. Quel est le nom de l’appareil utilisé ? Donnez un exemple d’entraineur et des exemples
de son utilisation.

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De nombreux composés forment avec l'eau des azéotropes qui interdisent leur déshydratation
complète par distillation. C'est le cas par exemple de l'Ethanol ou la plupart des alcools ou cétones.

Dans la distillation azéotropique, un troisième composé est introduit comme entraineur. Pour être
efficace, il doit former un azéotrope à minimum avec au moins un des composés à séparer.

Ne pouvant être lui-même séparé du composé entrainé par distillation, il doit si possible former
deux phases liquides après condensation pour être recyclé vers le fractionnement. A défaut il devra
être séparé par extraction liquide-liquide.

L'entraineur doit aussi être suffisamment volatil pour être strippé du produit de pied de la
distillation. Cette méthode est employée pour séparer l'eau et l'éthanol. Du benzène est utilisé
comme entraineur qui forme un azéotrope ternaire (ébullition à 64,6°C à P atmosphérique)
contenant 74,1% de Benzène, 18,5% d'Ethanol et 7,4% d'eau).

Après condensation, il se forme deux phases liquides :

- la phase supérieure riche en Benzène (86%) contient également 13% d'Ethanol et 1% d'eau

- la phase inférieure riche en Ethanol (52%) et en eau (43%) contient également 5% de Benzène.

La phase riche en Benzène est recyclée dans la colonne comme reflux. La phase riche en eau est
extraite et peut être traité à nouveau par distillation pour extraire l'Ethanol et le Benzène. L'Ethanol
sec est donc récupéré en pied de distillation.

D-Laquelle des substances suivantes sont volatiles à la vapeur et qui ne le sont pas ? Amygdaline,
anéthol, camphre, carvone, glucose, hespéridine, lactose, limonène, menthol, 2-nitrophenol, 4-
nitrophenol, patchouli alcool, raffinose, saccharose, Cinna aldéhyde. Donnez les raisons de votre
réponse

Les composés organiques volatils, ou COV sont des composés organiques pouvant facilement se
trouver sous forme gazeuse dans l'atmosphère terrestre. Ils constituent une famille de produits très
large.

Volatile Non volatile

Ethanol Amygdaline
alcool saccharose
limonène glucose
camphre aldehyde
cinnamique
lactose
2-nitrophenol

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E-Pourquoi les ortho-benzoquinones sont-elles toujours plus foncées que les para-ben-zoquinones ?

La structure chimique commune présente dans toutes les benzoquinones est la structure 2,5-
cyclohexadiène-1,4-dione (para-benzoquinone) ou la structure 3,5-cyclohexadiène-1,2-dione (ortho-
benzoquinone) 4,5 La majorité des quinones d'origine naturelle sont les para-benzoquinones, car
elles sont plus stables que les ortho-benzoquinones.

Conclusion
Les quinones sont des composés souvent rencontrés dans les systèmes biologiques tels que les
systèmes photosynthétiques ou enzymatiques, et en chimie (oxydation, polymères conducteurs,
etc…).

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