Activité 8 : Mener une recherche intégrant une PCR pour comprendre un intérêt de cette biotechnologie.

Depuis 1990, la PCR (polymérase chain reaction) a révolutionné la biologie moléculaire et s’est implantée très
rapidement dans les laboratoires. Ses intérêts touchent divers domaines de la biologie : détection d’infections
bactériennes (maladie de Lyme) ou virales (COVID19) mais aussi détection de gènes mutés et de maladies
génétiques, évolution des espèces en particulier de l'Homme ...
On cherche à comprendre comment se réalise une PCR et à comprendre un intérêt de cette biotechnologie.

Etape 1 : Extraire des informations de documents pour comprendre la technique de PCR

Ressources : manuel p 46/47

vidéo : https://ladigitale.dev/digiview/#/v/653e806cca454
Animation : https://dnalc.cshl.edu/resources/animations/pcr.html
1. Résumer les étapes d'une PCR à partir de la vidéo et de l'animation
2. Calculer le nombre de copies obtenues après 1 , 2, 3, 20 cycles.
3. Discuter de la fiabilité des résultats obtenus à partir des ressources proposées.

Etape 2 : Réalisation d'une PCR en classe

- Etape préalable : prise en main des micropipettes

- Etape manipulatoire :

Contexte : Deux patients sont envoyés par leur médecin au CRMVT (centre de référence des maladies vectorielles
liées aux tiques) à Nancy pour une suspicion d’infection à Borrelia burgdorferi (Bb), bactérie transmise par une tique
du genre Ixodes et responsable de la maladie de Lyme, dont les symptômes possibles les plus courants sont :
érythème migrant, arthrite, atteintes neurologiques, fatigue …..

Matthieu, chasseur, présente des symptômes de fatigue, un érythème migrant et a les genoux gonflés et
douloureux . Un prélèvement est effectué dans son liquide articulaire. Sylvie adore faire des promenades à cheval ;
elle présente une fatigue excessive. Un prélèvement de sang a été effectué. Tout deux se font souvent piquer par
des tiques.

On cherche à identifier, à partir des prélèvements des deux malades, s’ils sont infectés par Borrelia burgdorferi
afin de leur donner ou pas, un traitement antibiotique adapté.

Rq : aucun échantillon potentiellement dangereux ne sera utilisé dans cette manipulation.

1. En vous appuyant sur la première partie de l'activité

- Indiquer quel intérêt il y a à réaliser une PCR de leurs prélèvements.

- Indiquer les caractéristiques que doit avoir le « Primer » (= l’amorce) à utiliser pour notre recherche.

2. Suivre le protocole fourni pour réaliser une PCR des prélèvements de nos deux patients et de deux lots témoins
(personne contaminée = témoin positif et personne non infectée = témoin négatif).
Etape 3 : Réaliser et exploiter un résultat d’électrophorèse pour mettre en évidence un génotype.

Dans la solution tampon, l’ADN est légèrement chargé négativement. Sous l’effet de la force électrique, les
molécules d’ADN vont donc se déplacer linéairement vers l’électrode positive, d’autant plus rapidement que le
fragment d’ADN est petit. Le gène « Osp-C » témoin d’une infection à Bb, apparaitra sous la forme de deux
fragments d’ADN de 400 et 700 pb. Si le patient n’est pas infecté un seul fragment d’une taille d’environ 400 pb
(paire de bases) apparaitra.

1. Suivre le protocole fourni pour réaliser une analyse par électrophorèse de vos amplifications d’ADN

2. Schématiser les résultats obtenus en complétant le document ci-dessous

Mattieu a deux fragments d’ADN, un a 400et un a 700 comme le temoin positif, cela veut dire qu’il a la bacterie
dans son echantillon. Il a don la maladie de barrelia.

Sylvie a une fatigue non liée a cette maladie car elle a un echantillon negatif.

CCL : Mattieu va avoir 3 semaine d’antibio et Sylvie poursuivre ses examens pour comprendre sa fatigue .
3. Exploiter les résultats obtenus et conclure.