Mercodia

Oxidized LDL ELISA

Mode d’emploi

10-1143-01
RÉACTIFS POUR 96 MESURES

Ce kit est réservé à l’utilisation diagnostique in vitro

Fabriqué par

Mercodia AB, Sylveniusgatan 8A

SE-754 50 Uppsala
Suède
EXPLICATION DES SYMBOLES UTILISES SUR LES ETIQUETTES

Réactifs pour 96 mesures

∑ = 96

A utiliser avant

A conserver entre 2 et 8°C

N° de lot

Ce kit est réservé à l’utilisation diagnostique in vitro

© Mercodia 2009-2017
2
UTILISATION PREVUE
Le kit de test Mercodia Oxidized LDL ELISA est destiné à la mesure in vitro des quantités des lipo-
protéines LDL (lipoprotéines de faible densité) oxydées dans le sérum ou le plasma de l’homme.
Les mesures des quantités de lipoprotéines sont utilisées dans le diagnostic et le traitement des
troubles du métabolisme des lipides (par exemple,le diabète sucré), de l’athérosclérose et de
diverses affections du foie et des reins.

RÉSUMÉ ET EXPLICATION DU TEST

L’oxydation des lipoprotéines LDL est désormais considérée comme un événement clé du proces-
sus biologique d’apparition et d’accélération du développement de la strie graisseuse (lésion
athéroscléreuse précoce) [1–5]. Des études expérimentales ont montrés que les LDL deviennent
athérogènes lorsqu’elles sont oxydées et que les LDL oxydées sont plus fortement athérogènes
que les LDL non oxydées [1–5].
On trouve des LDL oxydées dans les macrophages des lésions athéroscléreuses, mais non
dans les artères saines [6]. L’absorption des LDL par les macrophages ne s’effectue pas par
l’intermédiairemdes récepteurs B/E aux LDL [7]. Selon de nombreuses études [1–5,8], les LDL, qui
sont le principal transporteur du cholestérol sanguin, doivent d’abord être oxydées afin d’être
reconnues par les récepteurs ”scavenger” (récepteurs des LDL oxydées) des macrophages. La
liaison des LDL oxydées aux macrophages est une étape nécessaire ; elle provoque l’accumulation
de cholestérol dans les macrophages, qu’elle transforme en cellules spumeuses [8].
Holvoet et ses collègues [9] ont été les premiers à établir clairement que les patients atteints de
maladies coronariennes présentaient des taux plasmatiques de LDL oxydées nettement supé-
rieurs à la normale, et que ces valeurs étaient similaires chez les patients présentant une maladie
coronarienne stable et chez les patients présentant un syndrome coronarien aigu. Selon cette
équipe, ces valeurs sont nettement plus élevées chez les patients présentant un angor stable ou
instable, ou un infarctus, que dans un groupe de contrôle composé de sujets, présumés sains,
d’âge similaire.
Dans son étude, Holvoet [9-13] mesurait les niveaux plasmatiques de LDL oxydées à l’aide
d’un test ELISA concurrent utilisant l’anticorps monoclonal murin mAb-4E6 : celui qu’utilise le kit
Mercodia Oxidized LDL ELISA. Cependant, le kit Mercodia est un test ELISA de type ”sandwich”,
dans lequel les puits des plaques de microtitration contiennent une couche de l’anticorps de
capture (anticorps mAb-4E6).
Plusieurs études dignes d’intérêt ont été réalisées par des chercheurs cliniciens utilisant les kits
Mercodia Oxidized LDL ELISA. Ainsi, Hulthe et Fagerberg [14] ont montré que les niveaux sériques
de LDL oxydées étaient corrélés avec l’épaisseur de l’intima et de la média et avec la présence de
plaques dans les artères carotide et fémorale, établissant la relation entre l’athérosclérose subcli-
nique et les niveaux sériques de LDL oxydées. Chez des patients présentant un syndrome métabo-
lique, Sigurdardottir, Fagerberg et Hulthe [15] ont observé des niveaux élevés de LDL oxydées; ils
ont en outre identifié une association de ces niveaux de LDL avec une faible taille des particules
de LDL. Kopprasch et al. [16] ont décelé des niveaux sériques élevés de LDL oxydées chez des
patients présentant une tolérance au glucose perturbée (impaired glucose tolerance, IGT). Enfin,
Duntas, Mantzou et Koutras [17] ont détecté des niveaux sériques de LDL oxydées nettement
supérieurs á la normale chez des patients présentant une hypothyroídie clinique.
Lors des conférences ”American Heart Association Scientific Sessions” de 2002, Johnston et al.
3
[18] ont signalés que les niveaux plasmatiques de LDL oxydées étaient nettement plus élevés
chez les patients atteints de maladie coronarienne instable que chez les sujets sains. En revanche,
selon une observation d’importance capitale, ils ne relevaient aucune différence significative en-
tre les taux de cholestérol de ces deux groupes de patients (références page 15).

PRINCIPE DE LA PROCÉDURE
Une caractéristique du test Mercodia Oxidized LDL ELISA est le dosage immunologique enzy-
matique à double site, en phase solide. Il repose sur une technique de type ”sandwich direct”,
dans laquelle deux anticorps monoclonaux sont dirigés contre deux déterminants antigéniques
distincts du apolipoprotein B oxydées molécule. En phase d’incubation, les molécules de LDL
oxydées de l’échantillon réagissent avec les anticorps anti-oxydées LDL fixés aux puits de mi-
crotitration. Après rincage, on ajute des anticorps anti-apolipoprotein B humaine conjugués à la
peroxydase. Après la deuxiéme incubation, un rincage simple élimine les anticorps marqués non
liés. Le conjugué est détecté par réaction avec la 3,3’, 5,5’-tetramethylbenzidine (TMB). Pour
arrêter la réaction, on ajoute de l’acide. Cette solution fournit un point d’évaluation colorimétric,
qui sera lu par spectrophotmétri.

AVERTISSEMENTS ET PRECAUTIONS
• Ce kit est réservé à l’utilisation diagnostique in vitro. Ne convient pas à l’usage interne ou
externe chez les humains ou les animauz.
• Vous devez éviter tout contact entre le contenu ou les résidus de ce kit et les ruminants ou les
suidés.
• La Stop Solution fournie contient 0.5 M d’acide sulfurique (H2SO4). Respectez les précautions
habituelles relatives á l’utilisation de produits chimiques dangereux.
• Tous les spécimens doivent être traités comme des échantillons contagieuz.
• Chaque puits ne peut être utilisé qu’une seule fois.
Attention! Ce kit contient des réactifs qui peuvent s’avérer infectieux!
Ce kit contient des réactifs fabriqués à soumis à des dosages immunologiques visant à détecter
l’antigène de surface de l’hépatite B, ainsi que les anticorps du VIH et du virus de l’hépatite C. Ces
tests ont donné des résultats négatifs. Toutefois, il convient de respecter toutes les précautions
recommandées pour la manipulation des dérivés sanguins. Reportez-vous à la publication HHS
n° (CDC) 88-8395 ou aux directives nationales ou locales correspondantes sur les procédures de
sécurité en laboratoire.

MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI

• Prelever les volumes à l’aide de pipettes appropriées (pipettes à répétition recommandées
pour l’ajout de solution d’enzyme conjugate 1X, Assay Buffer, Substrate TMB et Stop Solution)
• Tubes, béchers et éprouvettes cylindriques pour la préparation des réactifs
• Tubes à essai avec capuchon pour dilution des échantillions, 3.5 mL
• Eau redistillée
• Agitateur magnétique
• Agitateur vortex
• Lecteur de microplaques (filtre de 450 nm)
• Agitateur secoueur de plaques (700-900 tours par minute, mouvement orbital)
• Dispositif de rinçage de microplaques en utilisant la fonction aspiration verticale
(recommandé mais pas obligatoire)
4
RÉACTIFS
Chaque kit Mercodia Oxidized LDL ELISA contient suffisamment de réactifs pour 96 puits, soitm
une quantité permettant de traiter 40 échantillons, deux Controls et une courbe d’étalonnage en
double. Pour des séries de dosages plus importantes, mélangez les réactifs de kits portant des nu-
méros de lot identiques. La date de péremption du kit figure sur l’étiquette apposée à l’extérieur.
La température de stockage recommandée est 2 à 8°C.
Coated Plate 1 plaque 96 puits Prête à l’emploi
Monoclonal murin anti-oxydées LDL Bandes de 8 puits
Les puits de microtitration non utilisés peuvent être conservés pendant 2 mois entre 2-8°C
après les avoir replacés dans leur emballage hermétiquement fermé à l’aide de papier adhésif.
Calibrators 1, 2, 3, 4, 5 5 fioles 1000 µL Lyophilisé
LDL oxydées humaine Ajoutez 1000 µL
Code couleur: jaune d’eau redistillée
Conc. indiquée sur l’étiquette par fiole
Stockage après reconstitution: 2-8°C pour 1 semaine
Pour le stockage et la reconstitution des Calibrators au-delà de 1 semaine,
conservez-les à –20°C.
Calibrator 0 1 fiole 1000 µL Prête à l’emploi
Code couleur: jaune
Controls (H), (L) 2 fioles 1000 µL Lyophilisé
Conc. indiquée sur l’étiquette Ajoutez 1000 µL
Stockage après reconstitution: 2-8°C pour 1 semaine d’eau redistillée
Pour le stockage et la reconstitution des Controls au-delà d’ 1 par fiole
semaine, conservez-les à –20°C.
Enzyme Conjugate 11X 1 fiole 1.2 mL A préparer,
Peroxidase conjugé monoclonal murin anti-apoB voir ci-dessous
Enzyme Conjugate Buffer 1 fiole 12 mL Prête à l’emploi
Code couleur: bleu
Assay Buffer 1 fiole 12 mL Prête à l’emploi
Code couleur: rouge
Sample Buffer 4X 1 fiole 50 mL A préparer, voir
Code couleur: jaune ci-dessous Dilution
Stockage après dilution: 2-8°C pour 1 mois des échantillons
Wash Buffer 21X 1 fiole 50 mL Diluez avec 1000 mL
Stockage après dilution: d’eau distillée pour
2-8°C pour 2 mois préparer la solution
de wash buffer 1X
Substrate TMB 1 fiole 22 mL Prête à l’emploi
Solution incolore
Remarque! Cette solution est sensible à la lumière!
Stop Solution 1 fiole 7 mL Prête à l’emploi
0.5 M H2SO4

5
Préparation la solution d’enzyme conjugate 1X
Préparez le volume de la solution d’ enzyme conjugate 1X nécessaire en diluant 11X l’Enzyme
Conjugate (1+10) dans l’Enzyme Conjugate Buffer, en suivant les indications du table ci-dessous.
Lors de la préparation solution d’enzyme conjugate 1X pour une plaque entière, transférer tout
le tampon d’ Enzyme Conjugate Buffer dans le flacon d’ Enzyme Conjugate 11X. Mélangez sans
agiter.

Nombre de bandes Enzyme Enzyme

Conjugate 11X Conjugate Buffer
12 bandes 1 fiole 1 fiole
8 bandes 700 μL 7 mL
4 bandes 350 μL 3.5 mL
Stockage après dilution: à température comprise entre 2 et 8°C pendant 1 mois.
COLLECTE ET MANIPULATION DES SPÉCIMENS
Nous recommandons l’utilisation de plasma EDTA frais avec le kit de test Mercodia Oxidized LDL
ELISA. Vous pouvez également utiliser du plasma hépariné ou du sérum.
Plasma
Collectez le sang par ponction veineuse dans des tubes contenant de l’EDTA ou de l’heparine
comme anticoagulant et isolez le plasma par centrifugation. Les échantillons peuvent être stockés
jusqu’ à pedant au moins 6 mois à une température à –80°C. Evitez de les congeler et de les
décongeler plusieurs fois.
Sérum
Collectez le sang par ponction veineuse, attendez la coagulation, puis isolez le sérum par centrifu-
gation. Les échantillons peuvent être stockés jusqu’ à pedant au moins 6 mois à une température
à –80°C. Evitez de les congeler et de les décongeler plusieurs fois.

6
DILUTION DES ÉCHANTILLONS
La dilution des échantillons est une étape très importante de la procédure du test. Si la dilution
ne s’effectue pas correctement, il existe un risque d’augmentation de la variation des concen-
trations des LDL oxydées mesurées. Chaque échantillon doit être dilué en deux étapes pour une
dilution finale de 1/6561.

1 Préparez la solution sample buffer 1X en diluant une bouteille de Sample Buffer 4X* (50 mL)
dans 150 mL d’eau redistillée. Mélangez pendant environ 15 minutes à l’aide d’un
agitateur magnétique pour obtenir une solution homogène.
2 Préparez deux tubes pour chaque échantillon.
3 Ajoutez 25 µL de chaque échantillon dans des tubes individuels.
4 Ajoutez 2 000 µL de sample buffer 1X à chaque tube pour une dilution de 1/81.
5 Bouchez tous les tubes de la première dilution et mélangez minutieusement à l’aide d’un
mélangeur vortex tout en retournant les tubes.
6 Ajoutez 25 µL de chaque dilution à 1/81 dans de nouveaux tubes individuels.
7 Ajoutez 2 000 µL de sample buffer 1X à chaque tube pour une dilution finale de 1/6561.
8 Bouchez tous les tubes de la deuxième dilution et mélangez minutieusement à l’aide d’un
mélangeur vortex tout en retournant les tubes.
9 Laissez reposer pendant 10 minutes chaque dilution finale sur la paillasse et mélanger à
nouveau avant que les échantillons ne soient ajoutés à la plaque. Le test doit être commencé
suivant l’heure de la dilution et les échantillons dilués ne pourront pas être stockés.

*Remarque : Un précipité peut se former dans la solution Sample Buffer 4X entre 2 et 8 °C.
Laissez-la atteindre la température ambiante puis mélangez jusqu’à dissolution du précipité
avant de diluer ce concentré dans de l’eau redistillée.

PROCÉDURE DE TEST
Tous les réactifs et échantillons doivent être mis à température ambiante avant utilisation.
Préparez une courbe d’étalonnage pour chaque dosage. Ce dosage ELISA de la gamme Mercodia
peut être utilisé avec ou sans film autocaollant pour micro plaque. Ce dosage a été optimisé et
validé sans film de protection.

1 Préparez une solution sample buffer 1X et diluez les échantillons selon les instructions des
deux processus indiqués dans la rubrique Dilution des échantillons.
2 Préparez les Calibrators, les contrôles, la solution enzyme conjugate 1X et la solution wash
buffer 1X en fonction de la rubrique sur les réactifs.
3 Préparez un nombre suffisant de puits de plaques enduites pour y loger les Calibrators, les
contrôles et les échantillons en double.
4 Pipetez 25 µL de chaque Calibrator, contrôle et échantillon dilué dans les puits appropriés.
Tous les échantillons doivent être ajoutés à la plaque en 20 minutes.

7
 5 Ajoutez 100 μL de Assay Buffer dans chaque puits.
6 Laissez incuber sur un agitateur secoueur de plaques (700-900 rpm) pendant 2 heures à
température ambiante (entre 18 et 25°C).
7 Lavez 6 fois avec 700 µL solution de wash buffer 1X par puit avec un laveur de plaques
automatique en utilisant la fonction aspiration verticale. Evitez l’étape de trempage dans la
procédure de lavage.
Ou lavez manuellement :
Jetez le volume réactionnel en retournant la plaque au-dessus d’un évier. Ajoutez 350 µL
solution de wash buffer 1X dans chaque puit. Jetez la solution de wash buffer 1X, tapez
fermement plusieurs fois sur un papier absorbant pour ôter l’excès de liquide. Répétez 5
fois. Evitez les trempages prolongés pendant l’étape de lavage.
8 Ajoutez 100 μL solution d’enzyme conjugate 1X dans chaque puits.
9 Laissez incuber sur un agitateur secoueur de plaques (700-900 rpm) pendant 1 heure à
température ambiante (entre 18 et 25°C).
10 Lavar comme indequé au point 7.
11 Ajoutez 200 μL de Substrate TMB.
12 Laissez incuber sur le banc pendant 15 minutes à température ambiante, sans agitation.
13 Ajoutez 50 μL de Stop Solution. Placez la plaque sur un agitateur secoueur pendant environ
   5 secondes, afin que le mélange s’effectue bien.
14 Lisez la densité optique à 450 nm et calculez les résultats.
La lecture doit être réalisée sous 30 minutes.

Note: Porter une attention particulière à ne pas contaminer le Substrat TMB avec la solution de
l’enzyme conjugué.

CONTRÔLE DE QUALITÉ INTERNE

Les contrôles disponibles dans le commerce ou les mélanges de sérums internes dont la concen-
tration en LDL oxidées est faible, moyenne ou élevée, doivent systématiquement être soumis à un
dosage, comme des mélanges de concentration èchantillions, et les résultats doivent être reportés
sur un graphique journalier. C’est une bonne pratique pour un laboratoire d’enregistrer les
données suivantes pour chaque dosage: numéro de lot du kit, dates de reconstitution des com-
posants, valeurs OD du blanc, des Calibrators et des Contrôles.
Les laboratoires soivent suivre la règlementation en vigueur ou les exigences des accréditations
en ce qui concerne la fréquence du contrôle de qualité.

8
 CALCUL DES RÉSULTATS
Calcul par ordinateur
Pour calculer la concentration en LDL oxydées, réduisez les données d’absorbance des Calibrators,
sans Calibrator 0, comparées à la concentration, en appliquant une équation de régression de
la spline cubique. Multipliez la concentration des échantillons par le facteur de dilution (par
exemple × 6561).

Calcul manuel
1. Placez les points correspondant aux valeurs d’absorbance obtenues pour les Calibrators,
sans Calibrator 0, en fonction de la concentration de LDL oxydées sur du papier pour
graphiques log-logarithmiques et tracez la courbe d’étalonnage.
2. Lisez la concentration des Controls et échantillons à partir de cette courbe.
3. Multipliez la concentration des Controls et des échantillons par le facteur de dilution (par
exemple × 6561).
Puits Identité A450 Conc. mU/L U/L**
1A–B Calibrator 0 0.072
1C–D Calibrator 1* 0.185
1E–F Calibrator 2* 0.369
1G–H Calibrator 3* 0.664
2A–B Calibrator 4* 1.405
2C–D Calibrator 5* 2.469
2E–F Control (H) 1.234 12.2 80.04
2G–H Control (L) 0.513 5.2 34.12
* Concentration a déclaré sur l’etiquette du flacon.
**Résultat multiplié par le facteur de dilution (× 6561).

Exemple de courbe d´étalonnage

La courbe présentée est une courbe d´étalonnage type. Ne l’utilisez pas pour déterminer les
résultats des dosages réels.

10  
OD 450 nm

1  

0.1  
1   10   100  
mU/L
9
 LIMITES DE LA PROCÉDURE
Comme pour tous les tests de diagnostic, le diagnostic clinique définitif ne doit pas reposer sur
les conclusions d’un seul test: il doit être effectué par le médecin après évaluation de tous les
résultats cliniques.
L’hémolyse, l’ictère ou la lipémie n’affectent pas le dosage.

VALEURS MOYENNES
VALEURS MOYENNES
La déontologie incite chaque laboratoire à établir sa propre gamme de valeurs. Les résultats
La déontologie incite chaque laboratoire à établir sa propre gamme de valeurs. Les résultats suiv-
suivants peuvent servir de guide jusqu’à ce que le laboratoire ait rassemblé suffisamment de
ants peuvent servir de guide jusqu'à ce que le laboratoire ait rassemblé suffisamment de don-
données provenant de ses propres sources.
nées provenant de ses propres sources.
Une étude portant sur 149 individus en ambulatoire, sélectionnés au hasard dans la région de
Stockholm
Une étude (Suède),
portant sur a donnéenles
149 individus résultats suivants.
ambulatoire, sélectionnés au hasard dans la région de
Stockholm (Suède), a donné les résultats suivants.

Distrubition
Distribution des LDL oxydées
of Oxidized LDL
6,00

5,00
Frequency (%)

4,00
Fréquence

3,00

2,00

1,00

0,00
25 35 45 55 65 75 85 95 105 115
Oxidized LDL (U/L)
LDL oxydées

Oxidized
Oxydé LDLLDLvsvscholestérol
Total Cholesterol
total
125

100
LDL (U/L)

75
LDL oxydées
Oxidized

50

25

0
0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00
Total Cholesterol
Cholestérol total (mmol/L)

10
Une étude portant sur 149 individus en ambulatoire, sélectionnés au hasard dans la région de
Stockholm (Suède), a donné les résultats suivants.
Moyenne Médiane Étendue
OxLDL (U/L)* 61 59 26–117
Chol/HDL ratio** 4.10 3.90 1.68–7.89
* Unités arbitraires. Voir ÉTALONNAGE.
**Mesure du Cholestérol (en mmol/L) et des lipoprotéines HDL (en mmol/L).

Distribution des mesures de LDL oxydées et du ratio Cholestérol/HDL.

LDL oxydées Cholestérol/HDL Patient/Total (%)
U/L Ration
Quartile 1
Q1(26–49) 1.68–3.13 22/149 (14.8)
Q2(50–59) 1.68–3.13 10/149 (6.7)
Q3(60–69) 1.68–3.13 5/149 (3.4)
Q4(70–117) 1.68–3.13 0/149 (0.0)
Quartile 2
Q1(26–49) 3.21–3.86 7/149 (4.7)
Q2(50–59) 3.21–3.86 17/149 (11.4)
Q3(60–69) 3.21–3.86 10/149 (6.7)
Q4(70–117) 3.21–3.86 3/149 (2.0)
Quartile 3
Q1(26–49) 3.87–4.79 7/149 (4.7)
Q2(50–59) 3.87–4.79 11/149 (7.4)
Q3(60–69) 3.87–4.79 11/149 (7.4)
Q4(70–117) 3.87–4.79 9/149 (6.0)
Quartile 4
Q1(26–49) 4.80–7.89 1/149 (0.7)
Q2(50–59) 4.80–7.89 4/149 (2.7)
Q3(60–69) 4.80–7.89 7/149 (4.7)
Q4(70–117) 4.80–7.89 25/149 (16.8)

11
Une étude portant sur 147 individus en ambulatoire, sélectionnés au hasard dans la région de
Stockholm (Suède), a donné les résultats suivants.
Moyenne Médiane Étendue
OxLDL (U/L)* 61 59 26–117
LDL/HDL Ratio** 2.51 2.36 0.55–5.56
* Unités arbitraires. Voir ÉTALONNAGE.
**Mesure des lipoprotéines LDL (en mmol/L) et HDL (en mmol/L).

Distribution des mesures de LDL oxydées et du ratio LDL / HDL.

LDL oxydées LDL/HDL Patient/Total (%)
U/L Ratio
Quartile 1
Q1(26–49) 0.55–1.79 19/147 (13.0)
Q2(50–59) 0.55–1.79 12/147 (8.2)
Q3(60–69) 0.55–1.79 6/147 (4.1)
Q4(70–117) 0.55–1.79 0/147 (0.0)
Quartile 2
Q1(26–49) 1.79–2.33 10/147 (6.8)
Q2(50–59) 1.79–2.33 13/147 (8.8)
Q3(60–69) 1.79–2.33 10/147 (6.8)
Q4(70–117) 1.79–2.33 3/147 (2.0)
Quartile 3
Q1(26–49) 2.36–3.08 8/147 (5.4)
Q2(50–59) 2.36–3.08 11/147 (7.5)
Q3(60–69) 2.36–3.08 10/147 (6.8)
Q4(70–117) 2.36–3.08 8/147 (5.4)
Quartile 4
Q1(26–49) 3.09–5.56 0/147 (0.0)
Q2(50–59) 3.09–5.56 5/147 (3.4)
Q3(60–69) 3.09–5.56 8/147 (5.4)
Q4(70–117) 3.09–5.56 24/147 (16.3)

12
CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCES
Limites de détection
La limite de détection correspond à la Capacité de détection telle que définie par la norme
ISO11843, Partie 1. La Capacité de détection doit être considérée comme une partie d’une valida-
tion de méthode, et non comme la concentration la plus faible pouvant être mesurée. La limite
de détection est de 0.6 mU/L telle que déterminée par la méthodologie décrite dans la norme
ISO11843, Partie 4.
La concentration des échantillons dont l’absorbance est inférieure à celle de Calibrator 1 ne doit
pas être calculée mais exprimée comme étant inférieure ou égale (≤) à la concentration indiquée
sur le flacon de Calibrator 1.

Récupération
Le dosage en retour donne une valeur comprise entre 85 et 107% (moyenne 95%).

Précision
Chaque échantillon a été analysé de 3 echantillon en 3–8 exemplaires à 20 occasions différentes.
Coefficient de variation
Echantillon Valeur moyenne Répétabilité%* Entre laboratoire
mU/L %**
1 8.5 5.5 8.3
2 19 7.3 8.3
3 32 6.2 7.4

*Pendant du dosage variation

**Total les dosages variation

13
Dilutions
Echantillon Dilution Valeurs obtenues Obtenues/
mU/L Estimées
(Assay 1/ Assay 2)
Echantillon 1 1:3321
1:6642 19.9/18.3
1:13284 9.4/9.5 0.94/1.04
Echantillon 2 1:3321 –
1:6642 20.6/20.4
1:13284 10.6/9.8 1.02/0.97
Echantillon 3 1:3321 29.1/32.0
1:6642 15.6/15.5 1.07/0.97
1:13284 7.7/8.0 1.05/1.00
Echantillon 4 1:3321 21.6/20.2
1:6642 10.4/10.4 0.97/1.03
1:13284 5.9/5.7 1.08/1.12
Echantillon 5 1:3321 15.9/15.7
1:6642 8.1/8.0 1.02/1.02
1:13284 4.0/4.4 1.02/1.13
Valeurs moyenne obtenu/estimé est 1.03, étendue 0.94–1.13.

Etalonnage
Aucune référence internationale n’est actuellement disponible le Mercodia Oxidized LDL ELISA
est calibré avec une préparation de référence faite maison, utilisant des unités arbitraires rela-
tives.

GARANTIE
Les données de performances présentées dans ce document ont été obtenues lors de tests re-
spectant la procédure indiquée. Tout changement ou modification dans la procédure, non re-
commandé par Mercodia AB, est susceptible d’affecter les résultats. Si la procédure n’est pas
respectée, Mercodia AB décline toute responsabilité concernant les garanties exprimées, légales
ou implicites, y compris la garantie implicite relative à la qualité marchande et à la conformité
d’usage de ce kit.
Mercodia AB et ses distributeurs agréés ne sauront être tenus pour passibles de dommages
indirects ou immatériels si la procédure décrite n’est pas respectée.

14
RÉFÉRENCES
1. Steinberg D (1997) Low density lipoprotein oxidation and its pathobiological significance.
J Biol Chem 272:20963–20966.
2. Berliner JA, Navab M, Fogelman AM, Frank JS, Demer LL, Edwards PA, Watson AD and
Lusis AJ (1995) Atherosclerosis: basic mechanisms: oxidation, inflammation, and genetics.
Circulation 91:2488–2496.
3. Steinberg D (1997) Oxidative modification of LDL and atherogenesis. Circulation
95:1062–1071.
4. Heinecke JW (1998) Oxidants and antioxidants in the pathogenesis of atherosclerosis: im-
plications for the oxidized low density lipoprotein hypothesis. Atherosclerosis 141:1–15.
5. Witztum JL and Horkko S (1997) The role of oxidized LDL in atherogenesis: immunological
re-sponse and anti-phospholipid antibodies. Ann N Y Acad Sci 811:88–99.
6. Yla-Herttuala S (1998) Is oxidized low-density lipoprotein present in vivo? Curr Opin
Lipidol 9:337–344.
7. Brown, MS and Goldstein JL (1983) Lipoprotein metabolism in the macrophage: implications
for cholesterol deposition in atherosclerosis. Annu Rev Biochem 52:223–226.
8. Chisolm GM, Hazen SL, Fox PL and Cathcart MK (1999) The oxidation of lipoproteins by
monocyte-macrophages. J Biol Chem 274:25959–25962.
9. Holvoet P, Vanhaecke J, Janssens S, Van de Werf F and Collen D (1998) Oxidized LDL and
mal-ondialdehyde-modified LDL in patients with acute coronary syndromes and stable
coronary artery disease. Circulation 98:1487–1494.
10. Holvoet P, Mertens A, Verhamme P, Bogaerts K, Beyens G, Verhaeghe R, Désiré Collen,
Muls E and de Werf F (2001) Circulating Oxidized LDL Is a Useful Marker for
Identifying Patients With Coronary Artery Disease. Arterioscler Thromb Vasc Biol 21:844–848.
11. Holvoet P, Satssen J-M, Van Cleemput J, Collen D and Vanhaecke J (1998) Oxidized low
den-sity lipoproteins in patients with transplant-associated coronary artery disease.
Arterioscler Thromb Vasc Biol 18:100–107.
12. Holvoet P, Donck J, Landeloos M, Brouwers E, Luijtens K, Arnout J, Lesaffre E, Van-
renterghem Y and Collen D (1996) Correlation between oxidized low density lipoproteins and
von Willebrand factor in chronic renal failure. Thromb Haemost 76:663–669.
13. Holvoet P, Van Cleemput J, Collen D and Vanhaecke J (2000) Oxidized low density
lipoprotein is a prognostic marker of transplant-associated coronary artery disease.
Arterioscler Thromb Vasc Biol 20:698–702.
14. Hulthe J and Fagerberg B (2002) Circulating oxidized LDL is associated with subclinical
atherosclerosis development and inflammatory cytokines (AIR Study). Arterioscler
Thromb Vasc Biol 22: 1162-1167.
15. Sigurdardottir V, Fagerberg B and Hulthe J (2002) Circulating oxidized low-density
lipoprotein (LDL) is associated with risk factors of the metabolic syndrome and LDL size
in clinically healthy 58-year old men (AIR study). J internal Medicine 252:440–
447.
16. Kopprash S, Pietzsch J, Kuhlisch E, Fuecker K, Temelkova-Kurktschiev T, Hanefeld M,
Kühne H, Julius U and Graessler J (2002) In vivo evidence for increased oxidation of
circulating LDL in impaired glucose tolerance. Diabetes 51:3102–3106.

15
17. Duntas LH, Mantzou E and Koutras DA (2002) Circulating levels of oxidized low-density
lipoprotein in overt mild hypothyrodism. Thyroid 12:1003–1007.
18. Johnston N, Lagerqvist B, Siegbahn A and Wallentin L (2002) Oxidized LDL and unstable
coronary artery disease. Presented at the American Heart Association Scientific Sessions
Chicago, USA.

De plus amples informations sont disponibles sur notre site web: www.mercodia.com

16
 FEUILLE DE PROTOCOLE RESUMEE

Mercodia Oxidized LDL ELISA

Ajout de Calibrators, Controls et des

25 μL
échantillons dilué en 20 minutes

Ajout d’Assay Buffer 100 μL

2 heures à 18–25°C sur un agitateur

Incubation
seoueur de plaques, 700-900 rpm

Rinçage avec solution de wash buffer 1X 6 fois

Ajout solution d’enzyme conjugate 1X 100 μL

1 heure à 18–25°C sur un agitateur

Incubation
seoueur de plaques, 700-900 rpm

Rinçage avec solution de wash buffer 1X 6 fois

Ajout de Substrat TMB 200 μL

Incubation 15 minutes à 18-25°C

50 μL
Ajout de Stop Solution ecouer pendant 5 secondes pour bien
mélanger

Mesure de A450 Évaluer les résultats

Pour plus de détails voir page 7

Pour toute assistance technique, veuillez contacter: support@mercodia.com

31-3136
Version 17.0
2017-04-28