Université Abdelhamid Ibn Badis, Mostaganem, Algérie

Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie

Département des Sciences Alimentaires

L3 Toxicologie

Compte rendu de Tp1 et Tp2

Le Repiquage

PRESENTER PAR :

DAMENE FATIMA

BELDERRAR HALIMA

DATE DE TP :

1. TP 1 : 20/02/2024
2. TP 2 : 27/02/2024

Sommaire :

1. Introduction.
2. Objectif.
3. Méthodologie.
4. Résultats et commentaires.
5. Conclusion.
6. Références bibliographiques.
 1. Introduction :

Le repiquage en microbiologie fait référence au processus de transfert d'une culture

microbienne d'un milieu de croissance à un autre. Ce processus est souvent effectué pour
diluer une culture afin d'obtenir une concentration spécifique de cellules, pour isoler des
colonies individuelles ou pour transférer des micro-organismes dans un nouveau milieu de
croissance pour des expériences ultérieures. Le repiquage est une étape essentielle dans de
nombreuses techniques microbiologiques, notamment la culture bactérienne, la culture de
levure et la culture de champignons.

2. Objectif :

L'objectif de ce TP était de comprendre et de maîtriser la technique du repiquage en

microbiologie, ainsi que ses différentes applications.

3. Méthodologie :

3. 1. Produits utilisés :

 Cultures bactérienne et autres fongiques (matériels biologiques) ;

 Gélose nutritif.
3. 2. Matériels utilisés :
 Ance de platine ;
 Incubateur (étuve) ;
 Bec bunsen ;
 Surface de travail stérile et bien désinfecté avec l'eau de javel.

3. 3. Technique utilisé :

3. 3. 1. Principe :

Le repiquage en culture cellulaire bactérienne consiste à transférer des colonies

bactériennes individuelles d'un milieu solide à un milieu liquide ou à une nouvelle surface
solide. Ce processus permet d'isoler des souches pures, de diluer les cultures et de préparer
des échantillons pour des expériences futures. L'objectif est d'assurer la croissance

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 contrôlée des bactéries dans un environnement approprié, en évitant la contamination
croisée entre les cultures. Cette technique est essentielle en microbiologie pour la
manipulation précise des colonies bactériennes et la préparation de cultures homogènes.

3. 3. 2. Mode opératoire :

3. 3. 2.1. Pour la culture bactérienne :

Dans le cadre de l'expérience de repiquage en culture cellulaire bactérienne, une série

d'étapes rigoureuses a été suivie pour assurer des conditions stériles et efficaces. Tout
d'abord, le matériel nécessaire, y compris le milieux de culture (GN) et l'ance de platine, a
été soigneusement stérilisé afin d'éviter toute contamination externe. Ensuite, des colonies
bactériennes individuelles ont été sélectionnées méticuleusement sur les plaques de gélose,
garantissant ainsi la pureté des échantillons utilisés. Parallèlement, le gélose nutritif stériles
à été préparé avec précision dans des boites de pétri, assurant un environnement propice à
la croissance des bactéries. Les colonies sélectionnées ont ensuite été transférées avec
minutie dans ces boites de pétri à l'aide d'ance de platine stériles, assurant ainsi la
continuité de la stérilité. Enfin, les cultures repiquées ont été placées dans une étuve réglé
aux conditions optimales pour favoriser la croissance bactérienne, garantissant ainsi des
résultats fiables pour les expériences ultérieures. Ces étapes méthodiques sont essentielles
pour assurer le succès du processus de repiquage en culture cellulaire bactérienne et la
validité des données obtenues (figue 1).

3. 3. 2.1. Pour la culture fongique :

Dans le cadre du transfert de cultures fongiques dans un milieu de gélose nutritif liquide,
une série d'étapes méticuleuses a été suivie pour maintenir des conditions stériles et
efficaces. Tout d'abord, le matériel requis, y compris le gélose nutritif et l'ance de platine, a
été soigneusement stérilisé pour éviter toute contamination externe. Ensuite, des colonies
fongiques individuelles ont été sélectionnées avec minutie sur les plaques de gélose afin de
garantir la pureté des échantillons utilisés pour le transfert. Parallèlement, des milieux de
gélose nutritif liquide stériles ont été préparés de manière précise dans des flacons stériles,
créant ainsi un environnement propice à la croissance des champignons. Les colonies
fongiques sélectionnées ont ensuite été transférées avec précaution dans les milieux de
gélose nutritif liquide à l'aide d'une ance de platine stérile, en veillant à maintenir la
stérilité tout au long du processus. Enfin, les cultures transférées ont été placées dans un
incubateur réglé aux conditions optimales pour la croissance fongique, favorisant ainsi le

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 développement des champignons dans le milieu liquide. Ces étapes méthodiques sont
essentielles pour garantir le succès du transfert de cultures fongiques dans un milieu
liquide et pour assurer la fiabilité des résultats obtenus dans les expériences ultérieures
(figue 1).

Figure 1. Bref Regard sur les étapes de la manipulation.

4. Résultats et commentaires :

4. 1. Culture bactérienne :

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Commentaire :

Les résultats du repiquage microbiologique indiquent une réussite dans le transfert des
colonies bactériennes vers les milieux de culture liquides. Cette observation suggère que le
processus de repiquage a été effectué avec succès, permettant ainsi la migration des micro-
organismes dans le nouvel environnement de croissance. De manière significative,
l'observation de la croissance bactérienne dans les cultures repiquées après incubation
confirme la viabilité des cellules transférées et leur capacité à se développer dans les
conditions du nouveau milieu. Ces résultats (figure 2) démontrent l'efficacité du repiquage
en tant que technique de manipulation des cultures microbiennes, essentielle pour diverses
applications en microbiologie, de la recherche fondamentale à l'industrie biotechnologique.

4.2. Culture fongique :

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 Figure 3. Culture fongique.

Commentaire :

Les résultats du repiquage microbiologique démontrent un succès dans le transfert des

colonies fongiques vers les milieux de gélose nutritif liquide. Cette observation met en
lumière l'efficacité du processus de repiquage, ayant permis le déplacement des cellules
fongiques vers un nouvel environnement propice à leur croissance. De manière
significative, la détection de la croissance fongique dans les cultures repiquées après
incubation confirme la vitalité des cellules transférées et leur capacité à proliférer dans les
conditions du nouveau milieu. Ces résultats (figure 3) soulignent l'importance du
repiquage en tant que technique de manipulation des cultures fongiques, indispensable
pour une variété d'applications en microbiologie, de la recherche fondamentale à l'industrie
biotechnologique.

Commentaire 2 :

Une grande quantité de l'échantillon a été

prélevée, ce qui l'a fait se disperser sur la
gélose, ce qui l'a fait apparaître à de
nombreux endroits.

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5. Conclusion :

Ce TP nous a permis de maîtriser la technique du repiquage en culture cellulaire

bactérienne. En acquérant cette compétence, nous sommes capables de manipuler
efficacement les colonies bactériennes et de préparer des cultures pour différentes
applications en microbiologie.

Références bibliographiques :

https://sordalab.com/RESSOURCES/documents/FR/CMS_BMEGA_-CMS_ECOLI.pdf

https://io-one.fr/data/rap/microbiologie.pdf