Université Abdelhamid Ibn Badis

Mostaganem
Faculté de science de la nature et de la vie
Département de Biologie

Master 1 Biochimie Appliquée

Module Microbiologie Applique

TP n°04 :

Conservation des isolats bactériennes

Membres de groupe :
HANTOUT Halima KECHAR Smail REZALI Yacine

HAMMOU Djouher HAMMOU Imane MOHAMMEDI Youssra

2022/2023
 I) INTRODUCTION :

La souche bactérienne est une fraction d'une espèce bactérienne différente des autres
bactéries de la même espèce par une différence mineure mais identifiable, dans le domaine de la
microbiologie.

1) Objectifs :

La conservation d'une souche pure est le suivant : maintenir ta souche pure à conserver viable,
disponible et à l'identique. Dans l'absolu, conserver à l'identique, c'est conserver à l'identique le
génotype

2) Les différentes méthodes de conservation bactérienne :

 Repiquage successif
 Congélation
 Ultra congélation
 Lyophilisation
 Dessiccation

3) Matériel :
o Bec benzène.
o Etuve.
o Réfrigérateur.
o Congélateur.
o Les tubes.
o Cryotube.
o Micropipette.
o Pipait de pasteur.
o Souche bactérienne.
o Cryoprotecteur (700ml).
o Glycérol (300ml).
 A. Repiquage successif :

Le repiquage successif peut également être utilisé pour cultiver des bactéries en laboratoire.
Cette technique est appelée "sous-culture en série" ou "transfert en série". Elle consiste à transférer
une petite quantité de culture bactérienne dans un nouveau milieu de culture frais, puis à répéter ce
processus plusieurs fois à intervalles réguliers.

Nous avons utilisés réfrigérateur 2°-8°C.

La durée = 3-6 moins.

Mode opératoire :

1 - prélever une colonie d’isolat avec pipette pasteur.

2 - nous l'avons ensemencé dans un milieu de culture, Et nous l'avons mis dans un étuve

B. Congélation :
La congélation à -18/-25°C est la méthode qui on a utilisée pour la conservation des isolats
bactériens. Les bactéries sont cultivées en milieu liquide approprié, puis une partie de la
culture est prélevée et ajoutée à un cryotube contenant un milieu de congélation approprié
(glycérol 300ml) et Le cryoprotecteur 700ml st ensuite placé dans un congélateur à -18 -
25°C pour une conservation à long terme.
 4) Résultats :
 Après 24 heures d'incubation à 37 °C nous avons fait la lecture de notre échantillon et ont an
trouvé : un résultat positif c'est ta dire il y a une croissance des colonies. Car nous avons vue
des colonies blanchâtres dans notre tube (voir la figure).
 Dans les cryotubes nous n'avons rien remarqué.

II) Conclusion :
La conservation des isolats bactériens est un processus essentiel pour préserver la diversité
microbienne et maintenir la disponibilité de ressources microbiennes pour la recherche future. La
conservation peut se faire par différentes méthodes telles que la congélation, la lyophilisation, la
conservation en milieu de gélose, ou encore la conservation en milieu liquide. Il est important de
choisir la méthode appropriée en fonction de la nature de l'isolat et de ses besoins spécifiques. La
conservation des isolats bactériens peut être une étape critique pour garantir leur disponibilité pour
la recherche future et contribuer ainsi à l'avancement des connaissances en microbiologie.