Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique

Université Abou-Bekr Belkaid de Tlemcen

Faculté des Sciences de la Nature et de la vie
Département de Biologie

 TRAVAUX DIRIGES EN BIOLOGIE

MOLECULAIRE ET CELLULAIRE

Dr. HAMDAN RAMDANI Lamia

Pharmacienne-PhD-HDR
La culture cellulaire
 La culture cellulaire

La culture cellulaire est un ensemble de techniques de biologie utilisées pour faire croître des cellules hors

de leur organisme (ex-vivo) ou de leur milieu d'origine, dans un but d’expérimentation scientifique.

Les cellules mises en culture peuvent être:

•Des micro-organismes libres (bactéries ou levures)

•Des cellules « saines » prélevées fraîchement d'un organisme (biopsie...), on

parle alors de « culture primaire ».

•Des cellules ayant une capacité de division non limitée (on parle
d'« immortalité en culture »). Ce sont des lignées cellulaires. Les lignées sont
soit des cellules cancéreuses soit des cellules souches.

•Des tranches d‘organes 

Etude de la prolifération cellulaire

Les tests à base de résazurine montrent une excellente

corrélation avec les autres tests de viabilité cellulaire comme
les tests à base de formazan (MTT/XTT) avec l'avantage
d'être plus faciles d'utilisation et plus sécures pour leurs
utilisateurs.

Ils permettent par ailleurs d'allonger la durée des

expériences (le colorant étant minimalement toxique pour les
cellules vivantes) et fonctionnent aussi bien pour les cellules
adhérentes que pour les bactéries et les champignons.

La résazurine est utilisée dans les tests de culture cellulaire

(comptage de cellules, tests de prolifération cellulaire) La
conversion irréversible de la résazurine en résorufine est
proportionnelle à la respiration aérobie.
Etude de la prolifération cellulaire
Etude de l’apoptose

L'apoptose est caractérisée par de nombreuses altérations morphologiques,

membranaires, mitochondriales et nucléaires, analysables par cytofluorimétrie en flux.
La perte de l'intégrité de la membrane plasmique est détectable par l'incorporation
d'agents fluorescents.

L'exposition de la phosphatidylsérine sur le feuillet externe de la membrane de la

cellule apoptotique peut être révélée par la fixation d'annexine-V.

Les modifications nucléaires telles que la condensation chromatinienne sont

analysables après incorporation d'IP (Iodure de Propidium).
Etude de l’apoptose par cytométrie en image
Etude de l’apoptose par cytométrie en flux
Etude génétique par q-RT-PCR

La PCR est une technique d'amplification génétique in vitro qui a été conçue par
un chercheur américain, Kary Mullis (prix nobel 1993): l'ADN bicaténaire est
déroulé en ADN monocaténaire, puis dupliqué et ré-enroulé, selon des cycles
répétitifs comprenant les trois étapes suivantes :

• Dénaturation de l'ADN par fusion à haute température pour convertir l'ADN

bicaténaire en ADN monocaténaire. Cette étape est réalisée à une température
comprise entre 93 et 96°C.

• Hybridation à l'ADN cible de deux oligonucléotides utilisés comme amorces.

Cette hybridation a lieu à une température comprise entre 55 et 65°C.

• Extension de la chaine d'ADN par addition de nucléotides à partir des amorces

en utilisant l'ADN polymérase (2) comme catalyseur en présence d'ions Mg2+.
La température optimale de travail de l'ADN polymérase est de 72°C.
Etude génétique par q-RT-PCR
Je vous remercie pour votre attention