PLAN

INTRODUCTION
1. Connaissances de bases des réactions de PARP
2. L’activité de PARP-1 sur la chromatine pendant la réparation et la
transcription de l’ADN
3. PARP-1 et les modifications épigénétiques de l’ADN
4. PARylation et modifications des histones
5. Mécanismes épigénétiques dans la thérapie du cancer basée sur les
PARPi
CONCLUSION
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
INTRODUCTION
1-CONNAISSANCES DE BASES DES REACTIONS DE PARP
• L'ADP-ribosylation est catalysée par les enzymes ADP-ribosyltransférase appartenant à la
famille des poly(ADP-ribose) polymérases (PARP) et représente l'une des modifications
posttraductionnelles les plus complexes des protéines.

• La famille PARP est composée de 17 protéines qui sont très hétérogènes les uns des autres
en termes de taille , localisation (noyau, cytoplasme, mitochondrie), et surtout mécanismes
et produits de la catalyse

Nous avons les PARP-1, PARP-2, PARP-3, PARP-5a et PARP-5b (également appelées tankyrases en
raison de la présence du domaine ankyrine impliqué dans la reconnaissance de cibles protéiques
spécifiques).

• En dehors des PARP-9 et PARP-13 qui sont inactives, les membres restants, sont des
mono(ADP-ribosyl) transférases (MARTs)
1-CONNAISSANCES DE BASES DES REACTIONS DE PARP
1-CONNAISSANCES DE BASES DES REACTIONS DE PARP
• Le renouvellement du PAR est très rapide et réalisé par l'activité catabolique de plusieurs
enzymes dégradant le PAR.

• La poly(ADP-ribose) glycohydrolase (PARG) conduit au clivage des liaisons ribose-ribose sans

retirer l'unité terminale ADP-ribose du substrat.

• La dégradation complète de la modification PAR est accomplie par le terminal ADP ribose
protéine glycohydrolase (TARG1)/C6orf130, domaine MACRO 1(MacroD1) et MacroD2 qui
hydrolysent le dernier fragment ADP-ribose attaché aux protéines.

• De plus, l'ADP-ribosyl hydrolase 3 (ARH3) est probablement la seule enzyme ayant les mêmes
activités endo- et exoglycosidiques que le PARG mais agissant également sur la dernière unité
.
1-CONNAISSANCES DE BASES DES REACTIONS DE PARP
2.1. PARylation covalente
• En dehors des résidus de glutamate et d’aspartate, des techniques de spectrophotométrie de
masse ont identifié plusieurs autres site de PARylation qui sont la lysine, la tyrosine et surtout
la sérine
• Les sites de PARylation des PARP-1 et PARP-2 sont contenues dans leur domaine dit
d’automodification(figure1b)
• L'automodification de PARP-1 est fortement induite lors de la reconnaissance des cassures de
l’ADN pour permettre la dissociation de PARP-1 des sites de dommages de l'ADN, évitant le
piégeage de PARP-1.

• Trois des résidus de sérine (S499, S507 et S519) ont récemment été démontrés comme les
principales cibles de l’automodification de PARP-1 in vivo et, lorsqu'ils sont mutés, ils
empêchent la délocalisation de PARP-1 des lésions de l'ADN et sensibilisent les cellules au
PARPi . Cette preuve confirme la pertinence du piégeage de PARP-1 dans l'induction de la
cytotoxicité.
1-CONNAISSANCES DE BASES DES REACTIONS DE PARP
2.2. PARylation non covalente
• L’automodification de PARP-1 contribue considérablement au rôle pléiotropique de
l’enzyme,en augmentant le nombre de facteurs moléculaires qui peuvent interagir avec elle.
• De manière cohérente, les protéines portant des motifs d’acides aminés spécifiques peuvent
lier les chaines PAR de manière non covalente avec différentes constantes de dissociations
qui déterminent des affininités d’interaction élevées, moyens et faibles. De cette façon, la
PARP-1 automodifiée fonctionne comme une plateforme moléculaire pour le récrutement de
facteurs qui doivent assister à un processus tel que la réparation de l’ADN.
• Deux de ces motifs de liaison sont le le doigt de zinc de liaison au PAR(PBZ) et le classique
motif de liaison de PAR (PBM)
2-L’activité des PARP-1 sur la chromatine pendant la reparation et
la transcription de l’ADN
La capacité de PARP-1 à agir comme un capteur de dommages à l'ADN est garantie par la large
distribution de l'enzyme sur la chromatine. À l'état inactif, PARP-1 se lie aux nucléosomes,
favorisant la condensation de la chromatine.

• L'induction de l'activité PARP-1 par des cassures de l'ADN détend localement et

transitoirement la chromatine, réduisant l'affinité de PARP 1 pour les nucléosomes et
facilitant le recrutement des facteurs de réparation de l'ADN qui doivent intervenir dans ces
sites .

• Le même mécanisme est requis pour la régulation de la transcription médiée par le PARP .

Les mécanismes d'activation de PARP-1 lors de la DDR et de l'activation transcriptionnellesont

distincts. La reconnaissance des cassures de l'ADN se fait via les domaines en doigt de Zn
contenus dans le domaine de liaison à l'ADN N-terminal (DBD) de PARP-1. Ils interagissent en
coopération avec les domaines riches en (WGR) et catalytiques à l'extrémité C-terminale pour
déclencher l'activation rapide et transitoire de PARP-1 nécessaire pour réparer les lésions.
2-L’activité des PARP-1 sur la chromatine pendant la reparation et
la transcription de l’ADN
Le passage entre l'hétérochromatine condensée et les régions euchromatiques relaxées est
strictement dépendante des modifications de l'ADN et des modifications épigénétiques des
histones.

• De plus en plus de preuves montrent que l'influence de la PARylation sur la dynamique de la

chromatine dépend largement sur les modifications des schémas
épigénétiques :directement, en ciblant l'ADN et les histones ; et indirectement, en modifiant
les enzymes épigénétiques de manière covalente et non covalente (tableau 1).
 3-PARP-1 et les modifications épigénétiques de l’ADN
• Les motifs de méthylation de l'ADN sont introduits par l'action des(DNMT) et
éliminé par dilution de la 5-méthylcytosine (5mC) lors de la réplication de l’ADN
(déméthylation passive de l'ADN) ou par l'activité hydroxylase des enzymes de la
famille des dix-onze translocases (TET) via la production itérative de 5-
hydroxyméthylcytosine (5hmC), 5-formylcytosine (5fC) et 5-carboxylcytosine (5caC)
(déméthylation active de l'ADN).

4-1Méthylation de l’ADN

L'interaction entre la PARylation et la méthylation de l'ADN a été principalement caractérisée

dans le contexte de l'expression des gènes. L'inhibition de PARP-1 induit une hyperméthylation
de régions régulatrices non méthylées au niveau des promoteurs de gènes (par exemple, îlot
CpG) et des loci imprimées. L'occupation de ces régions par PARP-1 soutient l'hypothèse que la
PARylation contribue au maintien des états non méthylés en supprimant l'activité de DNMT1.

• Aucune information n'est disponible surl'effet de la PARylation sur l'ADN méthyltransférase

de novo DNMT3A et DNMT3B.
 3-PARP-1 et les modifications épigénétiques de l’ADN
• L'inhibition spécifique du locus de DNMT1 a été attribuée à la présence d'isoformes
automodifiées de PARP-1 ou de facteurs de transcription PARylés dont le facteur isolant
CCCTC-binding factor (CTCF), qui est une cible directe de la PARylation covalente et non
covalente . De plus, l'interaction du CTCF avec la protéine PARP-1 stimule son activité
enzymatique indépendamment des dommages de l’ADN. Considérant que le CTCF reconnaît
préférentiellement les régions d'ADN non méthylées , l'activation directe de PARP-1
représente l'un des mécanismes limitant l’action de DNMT1 dans les régions liées au CTCF.

3-2 Déméthylation et hydroxyméthylation de l’ADN

• En plus d'empêcher l'hyperméthylation de l'ADN dans des loci spécifiques, l'inhibition

persistante de DNMT1 dépendante de la PARylation peut induire une déméthylation passive
généralisée de l'ADN.. Ce phénomène a été observé suite à une hyperactivation prolongée de
PARP-1 en raison de la surexpression de CTCF .

• la déméthylation active de l'ADN peut également être envisagée, considérant que l'activité de
PARP-1 peut influencer les enzymes ADN hydroxylases, en particulier TET1, à différents
niveaux. PARP-1 soutient l'expression de TET1 et peut la modifier de manière covalente et
non covalente
 4-PARylation et modification des histones
• Les réactions de méthylation de l'ADN sont suivies de la modification des histones . La
méthylation et l'acétylation sont les modifications les plus étudiées des protéines centrales
de l'histone (H2A, H2B, H3 et H4) dans le cadre de la régulation transcriptionnelle. Pourtant,
beaucoup d'autres modifications ont également été identifiées, notamment l'ubiquitination,
la phosphorylation,SUMOylation, et PARylation elle-même .

4-1Histone H1

Suite à l'activation maximale de l'activité PARP-1 pendant l'endommagement de l'ADN, H1 est

PARylé de manière covalente dans différents résidus d'acides aminés à travers la protéine
entière.

• Les expériences in vitro et in vivo indiquent principalement que la PARylation favorise le

déplacement de H1 dela chromatine pour favoriser la relaxation de la chromatine,
permettant le recrutement de facteurs de réparation de l'ADN. Fait intéressant, l’interaction
entre H1 et PARP-1 est également pertinent au cours du processus de signalisation associé à
la DDR en régulant le recrutement de la chromatine de la kinase ataxia telangiectasia
mutated (ATM). L'isoforme H1.2 protège la chromatine d'une charge et d'une activation ATM
aberrantes dans des conditions basales.
 4-PARylation et modification des histones
• En cas de dommages à l'ADN, PARP-1 modifie de manière covalente H1.2 au niveau du résidu
S188, le déplaçant de la chromatine pour favoriser un recrutement et une activation
efficaces de l'ATM kinase au niveau des sites de dommages à l’ADN
4-2 . Histones H2A/H2B et leurs variantes
• Au cours de l'adipogenèse, la PARylation de l'histone H2BE35 par PARP-1 inhibe la
phosphorylation médiée par l'AMP kinase du résidu adjacent H2BS36, qui estnécessaires à
l'expression des gènes pro-adipogéniques .

Dans la famille des variants de l'histone H2A, H2AX agit comme un accepteur de l'ADP-ribose
pendant la DDR. H2AX-E141 PARylation évite la formation d'ADN DSB et la signalisation
associéedans le cadre de l'activation du BER.

5.3. Histone H3

La triméthylation de l'histone H3K9 (H3K9me3) est couplée à des niveaux élevés de 5 mC pour
favoriser la condensation de la chromatine et répression transcriptionnelle; d'autre part, les
régions dépourvues de méthylation de l'ADN sont associées au silencing génique lorsqu'elles
sont enrichies en H3K27me3 ou avec une transcription active lorsqu'il est occupé par H3K4me3
et H3 acétylation
4-PARylation et modification des histones

• . Histone H4

• L'interaction entre la PARylation et l'histone H4 est

fonctionnellement pertinente pour lacapacité de
H4 à stimuler l'activation prolongée de PARP-1
dans le contexte de réglémentation de l'expression
génique

• . De plus, il a également été démontré que des

résidus de H4 participent à la structure de l'histone
lorsqu'il est PARylé. Par exemple, la PARylation de
H4S1 peut être introduite même dans la présence
de diméthylation H4R3 et d'acétylation H4K5 ou
H4K8
5-Mécanismes épigénétiques dans la thérapie du cancer basée
sur les PAPRi
L’utilisation de PARPi dans le traitement du cancer est une approche
ciblée, efficace pour le traitement contre sous-types de cancer du
sein,de l’ovaire, du pancréas et de la prostate avec des gènes BRCA1/2
défectueux, généralement identifié comme ayant le « phénotype
BRCAness » . Basé sur les effets pléiotropes de PARP-1 dans le contrôle
des modifications de la chromatine, plusieurs études précliniques ont
étudié comment les niveaux et l'activité des enzymes épigénétiques
peuvent modifier la sensibilité et la résistance des PARPi.
5-Mécanismes épigénétiques dans la thérapie du cancer basée
sur les PAPRi
5-Mécanismes épigénétiques dans la thérapie du cancer basée
sur les PAPRi
5-Mécanismes épigénétiques dans la thérapie du cancer basée
sur les PAPRi
CONCLUSION
CONCLUSION
Références bibliographiques
5-Mécanismes épigénétiques