Protéomique

&
métabolique
appliquée
TD2
Elaborée par:
Dr. Mariem YAHYA
 Techniques de purification et d’analyse des protéines

Solubilisation-extraction
Précipitation
 Précipitation isoélectrique
 Précipitation par des sels
Techniques électrophorétiques
 Electrophorèse sur papier
 Electrophorèse sur gel de polyacrylamide
Techniques chromatographiques
 Échange d’ions
 Exclusion/diffusion
 Affinité

Techniques immunoenzymatiques
Introduction
 Les extraits biologiques sont des ensembles complexes comprenant souvent des
dizaines de milliers de biomolécules différentes, chacune en proportions
extrêmement variables, allant de 109 à 1023 exemplaires.
 Si on considère les biomolécules sur un plan qualitatif, elles présentent des
propriétés physico-chimiques variables :
 solubilité
 charge électrique
 taille
 capacité à lier un ligand
 polarité (hydrophobicité / hydrophilie)
 Certaines de techniques ne sont employées que pour la purification des protéines,
d’autres sont également applicables à la purification des oligo/polysaccharides
ou des acides nucléiques.
Les étapes de purification des biomolécules

Préparation d’un solubilisation

extrait brut

Enrichissement de
la fraction Précipitation
biologique

Purification finale
Techniques
chromatographiques
Techniques chromatographiques

 Une technique inventée par un botaniste en 1950

 Elle se base sur la séparation des biomolécules sur 2 phases:

 Phase stationnaire
 Phase mobile

Les différences entre les diverses chromatographies viennent de la nature des

phases fixes et mobiles
Techniques chromatographiques
La chromatographie échangeuse d’ions
La chromatographie échangeuse d’ions
La chromatographie échangeuse d’ions
La chromatographie échangeuse d’ions
La chromatographie échangeuse d’ions