Exercice 1 :

Définir les termes suivants : protéome, focalisation isoélectrique IEF, salting-in, salting-out
Exercice 2 :
Quel est le principe de l’électrophorèse bidimensionnelle ?
Exercice 3 :
Electrophorèse bi-dimensionnelle (2D).
a) La première dimension de la 2D est l’Electrofocalisation (IEF). Donner le
principe.
b) Pourquoi le SDS est-il à proscrire pour réaliser l’IEF ? Quels sont ses effets sur
une protéine ? Quelle est la quantité maximale de SDS peut se fixer sur 2 g de
protéines ?
c) L’IEF est réalisée dans un gradient de pH créé à l’aide d’ampholytes de faible
masse molaire. Un ampholyte A, de pHi acide, comporte 2 groupements d’acide
carboxylique et 1 groupement amine. Un ampholyte B, de pHi basique, comporte 2
groupements d’acide carboxylique et 1 groupement amine.
- Quels sont les charges nettes de A et B lorsqu’ils sont placés en milieu
neutre ?
- Si la formule de l’ampholyte A est :
Son pHi=6, écrire sa formule à pH=7
- Dans un champ électrique, quel est le sens de migration de A et de B?
- On soumet à une électrophorèse à pH=6 un mélange d’acide L-glutamique, de
L-Leucine et de L-Lysine, dont les points isoélectriques sont respectivement 3,22,
5,99 et 9,74. Vers quels pôles migrent ces acides aminés ?
d) Donner le principe de la 2eme dimension
Exercice 4 :
Vers quel pôle migrera les protéines suivantes dans un champ électrique :
-sérum albumine (pHi=4.9) à pH=8
-uréase (pHi=5) à pH=3 et 9
-ribonucléase (pHi=9.5) à pH=4.5 ; 9.5 et 11
-pepsine (pHi= 1) à pH 3.5 ; 7 et 9.5
Exercice 5:
Parmi les protéines suivantes : ovalbumine (pHi= 4.6), cytochrome c (pHi=10.65) et
lysozyme (pHi= 11), quelles sont celles qui sont retenues par la carboxylméthyl-cellulose
(CM-cellulose) à pH 7 ? A quel pH et dans quel ordre seront éluées ?
Exercice 6 :

On donne un mélange de quatre protéines A, B, C, D. L'électrophorèse réalisée sur ce

mélange à pH =7 a donné le résultat suivant:
Le calcul du pHi de ces quatre protéines a donné les valeurs suivantes: pHi = 5.1, pHi = 6.2,
pHi = 8, pHi =8.5.
1- Indiquer le pHi correspondant à chaque protéine.
2- Ce mélange est déposé au sommet d'une colonne de résine échangeuse d'anions éluée
par un tampon de pH 7. Parmi les quatre protéines données, quelles sont celles qui
s'accrochent la plus fortement à la résine.
3- Comment doit-on faire varier le pH afin de faciliter la libération de ces protéines ?
Justifier votre réponse.
4- Indiquer l'ordre d'élution des protéines. Justifier votre réponse.