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Morelle Lucie
Coquette Rose
Quelques caractéristiques du
génome humain.
La taille du génome humain
est de 3 milliards de paires de
bases repartis sur 22 paires de
chromosomes plus 2
chromosomes sexuels. Mais
aucun gène n’est propre à
l’espèce humaine. Grâce aux
séquençage, le lien entre les
gènes et le phénotype s’est
révélé plus complexe
qu’imaginé auparavant.
Une origine multiple de l’ADN cellulaire.
Le génome d’un individu est constitué de l’ADN nucléaire, qui constitue
l’information génétique de l’individu, et l’ADN mitochondrial, fabriqué grâce à
l’ADN des mitochondries situé dans le cytoplasme de l’individu.
PCR : (Polymerase Chain Reaction) Technique permettant l'amplification in vitro
d'une séquence d'ADN donnée, par la répétition de cycles de réplication d'ADN.
Chaque cycle est constitué de trois étapes, nécessitant chacune une température
différente : dénaturation, hybridation avec les oligonucléotides de synthèse
spécifiques de la séquence cible et qui servent d'amorce, élongation de la chaîne
nucléotidique.
La PCR permettant de multiplier de l'ADN en grande quantité, elle ouvre la voie à de
très nombreuses applications : le diagnostic, le marquage, le clonage et le
séquençage de gènes.
L'amplification de fragments d'ADN in Vitro : la PCR
En 1977, Frederick Sanger invente une méthode de séquençage de l’ADN par
synthèse enzymatique. L’ADN polymérase va progressivement synthétiser un
nouveau brin en utilisant des nucléotides normaux ou fluorescents. D’abord utilisée
pour des petits fragments d’ADN, cette méthode sera ensuite progressivement
améliorée pour gagner en rapidité et analyser des génomes entiers. Les premiers
génomes entiers ont été séquencés avec la méthode de Sanger.
La méthode de séquençage de
Sanger
La méthode a pu être automatisée dans des séquenceurs analysant
100 séquences à la fois. Les séquences obtenues peuvent se
présenter comme une succession de pics de fluorescence. L’ordre
des pics donne la séquence.
Exemple de séquence.
Séquencer un génome consiste à connaître
l'enchaînement des bases de l’ensemble de l’ADN
contenu dans les cellules d’un organisme.