Module de cytologie

Projet1:la microscopie photonique a fond clair

Principe de fonctionnement et domaines d’application

Les membres de sous groupe G6:

• Tanadie malouka
• Khalef nardjes
• Lachemi rayhane
Le microscope photonique à

fond clair

Principe de fonctionnement & domaines

d’application
La microscopie est un ensemble de techniques d’imagerie qui
permet d’obtenir une image agrandie et de bonne qualité
d’objets de très petites dimensions afin qu’ils soient observable
par l’oeil humain
Tout ça grâce au pouvoir de résolution qui lui permet de
distinguer les détails . Il peut être caractérisé par l’angle ou la
distance minimale (limite angulaire et linéaire ) qui doit séparer
deux points contigus pour qu’ils soient correctement discernés et
peut aussi de façon équivalente être caractérisé Par la fréquence
spatiale maximale que le système permet de mesurer ou restituer
Il est alors exprimé en cycles par milimetre (cu/mm) ou en paires
de ligne par milimetre (pl/mm)
Les longueurs d’ondes utilisées limitent le pouvoir séparateur des
microscopes à environ 0,2μm
Le grossissement quant à lui peut atteindre 1500x
Pour un microscope optique de 1 cm de
diamètre, le pouvoir de
résolution théorique est d'environ 14
secondes d'arc (3,8×10-3 degré).
Pour un échantillon situé à 1 cm.
On a deux types de microscopies .
• La microscopie photonique
• La microscopie électronique
Il existe plusieurs variété de microscopes
optique (photonique)
Les microscopes à fond clair, à fond noir, à
constracte de phase, à fluorescence..........
La microscopie optique à fond clair :
Ce dernier permet d’étudier des cellules
fixées et colorées (tuées et traitées en vue
d’un examen)
Et les observer sur une image foncée avec
un fond brillant
La description du microscope
photonique
• I.1. Partie mécanique :
• Le pied (14): C'est la partie sur laquelle repose le microscope. A l'intérieur du
pied est logée une ampoule
(13) émettant des rayons lumineux qui traversent la préparation. Sur la partie
avant du pied se trouve
l'interrupteur et un voyant témoin. Sur la partie latérale un curseur permet de
régler l'intensité lumineuse
de la lampe.
• La potence (3) est l'élément qui est solidaire avec le pied et qui porte la platine
(9).
• La platine est la partie plane sur laquelle repose la préparation à observer. La
platine est évidée en son
centre pour permettre le passage des rayons lumineux. Elle est équipée d'un
chariot (10) mobile qui permet
de maintenir et déplacer la préparation. Les déplacements horizontaux en tout
sens de la préparation
maintenue sur le chariot se font grâce à une vis de déplacement (6) située
latéralement et en dessous de la
platine.
• La platine est mobile et peut effectuer des mouvements verticaux. Le réglage de
la hauteur de la platine est
commandé par des vis situées sur la potence :
• une vis macrométrique (4) qui permet un mouvement rapide et grossier
• une vis micrométrique (5) qui permet un mouvement faible et précis
• C'est en réglant la hauteur de platine que l'on fait la mise au point c'est à dire
que l'on règle la netteté de
l'image de l'objet que l'on observe
• I.2. Partie optique :
• Elle est composée de trois systèmes optiques : les objectifs(2), les oculaires(7), le
condensateur ou condenseur (12).
• Les objectifs (2), ils sont fixés à la potence par un système revolver (8). On peut
très facilement au cours des observations microscopiques changer d'objectifs: il
suffit de tourner le revolver et d'enclencher un autre
objectif.
• La plupart des microscopes sont équipés de plusieurs objectifs. La caractéristique
principale d'un objectif est son grandissement ou grossissement. Il est indiqué sur
l'objectif (x10; x40; x100).
• Les oculaires (7) : Les microscopes actuels sont binoculaires c'est à dire qu'ils
possèdent deux oculaires. Ils sont portés par le porte oculaire (1). C'est par
l'intermédiaire des oculaires que l'on observe l'image de la préparation.
L'écartement des oculaires est réglable. Les oculaires comme les objectifs sont
caractérisés par leur grandissement ou grossissement. Celui-ci est indiqué sur les
oculaires : (x10, x1)
• Le condenseur ou condensateur ( 12)
• Composé d'une ou plusieurs lentilles, le condenseur (12) concentre les rayons
lumineux provenant de l'ampoule insérée dans le pied du microscope.

• Le diaphragme : placé sous le condenseur, il permet de régler la quantité des

rayons lumineux arrivant sur la préparation. Il est ouvert ou fermé grâce à une
manette (11).
• L'ensemble condenseur et diaphragme peut être réglé en hauteur grâce à une vis
située sur la potence.
Le principe de fonctionnement du microscope
photonique à fond claire

•Le microscope optique à fond claire

fonctionne par transmission de
lumière blanche , l’echantillon éclairé
par-dessous est traversée par des
photons qui atteindront ensuite le
système optique du microscope ce
qui permet le grossissement.
Les conditions d’observation du microscope
photonique

Pour observer une observation en microscopie deux conditions sont

requise : l’épaisseur de l’échantillon et le contraste .
 l’épaisseur de l’échantillon : pour une observation par transmission
l’échantillon doit présenter une faible épaisseur afin de permettre le
passage du faisceau incident de photons ou d’électrons d’où la
nécessité de couper l’échantillon . L’épaisseur convenable en MP est
de 2 à 10 Um et de 300 à 500 A° en ME
 le contraste : l’observation par transmission n’est possible que si
certains régions de la coupe absorbent les photons ou les électrons
plus que d’autres : c’est l’effet contraste . En règle générale les
constituants cellulaires présentent des contrastes naturels faibles ;
l’utilisations de certains artifices tels que des montages optiques qui
amplifient les contrastes naturels ( MP à contraste de phase…) ou des
colorants sélectifs (MP) ou encore des sels de métaux lourds (ME) est
nécessaire .
 les procédés d’analyse d’échantillons
cellulaires au microscope photonique :

• Il permet de visualiser des objets très fins, montés dans une goutte d’eau ou de
liquide coloré sur une lame porte objet et recouvert d’une lamelle couvre objet
très fragile, ou des coupes fixées et colorées selon un protocole qui sera présenté
ultérieurement . La lumière qui traverse l’objet remonte dans les lentilles de verre
(objectif et oculaire) ce qui agrandit l’objet.
• L’observation au microscope passe par les étapes suivantes :
•  Préparation de l’observation : la préparation à observer est placée sur la
platine et centrée pour que la lumière traverse le tube optique donnant un rond
lumineux dans l’oculaire.
•  La mise au point : le petit objectif (faible grossissement) est placé dans l’axe du
tube optique. Il faut ensuite regarder dans l’oculaire et, à l’aide de la vis
macrométrique de mise au point, remonter le tube jusqu’à l’obtention d’une
image nette.
•  Exploration de la préparation : la préparation est déplacée délicatement
jusqu’à trouver l’objet recherché.
• Changement de grossissement : il faut placer la zone à agrandir au centre de la
platine, puis changer d’objectif en tournant le barillet, sans toucher au réglage
précédent. Le changement d’objectif se fait toujours du plus faible au plus fort
grossissement. La nouvelle mise au point se fait seulement par la petite vis. Que
faire pour ne pas endommager les préparations ?
• 1-Toujours commencer l’observation avec l’objectif le plus faible.
• 2- N’utiliser la vis macrométrique (la grosse) qu’à faible grossissement.
• 3- Fixer la lame avec les valets : si l’un d’eux est manquant, ne pas incliner le
microscope
• 4- Ne jamais descendre le tube sans surveiller la platine et la lame en regardant
sur le côté.
• 5- Aux grossissements supérieurs, n’utiliser que la vis micrométrique.
• 6- Si la vis semble bloquée, il faut s’assurer que l’objectif n’appuie pas sur la lame
Réalisation de lames biologiques