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I. Dfinition
Le footprinting est une mthode utilisant l'interaction des protines avec
l'ADN. Elle permet de dsigner les sites de liaison des
facteurs protiques au niveau de l'ADN. Ces facteurs peuvent tre :
des complexes hormones -rcepteurs se liant leur
lments de rponse
des facteurs de transcription se liant des enhancers ou
des silencers des gnes eucaryotes ( squence cis-
rgulatrices et facteurs trans rgulateurs)
II. Historique
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III. Principe
Dans cette technique, nuclases comme DNAse I est utilis qui
dgrade molcule d'ADN. Nuclases ne peut pas dgrader l' ADN si elle est
limite par une protine. Ainsi , cette rgion est protge contre la
dgradation par les nuclases.Cette rgion d'ADN protge est appele
l'empreinte.
IV. Protocole
Diffrentes possibilits existent pour raliser un footprint. Ici, nous
ntudierons que le footprint in vitro la DNase I.
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La molcule que l'on va suivre est le fragment dADN marqu une
seule extrmit. Il existe diffrentes possibilits pour faire ce marquage
unilatral mais, gnralement, ce marquage est ralis par PCR en
utilisant un oligonuclotide marqu en 5. Le fragment est incub en
prsence dextrait nuclaire (ou dune protine purifie) puis soumis une
digestion mnage par la DNase I.
Un tmoin est ralis en incubant le fragment sans E.N. avec la DNase
I. Lanalyse est effectue sur gel de polyacrylamide en conditions
dnaturantes (gel de squence) et le profil obtenu permet de dterminer
les rgions qui ont t protges de laction de la DNaseI par lextrait
nuclaire ou la protine purifie. Si les fragments utiliss sont reconnus
par plusieurs facteurs on pourra mettre en vidence des Footprint
multiples. Pour dterminer les positions exactes des squences protges,
une raction de squenage (type Maxam and Gilbert) est ralise et
dpose en parallle sur le gel.
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expliquer footprinting comment cette protine se liant l' ADN
remplit sa fonction.
tant donn que l'ADN est utilis pour footprinting identifier les
squences spcifiques de l'ADN o une protine se lie, la technique
est susceptible d'tre d'une utilit continue dans la recherche
gntique. Par exemple, l'ADN est susceptible d'empreinte tre
fortement utilis pour caractriser la fonction des protines
identifies dans le projet du gnome humain et d'autres projets du
gnome, ce qui en fait un lment important de la bote outils d'un
gnticien molculaire.
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Conclusion
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