Examen de biochimie I BIR1250 (partie Ghislain) 13 juin 2018

Nom et prénom : Orientation :

Question TP (2 points)
Les graphes représentent le volume de CO2 produit après l’addition de glucose, galactose ou lactose à une
suspension de levure (durée de l’incubation à 37°C = 4 heures).
a) A quel sucre correspond les graphes suivants ?

CO2 A CO2 B CO2 C

(ml) (ml) (ml)
5- 5- 5-

0 1 2 3 4 0 1 2 3 4 0 1 2 3 4
Temps d’incubation (h) Temps d’incubation (h) Temps d’incubation (h)

b) D’après le graphique ci-dessous, pouvez-vous savoir si la levure fermente ou respire ? Justifiez votre
réponse

CO2
(ml)
+ NaN3 :

– NaN3

0 1 2 3 4
Temps d’incubation (h)

c) Que pourrait-on mesurer pour savoir si la levure fermente ou respire ?

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Question TP (deux points)

Dans le but de doser l’activité de la phosphatase alcaline de veau (CIP) , 5 mL de para-
nitrophénylphosphate 2 mM dans un tampon Na+/glycine, pH 9,5 sont incubés à 30°C. Après deux minutes,
0,1 mL d’enzyme (0,2 mg mL-1) est ajouté pour démarrer la réaction. Après deux, quatre et six minutes, 1
mL est prélevé et ajouté à 1 mL de NaOH 1M afin d’arrêter la réaction. Les valeurs d’absorbance à 405 nm
sont respectivement de 0.2, 0.4 et 0.6 ; on supposera que cette valeur est de 0.0 au temps zéro.
- Résumez les opérations de l’expérience et les résultats sous la forme d’un tableau. Vous disposez d’une
solution tampon concentrée 5 fois et d’une solution de substrat à 10 mM.
- Calculez l’activité spécifique de la CIP en vous basant sur l’observation que l’absorbance à 405 nm
d’une solution de para-nitrophénol 100 µM, ajoutée à un volume égal de NaOH, est de 1,12.
- Le KM de la réaction est deux fois plus élevé en présence d’orthovanadate 40 µM. Quelle est la valeur du
Ki ?

Question sur les TP (2 points)

En vous basant sur ce qui a été fait lors des séances de laboratoire, répondez aux trois questions suivantes :
a) Pourquoi est-il plus simple de calculer une vitesse de réaction enzymatique à partir de la formation
du produit plutôt qu’à partir de la disparition du substrat ?
b) Pourquoi est-il important de vérifier que la quantité de substrat hydrolysé par la CIP après 9 min soit
faible (~5%)
c) Calculez le KM et le Vmax à l’aide du tableau suivant
[S] (mM) v0 (mM. s-1)
0.1 0.34
0.2 0.53
0.4 0.74
0.8 0.91
1.6 1.04
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Nom et prénom : Orientation :

Question sur les TP (2 points)

Pour préparer de la crème glacée sans lactose, les fabricants ajoutent de la lactase au lait. Un litre de lait contient 50 g
de lactose (masse molaire = 340 g . mol-1). L’activité de la solution de lactase commerciale est de 104 U/ml (1 U = 1
µmol . min-1)
a. Quel est le volume minimal de la solution d’enzyme à ajouter à 100 ml de lait pour avoir une hydrolyse complète
du lactose en 15 min ?
b. Quelle est la concentration de la lactase (mg/ml), l’activité spécifique étant de 120 µmol . min-1. mg-1 ?
c. Pensez-vous que la vitesse de réaction initiale atteigne la Vmax , le Km étant 3 mM? Justifiez.

Erreurs et distraction au niveau des TP (2 points)

a) Le dosage de Bradford utilisait la BSA comme standard. Le laboratoire n’avait plus de BSA et j’ai
utilisé une autre protéine sur le conseil d’un condisciple. Ai-je bien fait ?
b) Je dois incuber mon enzyme pendant une heure à 37°C mais mon train part dans 35 min. Pour
réduire la durée de réaction par deux, je double la quantité d’enzyme. Est-ce correct ? Et si oui, dans
quelles conditions expérimentales (réponse en termes généraux) ?