Le dosage de la ferritine

Formation des Assistantes médicales

mars 2014

Dr M.F. Rossier
Institut Central (ICHV)
Service de Chimie
clinique & Toxicologie

mars 14
 La ferritine

. Macromolécule (PM > 440 kD)

. Composée de 24 sous-unités:
H (Heavy) acides et L (Light) basiques

. > 20 isoformes décrites avec des

distributions tissulaires spécifiques
(foie, rate, moelle, placenta, tumeurs,…)

. Noyau contient jusqu’à 2500 ions Fe3+

Taux circulants (10-400 µg/L) reflètent

les réserves en fer de l’organisme
MAIS
Varient en cas d’inflammation (phase
aigue), en présence de certaines
tumeurs, lors de nécrose cellulaire ou
de perturbation de l’érythropoïèse.

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 Les valeurs de ferritine

Concentrations utiles (en µg/L):

-Valeurs de référence 10 – 400 (H > F)

-Déplétion en Fe < 20
-Carence martiale < 12
-Surcharge en Fe > 400*

* Exclure syndrome inflammatoire, nécrose ou Ca

Chez la femme:
-Grossesse  diminution
-Ménopause  augmentation

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 Le dosage de la ferritine par immunodosage

2013: 25’571 dosages de

ferritine à l’ICHV

Cobas e-411

Cobas e-601

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 Pré- et post-analytique

Dosage effectué sur:

-Sérum (recommandé)
-Plasma (possible, mais nécessite une correction > 10%)

Stabilité:
-7 jours à 4 °C
-12 mois à -20 °C

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 Mesurer des molécules, c’est comme

Compter sa monnaie ….
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 … dans l’obscurité
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 Méthodes analytiques

Anticorps spécifique
Spectromètre de masse
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 Les immunodosages

2 modes possibles:
- Compétition
- Sandwich*

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 Structure des immunoglobulines

150 KDa

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 Principe du dosage immunométrique (en sandwich)

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 Principe du dosage immunométrique (en sandwich)

+ +

Analyte
(sample)

1st Antibody 2nd antibody (labeled)

(in excess)

+
Separation

Bound fraction,
complex Free fraction
sandwich

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 ELISA en méthode sandwich

substrate
enzyme/ chromogene
streptavidine
2nd Ab,
biotinylated
colored
product

hormone
1st Ab

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 Le système « elecsys » (électrochimiluminescence)

620 nm

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 Immunodosage avec détection par ECL

Avantages par rapport à l’ELISA:

1) On peut répéter la mesure de

nombreuses fois car le complexe de
Ru(bpy)3 est régénéré à chaque cycle
Amplification du signal
 Augmentation de la sensibilité

2) On contrôle la durée du signal

 Augmentation de la précision

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 Courbes de calibration et domaine de dosage

« sandwich »
B0
Specific binding (B/B0)
(= detected signal)

B=50%

NSB

EC50
Analyte concentration (log M)

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 Profil de précision et domaine de dosage

Ferritine : 0.5 – 2000 µg/L

Méthode A
CV Limite tolérable
(%)
d’imprécision

4%

Domaine d’analyse pour méthode A

Concentration de l’analyte

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 Limitations des immunodosages

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 L’effet crochet dû à un excès d’analytes

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 Amélioration par une étape de lavage intermédiaire

En cas de suspicion:
- Diluer l’échantillon
- Effectuer un lavage avant
le 2ème anticorps

Ferritine: pas d’effet crochet

observé jusqu’à 100’000 µg/L

wash

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 Les anticorps interférents

Divers types d’interférence par anticorps:

- Anticorps hétérophiles (ex. HAMA: human anti mouse)

- Facteurs rhumatoïdes (anti IgG)
- Autres anticorps (ex. anti-streptavidine, anti-Ru)

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 Présence d’anticorps hétérophiles (HAMA) : ~ 4%

Surestimation de l’analyte
mAb

Ag

mAb

HAMA

Anticorps endogènes hétérophiles

Adapted from ahajournals.org
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 Anticorps hétérophiles (HAMA)

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 Prévention des interférences par HAMA

Use chimeric or humanized

antibodies for the assay

Y
Add non immune mouse antibodies

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 Questions

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