1ére Séance :

I. Comment travailler dans un labortoire de microbiologie ;

Pour travailler dans un laboratoire de microbiologie, certaines règles doivent être respectées :
 Interdiction de boire ou de manger.
 Obligation de placer les matériels sous la table de travail.
 Port de blouse, cheveux longs attachés.
 Obligation de désinfecter la place de travail.
 Obligation de se laver les mains avant et après les manipulations.
 Obligation de travailler en position stable.
II. Préparation de milieu du culture :
La 1ére séance est consacré pour préparer un milieu de culture, afin de savoir comment
comporter ou travailler dans un laboratoire de microbiologie.

C’est quoi un milieu de culture ?

Un milieu de culture est une préparation, contenant des substances (biologiques ou

chimiques) qui reproduit un environnement (nutriments, pH, pression osmotique) permettant
à certains types de micro-organismes de se multiplier

Tout d’abord , on a le milieu julosé (solide,et transparent)

plate court agar agar(PCA) , qui constitue de :
 5g de tryptone
 2,5g de yeast extract
 1g de glucose
 12g d’agar –agar
 pour un litre d’eau, on prend 20,5g de PCA
 donc Pour 800ml, on prend 16,4g de PCA :
 Nous avons pris 16,4g de PCA à l’aide d’un spatule, et 800ml d’eau distillé à l’aide d’une
éprouvette graduée (pour préciser).
 On les verser dans un erlenmeyer.
 Après mélange, on remarque qu’on a des petites grains dans le mélange c’est le julose (agar
agar), donc pour les dissoudre on met l’erlenmeyer qui contient plus de mélange un champ
magmatique assure l’agitation pour que le julose ne pas caraméliser, dans un plaque de
chauffante.
 Après ébullition, on couvert l’erlenmeyer avec le coton et l’aluminium pour stériliser le milieu
(c’est à dire enlever tout forme de vie)
III. Stérilisation de milieu :

On stériliser le milieu à chaleur humide, (avec la chaleur de vapeur obtenue par chauffage de l’eau) sous
pression dans un autoclave à 120 pendant 20minutes.

Après que le milieu devient stérile, on le verse dans des boîtes plates et rondes en plastique, appelées
boîtes de de pétri.

 La manipulation stérile :
Dans une place de travail bien désinfecté et organisé.
 On met :
 au centre : un bec benzène allumé avec une flamme bleue.
 à gauche : le matériel sur lequel nous avons travaillé (les boîtes de pétri).
 à droit : le matériel avec lequel nous avons travaillé (erlenmeyer contenant le milieu de
culture stérile).
 On prend les 5 boîtes de de Petri (deux pour chaque individu et un pour le binôme),et on
note en bas La première lettre du noms et prénoms, le groupe, et la date de manipulation
 Après on ouvre l’erlenmeyer avec les deux derniers doigts de la main (l'auriculaire et
l'annulaire) et la paume de la main, ensuite on prend l’erlenmeyer avec les doigts restants et
on le flambe, puis on verse le mélange dans les boîtes de de Petri.
Tout cela près de la flamme pour éviter toute forme de contamination.

Enfin, on met les boîtes au réfrigérateur.