pratique quotidienne abc

Ann Biol Clin 2005 ; 63 (3) : 339-44

Le dosage de la CRP ultrasensible

par immunoturbidimétrie Fumouze
et immunonéphélémétrie Dade Behring

B. Onraed
B. Hennache
Laboratoire de biochimie,
Hôpital cardiologique, Lille
<b-onraed@chru-lille.fr>
Copyright © 2021 John Libbey Eurotext. Téléchargé par Benyoussef le 29/09/2021.
Résumé. Bien que récemment contestée par certains auteurs, la relation entre
le taux de CRP ultrasensible et le risque cardiovasculaire potentiel a fait l’objet
de plusieurs études aux États-Unis et en Europe. Ce travail présente une com-
paraison de la méthode de dosage de la CRP ultrasensible Orion Diagnostica,
commercialisée par Fumouze et adaptable sur Hitachi 911, par rapport à la
méthode Dade Behring sur BN II utilisée dans notre laboratoire. Les études de

répétabilité et de reproductibilité réalisées pour la méthode Fumouze sont

acceptables pour les deux niveaux de concentrations testés. L’étude de linéarité
est moins satisfaisante. Cent trente-quatre échantillons sériques ont été analy-
sés et montrent une bonne corrélation entre les méthodes dans la tranche de
résultats inférieurs à 6 mg/L.
Mots clés : CRP ultrasensible, immunoturbidimétrie, immunonéphélémétrie

Abstract. Increased concentrations of high sensitivity C-reactive protein are

Article reçu le 10 mai 2004,
accepté le 22 février 2005
associated with increased risk for coronary heart disease. We report here a
comparison of Fumouze hs-CRP turbidimetric method on Roche Diagnostics
Hitachi 911 with Dade Behring BN II nephelemetric method. 134 samples
were analysed. Within-run imprecision and between-run CV were good. Linea-
rity was less satisfactory. Correlation study showed that without exceeding the
maximum value of 6 mg/L, the hs-CRP method presented a good agreement
with hs-CRP BN II method.
Key words: CRP high sensitivity, immunoturbidimetry, immunonephelemetry

De nombreuses équipes ont travaillé ces dernières années
sur l’intérêt de la CRP ultrasensible (CRPus) dans les
maladies cardiovasculaires, l’inflammation étant un méca-
nisme clé du processus pathologique de l’athérosclérose.
La relation entre le taux de CRP ultrasensible chez le
patient et le risque cardiovasculaire potentiel a été démon-
trée dans plusieurs études aux États-Unis et en Europe
[1-3]. Plusieurs publications récentes sont venues tempé-
rer l’engouement pour l’utilisation de la CRP dans le
domaine prédictif [4-7]. Quoiqu’il en soit, son usage quo-
tidien nous dira si la CRPus mérite les espoirs qu’elle
suscite. En pratique, l’utilisation de ce marqueur prédictif
de risque nécessite de disposer au laboratoire d’une tech-
nique de dosage particulièrement performante, tant au
niveau de la précision que de la sensibilité des dosages.
Ce travail présente une comparaison de la méthode de
dosage de la CRP ultrasensible Orion Diagnostic commer-
cialisée par Fumouze et adaptée à l’Hitachi 911 par rap-
port à la méthode Dade Behring sur BN II.
Matériel et méthodes
Échantillons
Les échantillons proviennent de bilans biologiques pres-
crits par les services cliniques et n’ont pas fait l’objet de
prélèvements de tubes supplémentaires. Cent trente-quatre
échantillons sériques ont été recueillis, centrifugés 10
minutes à 3 500 tours/min et conservés à + 4 °C ou à
– 20 °C avant d’être analysés selon les deux méthodes,
Dade Behring (BNII) et Fumouze (Hitachi 911). Le
contrôle Ultrasensitive CRP control Fumouze (réf. 2700) a
été utilisé dans chaque série de dosages. La valeur cible
est de 3 mg/L.

Ann Biol Clin, vol. 63, n° 3, mai-juin 2005 339

 pratique quotidienne
Réactif Fumouze Orion sur automate Hitachi 911
Le coffret Ultrasensitive CRP Orion Diagnostica (réf.
2403), commercialisé par le laboratoire Fumouze Division
Diagnostics (110-114, rue Victor Hugo - 92300 - Levallois
Perret), permet le dosage dans le sérum ou le plasma
(anticoagulant : héparine ou EDTA) de faibles concentra-
tions de protéine C-réactive (CRP) par méthode immuno-
turbidimétrique utilisant un latex sensibilisé. Le coffret
contient le réactif CRP Ultra 1 x 4 mL lyophilisé, le tam-
pon, le calibrant. Sa conservation est de 1 an à + 2° –
+ 8 °C. Une fois reconstitué, le réactif est stable 8 semai-
nes. Le calibrant est standardisé d’après l’IFCC CRM 470
[8]. La gamme de calibration est réalisée en 6 points. Une
calibration bimensuelle est recommandée. Le domaine de
mesure indiqué dans le livret d’instructions du fabricant
Copyright © 2021 John Libbey Eurotext. Téléchargé par Benyoussef le 29/09/2021.
Orion Diagnostica s’étend de 0,25 à 10 mg/L. Une adapta-
tion est disponible sur l’automate Hitachi 911 Roche Dia-
gnostics.
La fiche technique signale que « toutes circonstances ris-
quant de modifier la turbidité d’un échantillon de sang ou
de plasma peuvent entraîner des résultats erronés » et que
« aucune interférence n’a été constatée pour des concen-
trations d’hémoglobine, de triglycérides et de bilirubine
respectivement inférieures à 5 g/L, 10 mmol/L et 400
micromol/L ».
Réactif Behring sur automate BN II
Le coffret CardioPhase hs CRP (code OQIY) permet le
dosage dans le sérum ou le plasma (anticoagulant : hépa-
rine ou EDTA) de la CRP par immunonéphélémétrie sen-
sibilisée avec des particules, à l’aide des systèmes Behring
Néphélémètres, en particulier le BN II. (Dade Behring
S.A. 19-29, rue du capitaine Guynemer 92081 – Paris La
Défense). Le réactif est prêt à l’emploi. Une fois le flacon
ouvert, le réactif est stable 4 semaines à + 2° – + 8 °C. Un
réactif supplémentaire, le N Réactif complémentaire/
précipitation Dade Behring (code OUMU), est nécessaire
pour le dosage de la CRP. Il s’agit d’une solution de
tampon phosphate additionnée de chlorure de sodium et
de Thesit®, stable 4 semaines à une température de + 2° –
+ 8 °C. Le calibrant est standardisé par rapport au maté-
riau de référence IFCC CRM 470 [8]. Le coffret peut être
utilisé à la fois pour les dosages de CRP dans le cadre de
l’inflammation et les dosages de CRP ultrasensible
(CRPus) comme marqueur prédictif de pathologies car-
diovasculaires. Ceci est un avantage en terme d’organisa-
tion. Selon le cas, les dilutions de départ sur BNII sont
différentes : 1/400 pour le dosage de CRP, marqueur
d’inflammation et 1/20 pour le dosage de la CRPus, mar-
queur prédictif de pathologies cardiovasculaires. La
courbe d’étalonnage est valable 4 semaines. Le domaine
de mesure de la CRPus s’étend de 0,175 à 10 mg/L. Pour
des valeurs supérieures au seuil maximum, il est néces-
340
saire d’effectuer une nouvelle dilution pour obtenir une
quantification.
La fiche technique signale que « les échantillons troubles
ou lipémiques qui ne peuvent pas être clarifiés par centri-
fugation doivent être éliminés du test et que « aucune
influence due à la présence de bilirubine, hémoglobine et
triglycérides n’a été constatée jusqu’aux concentrations
respectives de 600 mg/L, 10 g/L et 16 g/L ».
Analyses des résultats
Le logiciel de statistiques « Method validator », écrit par
Marquis [9], a été utilisé pour la comparaison des résultats
obtenus par les deux méthodes.
Résultats
Étude comparative
La droite de régression et le diagramme des différences
correspondant aux 134 couples de valeurs sont présentés
sur la figure 1. La droite de régression a pour équation :
y = 0,850 x + 0,1516. Le coefficient de corrélation r est de
0,982. Un infléchissement de la droite est observé sur le
diagramme des différences à partir d’un seuil de CPRus
BNII de 6 mg/L (figure 1B). En restreignant la population
étudiée aux valeurs inférieures à ce seuil, la droite de
régression a pour équation: y = 0,975 x – 0,083 et le coef-
ficient de corrélation r est de 0,978 (figure 2).
Différents seuils d’interprétation, variant entre 3 et 5,4
mg/L, ont été proposés selon les équipes de travail [2,
10-12]. En retenant la valeur seuil de 3 mg/L proposée
dans la fiche technique CRP Dade Behring, les deux
méthodes concordent pour 96 % des couples de valeurs.
Quatre échantillons dont les valeurs BNII se situent entre
10 et 15 mg/L ont été également étudiés. Les couples de
valeurs BNII CRP / CRPus Fumouze sont respective-
ment : 11,10 et 8,30 mg/L, 12,1 et 8,23 mg/L, 13,2 et 9,14
mg/L, 14,5 et 9,57 mg/L soit une déviation par rapport à la
cible qui varie de 25 à 32%. Pour ces échantillons, les
valeurs fournies par la méthode Fumouze restent incluses
dans le domaine de mesure de la CRPus défini par le
fabricant (inférieures à 10 mg/L). Par contre, les valeurs
obtenues sur BNII pour ces échantillons dépassent la
limite supérieure de mesure de la CRPus et ont nécessité
un dosage classique. Dans les valeurs les plus hautes de la
courbe de calibration, il existe donc un écart important
entre les deux méthodes.
Un échantillon dont la concentration en CRP s’élevait à
517 mg/L sur BNII a également été testé par la méthode
Fumouze sur Hitachi 911 et a fourni le résultat de
« 13,02 mg/L limite Haute » ce qui exclut la validité du
dosage.
Ann Biol Clin, vol. 63, n° 3, mai-juin 2005
 Dosage de la CRP

Linéarité et précision Pour l’étude de reproductibilité, deux autres couples

d’échantillons présentant chacun un taux bas et un taux
La linéarité des deux méthodes a été étudiée selon les
élevé de CRPus ont été dosés 10 jours consécutifs, l’un
recommandations de la SFBC [13] sur 6 dilutions prépa-
par la méthode Fumouze, l’autre par la méthode Dade
rées à partir d’un pool bas et d’un pool haut dans les
Behring. L’ensemble des résultats de la méthode Fumouze
proportions suivantes : pool haut dilué à 75 %, 50 %,
sont présentés dans le tableau 2, et ceux de la méthode
30 %, 20 %, 10 % et 5 % dans le pool bas. Les dilutions
Dade Behring dans le tableau 3.
ont été dosées chacune trois fois durant trois jours consé-
cutifs sur Hitachi 911 et BNII. Les résultats (moyennes,
CV et déviations par rapport aux valeurs cibles) sont pré-
sentés dans le tableau 1. Les courbes de régression éta- Discussion
blies à partir des valeurs obtenues pour chaque dilution en
fonction des valeurs cibles sont présentées sur la figure 3. L’étude comparative montre une excellente corrélation
Elles ont pour équation y = 1,19 x – 0,257, r = 0,998 pour pour les valeurs inférieures à 6 mg/L. Au-delà de ce seuil,
la linéarité de la méthode Fumouze et y = 0,998 x – 0,306, la corrélation est moins bonne comme le montrent le net
infléchissement de la courbe de régression et des écarts de
Copyright © 2021 John Libbey Eurotext. Téléchargé par Benyoussef le 29/09/2021.

r = 0,991 pour celle de la méthode BNII.

Répétabilité et reproductibilité
Pour l’étude de répétabilité, deux couples d’échantillons
sériques présentant chacun un taux bas et un taux élevé de
CRPus ont été dosés à dix reprises dans une même série,
l’un par la méthode Fumouze et l’autre par la méthode
Dade Behring.
plus en plus importants par rapport aux valeurs BNII.
Au-delà de 6 mg/L, les valeurs de la méthode Fumouze
apparaissent sous-estimées par rapport à celles du BNII.
La limite supérieure du domaine de mesure fixée à 10
mg/L devrait être ramenée à 6 mg/L de façon à conserver
une bonne corrélation par rapport à la méthode BNII. Par
ailleurs, il faut insister sur la vigilance indispensable dans
les cas de CRP supérieures à la limite haute du domaine

Différences
CRPus (mg/L) (mg/L)
méthode Fumouze-Orion
2
8 B
A

y = 0,850 x + 0,1516 -1

2
-2

0 -3
0 2 4 6 8 10 0 2 4 6 8 10
CRPus (mg/L) Moyenne CRPus (mg/L)
méthode Dade-Behring

Figure 1. Comparaison de la méthode Fumouze Orion par rapport à la méthode Dade Behring/BN II sur 134 échantillons. A : droite de
régression selon Deming ; B : diagramme de différences (les lignes en pointillé définissent l’intervalle de 2 écarts-types par rapport à la
moyenne).

Ann Biol Clin, vol. 63, n° 3, mai-juin 2005 341

 pratique quotidienne

Dade-Behring détecté dès le seuil de 2,5 mg/L, ce que

CRPus (mg/L) nous ne constatons qu’à partir du seuil de 6 mg/L.
méthode Fumouze-Orion
Les essais de linéarité de la méthode Fumouze montrent
7 des déviations par rapport aux valeurs cibles variant de
– 6,3 % à 19,8 % passant d’un écart positif à un écart
6 négatif. Ceci n’est pas retrouvé pour la méthode Dade-
Behring pour laquelle les déviations varient de –1,0 à
– 17,8 % sans inversion. La droite de régression obtenue
5
pour la linéarité de la méthode Dade-Behring est parallèle
à la droite théorique (y = 0,998 x – 0,306) alors que celle
4 obtenue pour Fumouze s’en écarte (y = 1,19 x – 0,257).
Cet écart, plus important vers les valeurs hautes de la
3 droite de régression, pourrait s’expliquer par la sous-
estimation de la concentration du pool haut par la méthode
Copyright © 2021 John Libbey Eurotext. Téléchargé par Benyoussef le 29/09/2021.

Fumouze et confirme la nécessité d’en restreindre le

2
domaine de mesure.

1 y = 0,975 x - 0,083 Les tests de répétabilité et de reproductibilité des deux

0
0 1 2 3 4 5
CRPus (mg/L)
méthode Dade-Behring
Figure 2. Comparaison de la méthode Fumouze Orion par rap-
port à la méthode Dade Behring/BN II pour la population res-
treinte aux valeurs inférieures à 6 mg/L soit 118 échantillons
(droite de régression selon Deming).
de mesure et pour lesquelles l’Hitachi 911 fournit néan-
moins un chiffre. Bien que signalé « limite haute », le
résultat peut être très largement sous-estimé et des erreurs
sont possibles si un contrôle strict des valeurs fournies par
l’appareillage n’est pas mis en place. Nos résultats diffè-
rent relativement de ceux de Hamwi et al. [14] qui obte-
naient pour la méthode Orion utilisée sur 101 sérums
dosés sur Modular-P une droite de régression de pente
0,72. Ils constataient un écart par rapport à la méthode
tests sont satisfaisants. Cependant, la répétabilité de la
méthode Dade Behring est meilleure pour l’échantillon de
valeur faible en CRPus (CV Behring : 2,65 %, CV
6
Fumouze : 8,14 %). Pour l’échantillon de valeur élevée,
les coefficients de variation sont équivalents et inférieurs à
2 % pour les deux méthodes.
La reproductibilité pour l’échantillon de valeur basse en
CRPus est également meilleure pour la méthode Dade
Behring (CV : 7,28 %) par rapport à la méthode Fumouze
dont le coefficient de variation (9,30 %) reste cependant
inférieur à 10 %.
Quant aux valeurs élevées, la reproductibilité est cette fois
meilleure pour la méthode Fumouze (CV : 1,63 %) par
rapport à la méthode Dade Behring (CV : 3,77 %). Les
CV obtenus pour la méthode Dade-Behring sont compara-
bles à ceux décrits par Rothkrantz-Kos et al. [15]. Ces
résultats sont confirmés par l’étude globale de précision
effectuée dans le cadre de l’essai de linéarité. Elle montre
en effet des coefficients de variation inférieurs pour la

Tableau 1. Linéarité et précision.

Dade-Behring Fumouze Orion

Pool Moyenne CV Cible Déviation Pool Moyenne (CV) Cible Déviation
(mg/L) (%) (mg/L) (%) (mg/L) (%) (mg/L) (%)
1 13,0 1 9,38
2 9,34 2,7 9,82 - 4,9 2 8,15 1,27 7,18 13,5
3 5,90 5,6 6,64 - 11,1 3 5,92 1,18 4,94 19,8
4 3,37 5,3 4,10 - 17,8 4 3,32 0,99 3,17 4,7
5 2,80 3,9 2,83 - 1,0 5 2,55 2,90 2,28 11,8
6 1,44 4,7 1,56 - 7,6 6 1,33 4,33 1,40 - 5,0
7 0,90 3,5 0,91 - 1,0 7 0,89 7,84 0,95 - 6,3
8 0,29 8 0,51
Déviation : rapport résultat - valeur cible / valeur cible.

342 Ann Biol Clin, vol. 63, n° 3, mai-juin 2005

 Dosage de la CRP

Résultats (mg/L) Résultats (mg/L)

méthode Fumouze-Orion méthode Dade-Behring

10 12
A B

10
8

8
6

4
Copyright © 2021 John Libbey Eurotext. Téléchargé par Benyoussef le 29/09/2021.

y = 1,19 x - 0,257
2 y = 0,998 x - 0,306
2

0 0
0 2 4 6 8 0 2 4 6 8 10 12
Valeurs cibles (mg/L) Valeurs cibles (mg/L)

Figure 3. Linéarité des méthodes. A : linéarité de la méthode Fumouze Orion ; B : linéarité de la méthode Dade Behring.

Tableau 2. Répétabilité et reproductibilité de la méthode CRPus Conclusion

Fumouze Orion.

Répétabilité (n = 10) Reproductibilité (n = 10) Ces essais montrent que la méthode de dosage de la
CRPus commercialisée par Fumouze donne des résultats
Taux bas Taux haut Taux bas Taux haut
très acceptables lors de son adaptation sur Hitachi 911, si
Moyenne (mg/L) 0,786 7,09 1,118 8,377 l’on respecte un domaine de mesure limité à 6 mg/L. Cette
Écart-type 0,064 0,117 0,104 0,137
condition étant respectée, les résultats de répétabilité, de
CV (%) 8,14 1,65 9,30 1,63
reproductibilité ainsi que la comparaison par rapport à une
méthode néphélémétrique sont satisfaisants. La prescrip-
tion de ce marqueur est en augmentation et cette applica-
Tableau 3. Répétabilité et reproductibilité de la méthode CRPus
Dade Behring. tion devrait intéresser les laboratoires souhaitant en réali-
ser le dosage, sans toutefois disposer d’un automate
Répétabilité (n = 10) Reproductibilité (n = 10) spécialisé dans le dosage des protéines spécifiques par
Taux bas Taux haut Taux bas Taux haut
néphélémétrie.
Moyenne (mg/L) 0,754 7,144 1,401 6,700
Remerciements. Les auteurs tiennent à remercier Cathe-
Écart-type 0,020 0,139 0,102 0,253
rine Obeuf et Catherine Ribot, techniciennes du labora-
CV (%) 2,65 1,94 7,28 3,77
toire de biochimie, pour leur participation active à cette
étude, ainsi que la société Fumouze pour la fourniture de
leur réactif.

méthode Fumouze (de 0,99 à 4,33 %) par rapport à la

méthode BNII (de 2,7 à 5,6 %), sauf pour la valeur la plus Références
faible des pools (CV Fumouze : 7,84 %, CV BNII :
1. Libby P, Ridker PM, Maseri A. Inflammation and atherosclerosis. Cir-
3,5 %). culation 2002 ; 105 : 1135-45.

Ann Biol Clin, vol. 63, n° 3, mai-juin 2005 343

 pratique quotidienne

2. Ridker PM. Clinical application of C-reactive protein for cardiovascu-
lar disease detection and prevention. Circulation 2003 ; 107 : 363-9.
3. Ridker PM, Cusham M, Stampfer MJ. Plasma concentration of
C-reactive protein and risk of developing peripheral vascular disease.
Circulation 1998 ; 97 : 425-8.
4. Levinson SS, Miller JJ, Elin RJ. Poor predictive value of High-
sensitivity C-reactive protein indicates need for reassessment. Clin Chem
2004 ; 50 : 1733-4.
5. Danesh J, Wheeler JG, Gideon M, et al. C-reactive protein and other
circulating markers of inflammation in the prediction of coronary heart
disease. N Engl J Med 2004 ; 350 : 1387-97.
6. Koenig W. C-reactive protein and cardiovascular risk : has the time
come for screening the general population ? Clin Chem 2001 ; 47 : 9-10.
7. Mosca L. C-reactive protein – to screen or not to screen ? N Engl J
Med 2002 ; 347 : 1615-7.
Copyright © 2021 John Libbey Eurotext. Téléchargé par Benyoussef le 29/09/2021.
10. Wilkins J, Gallimore R, Moore EG, Pepys MB. Rapid automated
high sensitivity enzyme immunoassay of C-reactive protein. Clin Chem
1998 ; 44 : 1358-61.
11. Roberts WL, Moulton L, Law TC, et al. Evaluation of nine automa-
ted High-sensitivity C-reactive protein methods : implications for clini-
cal and epidemiological applications. Part 2. Clin Chem 2001 ; 47 :
418-25.
12. Pearson TA, Mensah GA, Alexander RW, et al. Markers of inflam-
mation and cardiovascular disease : application to clinical and public
health practice : a statement for healthcare professionals from the centers
for disease control and prevention and the American Heart Association.
Circulation 2003 ; 107 : 499-511.
13. Vassault A, Azzedine MC, Bailly M, et al. Commission SFBC
« Validation de techniques ». Ann Biol Clin 1986 ; 44 : 686-745.
14. Hamwi A, Vukovich T, Wagner O, et al. Evaluation of turbidimetric

8. Bienvenu J, Later R, Pontet F. Le matériau de référence (CRM 470)
pour les protéines sériques : préparation, caractéristiques et conditions
d’utilisation. Ann Biol Clin 1995 ; 53 : 499-505.
9. Marquis P. Comparaisons de méthodes analytiques. Ann Biol Clin
1999 ; 57 : 737-8.
High-sensitivity C-reactive protein assays for cardiovascular risk estima-
tion. Clin Chem 2001 ; 47 : 2044-6.
15. Rothkrantz-Kos, Bekers O, Gubbels A, Drent M, Schmitz M, Van
Dieijen-Visser P. Evaluation of two new high-sensitivity methods for
C-reactive protein. Ann Clin Biochem 2003 ; 40 : 398-405.

BUREAU
Président : P. Gillery
Vice-président : A. Legrand
Past-président : F. Trivin
Secrétaire générale : N. Jacob
Secrétaire générale adjointe : I. Aimone-Gastin
Trésorier : F. Felden

Présidents du comité scientifique : P. Gambert, J. Goudable, R. Garnotel

Rédacteur en chef des Annales de biologie clinique : J.-L. Dhondt
Responsable du site internet www.sfbc.asso.fr : R. Couderc

CONSEIL D'ADMINISTRATION
I. Aimone-Gastin (Nancy), J.-P. Bali (Montpellier), P. Carayon (Marseille), P. Corberand (Toulouse), R. Couderc (Paris),
A. Daunizeau (Lens), D. de Mouy (Paris), D. Delaville (Antony), V. Ducros (Grenoble), F. Felden (Nancy), A. Feuillu
(Rennes), R. Garnotel (Reims), M.-F. Gaudeau-Toussaint (Chaumont), P. Gillery (Reims), N. Jacob (Paris),
A. Lavoinne (Rouen), A. Legrand (Paris), J. Pfeffer (Bagnolet), A. Philippon (Paris), Y. Piemont (Strasbourg), J. Watine (Rodez)

344 Ann Biol Clin, vol. 63, n° 3, mai-juin 2005