ELECTROPHORESE CAPILLAIRE DE L’HEMOGLOBINE

SUR LE SYSTEME CAPILLARYS TM SEBIA

G. Hennache, F. Robert, J.B. Clément, D. Simonin and G.Barouh

Dosage de l’Hb F :
RESUME Les valeurs d’Hb F ont été déterminées sur 74 sangs avec des
taux d’Hb F normaux et pathologiques selon 2 techniques :
L’électrophorèse de l’hémoglobine est une technique - avec le kit CAPILLARYS Hémoglobin(e) de Sebia,
traditionnellement utilisée pour la détection des variants les - avec le système HPLC de Bio-Rad.
plus courants et/ou des anomalies quantitatives (thalassémies) La corrélation entre ces 2 systèmes d’analyse a été déterminée
de l’hémoglobine. Ce test a été récemment adapté sur le au moyen d’une régression linéaire.
système d’électrophorèse capillaire CAPILLARYS TM

commercialisé par Sebia. Détection des hémoglobinoses :

L’analyse est totalement automatisée depuis le tube primaire : 75 sangs différents avec des variants de l’hémoglobine tels que
préparation de l’hémolysat à partir des globules rouges Hb S, C et E ont été analysés par électrophorèse capillaire sur
sédimentés non lavés, injection, migration, détection directe CAPILLARYS et par HPLC de Bio-Rad.
et quantification/identification des fractions de l’hémoglobine.
Pour l’analyse sur CAPILLARYS des contrôles normaux ou
pathologiques (avec augmentation de l’Hb A2 ou présence de
fractions A, F, S, et C) ont été utilisés.
PRINCIPE DU TEST
Dosage de l’Hb S :
figure 1: Echantillon normal figure 2: Bêta thalassemie figure 3: Contrôle AFSC
Les taux d’Hb S ont été déterminés sur 43 échantillons selon 2
La structure spatiale de l’hémoglobine et ses propriétés
techniques.
moléculaires dépendent de la séquence en acides aminés
- avec le kit CAPILLARYS Hémoglobin(e) de Sebia,
des chaînes polypeptidiques. Des mutations qui affectent
- avec le système HPLC de Bio-Rad.
cette séquence génèrent l’apparition de variants. Les échantillons correspondaient à des homozygotes ou
Ceux-ci présentent des charges de surface différentes et hétérozygotes S.
donc des mobilités spécifiques dans un système électrophorétique Hb A 66.0 % La corrélation entre ces 2 systèmes a été déterminée au
Hb F 0.8 %
à pH et force ionique donnés. Les anomalies qualitatives et Hb A2 2.8 % moyen d’une régression linéaire.
structurales résultantes sont appelées Hémoglobinoses. Hb C 30.4 %
La diminution de synthèse de l’une des chaînes de globines
donne des anomalies quantitatives appelées Thalassémies. RESULTATS
Le système CAPILLARYS utilise le principe de l’électrophorèse Dosage de l’Hb A2 :
capillaire en solution libre. Avec cette technique, les molécules Le coefficient de corrélation obtenu pour l’Hb A2 entre l’HPLC

- CAPILLARYS TM - MINICAP TM
chargées sont séparées en fonction de leur mobilité et le CAPILLARYS est de 0.95.
électrophorétique dans un tampon alcalin.
Dosage de l’Hb F :
Le coefficient de corrélation obtenu pour l’Hb F entre l’HPLC
et le CAPILLARYS est de 0.99.
TECHNIQUE figure 4: Heterozygote A/S figure 5: Heterozygote A/D figure 6: Heterozygote A/C
superposition du contrôle AFSC Détection des anomalies de l’hémoglobine :
Plusieurs variants ont été analysés lors de cette étude, notamment
L’analyse est réalisée sur les globules rouges sédimentés ou
des homozygotes et des hétérozygotes pour Hb S, Hb C et Hb

centrifugés après avoir éliminé le plasma. Sur CAPILLARYS, les
capillaires étant montés en parallèle, 7 analyses simultanées de
sang sont possibles.
Toutes les étapes sont entièrement automatisées :
- Lecture des codes barres du portoir et des échantillons,
- Hémolyse des échantillons contenant les globules rouges
sédimentés et dilutions à partir des tubes primaires (sans
plasma) dans la barrette,
- Injection des échantillons hémolysés dans les capillaires
pour la séparation,
- Séparation des hémoglobines à 10 000 V pendant 8 mn,
sous température stabilisée à 34°C par effet Peltier,
- Détection directe des hémoglobines séparées à 415 nm.
Les performances du test sur CAPILLARYS pour la quantification
des hémoglobines A2 et F au cours des thalassémies
ont été comparées à celles de l’HPLC (Variant I de Bio-Rad).
Une seconde étude a été réalisée pour comparer la détection
des variants de l’hémoglobine selon 3 techniques différentes :
1. HPLC (Variant I de Bio-Rad, b-thalassemia Short
Program),
2. Electrophorèse sur agarose ( Système Hydrasys de
Sebia, Hydragel 15 Hemoglobin(e)),
3. Electrophorèse capillaire (Système CAPILLARYS de
Sebia, CAPILLARYS Hemoglobin(e)).
MATERIEL
Dosage de l’Hb A2 :
Les valeurs d’Hb A2 ont été déterminées sur 73 sangs avec
des taux d’Hb A2 normaux et pathologiques selon 2
techniques :
- avec le kit CAPILLARYS Hémoglobin(e) de Sebia,
- avec le système HPLC de Bio-Rad.
La corrélation entre ces 2 systèmes d’analyse a été déterminée
au moyen d’une régression linéaire.
SEBIA se réserve le droit de modifier à tout moment et sans préavis les informations contenues dans le présent document. HB-201112-P1-FR / ©12/2011 - Marque déposée
E, mais également des échantillons Hb S/C, Hb D-Punjab, Hb
G-Philadelphie, Hb delta A’2, Hb H et Hb Bart. Toutes ces
hémoglobines ont été parfaitement détectées et identifiées par
Hb F 4.6 % les 3 techniques. Les figures 1 à 12 donnent des exemples de
Hb S 47.2 %
Hb C 39.6 % tracés obtenus sur CAPILLARYS.
Hb A2 4.2 %
Au cours de ce travail d’autres variants ont été analysés par
le CAPILLARYS tels que les Hb J-Mexico, Hope, Winnipeg,
Korle-Bu, O-Arab, J-Providence, N-Baltimore et Camperdown
(Résultats non montrés).
Le coefficient de corrélation obtenu pour l’Hb S entre l’HPLC
et le CAPILLARYS est de 0.99. Ce coefficient montre que les
patients sous traitement peuvent être suivis pour le dosage
de l’Hb S par une électrophorèse sur CAPILLARYS.
figure 7: Heterozygote S/C figure 8: Homozygote E figure 9: Alpha thalassemie avec Hb Bart
superposition du contrôle AFSC CONCLUSION
Les principaux avantages de l’électrophorèse de l’hémoglobine
sur CAPILLARYS sont :
- Une très bonne résolution et focalisation des fractions de
l’hémoglobine permettant la séparation des variants et une
quantification précise de l’hémoglobine A2, paramètre
déterminant dans le diagnostic des thalassémies,
- Une nette séparation et focalisation de l’Hb F migrant entre
l’Hb A et S qui permet la quantification de l’Hb F,
- Une séparation distincte des hémoglobines C et E de l’Hb
A2 facilitant l’identification et la quantification de ces fractions,
- La superposition de courbes mémorisées de référence ou
d’un sang de contrôle sur les courbes de patients permet la
différenciation des variants de mobilité proche tels que l’Hb
S, D et G-Philadelphie,
- Excellente corrélation avec l’HPLC pour le dosage de l’Hb
F et Hb A2,
figure 10: Alpha thalassemie avec Hb H figure11: Variant Delta A’2 figure 12: Heterozygote A/G Philadelphie
- Excellente séparation et détection des variants de l’Hb A2,
superposition du contrôle AFSC superposition du contrôle AFSC notamment delta A’2,
- Les Hb Bart et H sont mises en evidence,
- Cadence élevée : 34 échantillons/heure.

Cette technique est maintenant disponible sur CAPILLARYSTM 2 Flex Piercing et MINICAPTM Flex Piercing. Elle est réalisée sur sang total, tubes primaires fermés et agités par retournement.

Parc Technologique Léonard de Vinci

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