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A comparison of thick smears, QBC malaria, Enzyme- L’examen microscopique des étalement sanguins est la
linked DNA, PCR and the ParaSight F assay in méthode de choix. D’autres techniques sont en train d’être
Plasmodium falciparum diagnosis évaluées : les sondes à ADN (1, 3, 5, 8, 11, 12), la PCR (2,
4, 9, 13), la méthode QBC (10) et le ParaSight F test mis au
A battery of 22 blood samples from Senegal was point par les laboratoires Becton Dickinson. Ce dernier
analysed using thick smear microspcopy, QBC malaria détecte l’antigène Histidine Rich Protein sécrété au cours
analysis, PCR, Enzyme-linked synthetic DNA, and the de l’accès palustre ; c’est une réaction qui utilise des anti-
* Service de Parasitologie, Faculté de Médecine, UCAD, Dakar, Sénégal.
** Department of pathology and laboratory Medicine, Indiana University
School of Medicine.
corps spécifiques et l’antigène est révélé sur une bandelette duits amplifiés (600 bp) sont révélés par électrophorèse sur
sous forme d’une coloration rose. gel d’agarose à 2 % et photographiés en immunofluores-
La plupart des études n’ont pas comparé plus de 3 techni- cence après coloration à l’éthidium bromide (13).
ques entre elles.
L’extrême sensibilité de la PCR peut aboutir à des faux
Le but de celle-ci était de comparer en même temps 5 positifs ; aussi un témoin négatif a été ajouté dans la série
méthodes de diagnostic du paludisme à Plasmodium des prélèvements à examiner.
falciparum en prenant tour à tour chacune comme méthode
de référence, la goutte épaisse, le QBC, la PCR, une sonde La sonde à ADN : Une sonde synthétique de DNA
à ADN et le ParaSight F test. couplée à la phosphatase alcaline (PFR1-AP) est utilisée
(11). 2 séries d’échantillons de sang sont mis en contact
II - PATIENTS, MATERIELS ET METHODES avec la sonde et la réaction est révélée par coloration du fil-
tre par le NBT/BCIP ou par chemiluminescence utilisant
Au cours du mois d’août 1993, 22 patients présentant des 0,1 mg/ml de Lumiphos 540 (Tropix) et le film rayon X.
signes évocateurs de paludisme ont été recrutés dans un L’intensité des réactions positives a été établie selon une
dispensaire de Pikine situé dans la banlieue de Dakar au
échelle allant de 0 à 4 + (11).
Sénégal. Les âges des patients répartis en 14 femmes et
8 hommes variaient de 18 à 55 ans.
ParaSight F test : Suivant les instructions du fabricant
Des prélèvements de sang à la pulpe du doigt ont été réa-
50 microlitres de sang total de chaque échantillon sont
lisés pour la confection de gouttes épaisses. Après colo-
mélangés avec 3 gouttes d’une solution hémolysante. Une
ration au Giemsa et identification des plasmodium, la den-
sité parasitaire a été calculée sur la base de 8000 leucocytes goutte de ce sang hémolysé et filtré déposée à la base de
par µl. bandelettes contenant des anticorps monoclonaux spécifi-
ques antihistidine II, puis une goutte d’un agent de révéla-
Pour le test QBC, le sang recueilli sur un tube à héma- tion contenant des liposomes est ajoutée. La positivité du
tocrite contenant de l’acridine orange (tube QBC) est test est affirmée par l’apparition d’une ligne rose à la base
ensuite centrifugé à 12000 t/mn pendant 5 mn puis l’iden- des bandelettes. L’intensité de la coloration est déterminée
tification est faite par lecture au microscope à fluorescence suivant une échelle de 0 à 4+. Une coloration de contrôle
(10). identifiable au niveau des bandelettes témoigne de la bonne
réalisation du test.
La PCR a été réalisée selon le protocole suivant :
Après extraction à partir de 100 microlitres de sang par la Analyse statistique : La sensibilité, la spécificité, les
méthode Isoquick (Bio101, San Diego) l’ADN est ensuite valeurs prédictives positives et négatives et la concordance
resuspendue dans 100 microlitres d’une solution 0,1 TE entre les différents test ont été calculées en utilisant
puis dilué au dixième dans de l’eau. chaque tube d’amplifi- successivement chacune des techniques comme méthode
cation contient 3 microlitres du DNA dilué, 10 microlitres de référence.
de tampon de réaction 10X (100 mM tris à pH 8, 500 mM
KCL, 15 mM Mgcl2), 5 microlitres de chaque amorce, 18 III - RESULTATS
AP853 et 18AP1488 obtenus à partir d’une séquence
spécifique de l’ADN ribosomal du groupe des Api- 10 échantillons ont été retrouvés positifs avec présence de
complexa, 61,5 microlitres H2O stérile, 0,5 unités de poly- P. falciparum à des parasitémies variant de 2156 à 164.160
mérase et 2 microlitres de dNTP (Kit Perkin Elmer Cetus). parasites par microlitre (tableau I).
Une phase initiale de dénaturation pendant 2 minutes à 94°
suivie de 30 cycles comprenant chacun 3 étapes : 1 minute Goutte épaisse
de dénaturation, 1 minute d’hybridation à 58° et 1 minute 10 échantillons ont été retrouvés positifs avec présence de
d’élongation à 72°. Une phase d’élongation supplémentaire P. falciparum à des parasitémies variant de 2156 à 164.160
à 72° pendant 5 minutes termine l’amplification. Les pro- parasites par microlitres (Tableau I).
positive et la correspondance étaient de 100 %. L’intensité généralement bien correlée avec la parasitémie déterminée
de la réaction positive obtenue avec le ParaSight F test était en goutte épaisse.
Tableau II : Comparaison de la goutte épaisse prise comme méthode de référence aux autres méthodes de diagnostic
Le ParaSight F test ne requiert pas les équipements utilisés non immunes comme c’est le cas dans les zones où il est
and les autres essais de cette étude ; la détection de l’anti- hypoendémique et saisonnier ; là il peut avoir des allures
gène est simple, rapide, réalisable par un personnel moyen- épidémiques avec des parasitémies élevées (6). Dans ce
nement formé ; les réactifs par ailleurs sont stables et contexte épidémiologique la survenue de plus en plus
transportables facilement. Aussi le ParaSight F test peut d’échecs thérapeutiques (7) dus le plus souvent à des traite-
être indiqué là où l’examen microscopique n’est pas dispo- ments inadaptés par défaut de diagnostic biologique doit
nible. Il pourra être utilisé pour le diagnostic de l’accès conduire à une meilleure codification des techniques. La
aigu d e paludisme à P. falciparum en vue de la mise en goutte épaisse et le ParaSight F test peuvent être utiles dans
route rapide du traitement. ces conditions, permettant la mise en route d’un traitement
La persistance de l’antigénémie après guérison constitue rapide, efficace et d’un coût supportable par les populations
cependant le gros inconvénient de ce test . En effet, avec de nos pays.
l’exigence de surveiller la chimiorésistance de P. falci-
parum ceci constitue un sérieux handicap pour juger de Au vu des tous les avantages et limites des différents tests,
l’échec parasitologique. Par ailleurs ce test n’est spécifique la goutte épaisse reste actuellement celui qui remplit les
que de P. falciparum et limite ainsi grandement son utilisa- meilleurs conditions optimales d’utilisation en zone d’en-
tion pour le diagnostic d’espèce même si dans nos zones P. démie palustre.
falciparum domine dans 95 % des cas.
Remerciements
Il est évident par ailleurs que le choix d’une méthode Nous remerçions J. PERRONE de Becton Dickinson Cor-
dépendra également de l’objectif recherché. La PCR et la poration pour l’octroi du test ParaSight.
méthode QBC sont particulièrement indiquées dans les étu-
des portant sur des populations importantes et ayant trait à Support financier
l’épidémiologie, aux évaluations des mesures de lutte, à Cette étude a reçu un support financier du programme
l’identification des souches parasitaires. Fullbrigt octroyé à O. GAYE et une subvention TDR accor-
Le paludisme à P. falciparum est grave chez les populations dée à G. Mc LAUGHLIN.
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