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I-PRINCIPAUX CARACTRES

BACTRIOLOGIQUES

ANTIBIOGRAMME DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS


Pr KOUASSI M BENGUE A

E.D. coloration de Gram

Cocci Gram positif Aro anarobie facultatif, non exigeant Catalase +, oxydase , , , Coagulase, dgradation du mannitol, novobiocine. Milieux slectifs: Chapman, Baird Parker

Culture sur milieu solide

OBJECTIFS
A la fin de cet expos, l apprenant sera capable de raliser et d interpreter les rsultats d un antibiogramme de S.aureus

I-POUVOIR PATHOGNE PRLVEMENTS


Infections communautaires et nosocomiales Infections cutanomuqueuses (folliculite, furonculose, anthrax) f l h ) Septicmies Intoxications alimentaires Infections urinaires
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Pus divers Hmoculture Prlvements nasaux Prlvements cutans Urines LCR Aliments

DEROULEMENT
I-GENERALITES II-TECHNIQUES DE L ANTIBIOGRAMME III-INTERPRETATIONS

I-HISTORIQUE DES RESISTANCES


194: apparition des premires souches de S.aureus rsistantes la pnicilline 196: apparition des souches rsistantes la mthicilline 199 : Souches de sensibilit intermdiaire la vancomycine SARM et rsistances associes aux aminosides, macrolides, fluoroquinolones. 200 :Plus rcemment caractrisation de souches de SARM, virulentes, responsables dinfections communautaires.

II-ANTIBIOTIQUES TESTER
Btalactamines:
Pnicilline G Oxacilline 5g

II-PHNOTYPES
Mcanisme
Phnotype sauvage Pnicillinase (rare) Modification de PLP2a gne mecA (cible)
BORSA Pase hyperproduite Souches borderline 7 MODSA Modif. PLP (non 2a) Absence de Pase

DE RSISTANCE AUX

BTALACTAMINES
Pnicilline G Pnicilline A Carbox/ Urido ATB + inhibiteur de Pnicilline M btalactamase Cphalosporines Carbapnmes

Aminosides:
Kanamycine Amikacine Gentamicine

Macrolides LincosaminesStreptogramines (MLS)

Autres: Ofloxacine Acide fusidique Chloramphnicol Ttracyclines/Minocyclines Cotrimoxazole Fosfomycine

S R R

S S R

S S R

S S R

Erythromycine au milieu pour Lincomycine Pristinamycine

dtecter R inductible au MLSb)

Cefoxitine: pour rechercher la rsistance loxacilline Novobiocine: diagnostic Compos vibriostatique O129: diagnostic

Glycopeptides (Vancomycine 30g) Rifampicine 5g

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II-TEST DE SENSIBILIT AUX


ANTIBIOTIQUES
(TECHNIQUE
STANDARDISE

NORMES NCCLS)

ATTENTION:
PLP = enzymes de synthse constituants paroi,4 PLP chez S.aureus, si meti R ajout PLP2a faible affinit pour B lactamines Meti-R par modification PLP2a peut tre homogne ou hterogne ( sous-population dans zone inhibition) Meti-R
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Antibiogramme ppt dit


Milieu: Mueller Hinton 30c ou hypersal (2-4%) 37c Inoculum: 0,5 Mc Farland ( dilution 1/10 du d 05 MC) Disques dantibiotiques (cf liste) Incubation : 24h 48h si croissance faible (oxacilline) Interprtation: valeurs critiques Contrle de qualit: S.aureus ATCC 25923

Tests complmentaires Screening test loxacilline Recherche de la PLP2a Dtermination de la CMI Recherche de la pnicillinase: en cas de problme dinterprtation lATBgramme Recherche de la rsistance aux glycopeptides.

rpond pour toutes les b-lactamines


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ATTENTION
Detection avec un disque de Peni G:

STAPHYLOCOQUES
ET BTALACTAMINES

-Absence de Pnicillinase si diamtre>30mm , et la bordure de la zone d inhibition est floue (zone fantme) -Presence de Pnicillinase si bordure nette avec colonies de grande taille en bordure ,quelque soit diamtre d inhibition (squater)

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RECHERCHE DE LA MTHICILLINO-RSISTANCE
Technique Test la cefoxitine (30g) Screening test MRSA
-Antibiogramme -MH -0,5 Mc Farland -MH 4% NaCl -Oxacilline 6g/ml -0 5 Mc Farland 0,5 -Ensemencement / spot -Agglutination

Contrle de qualit
S.aureus ATCC 25923

Observation
Normes NCCLS: : R si 19mm CASFM R si 25mm Culture= rsistant

S.aureus ATCC 29213 S.aureus ATCC 43300 S.aureus S aureus ATCC 43866 (Tmoins) Contrle selon Kit

II-STAPHYLOCOQUES
ET MACROLIDES

Recherche de la PLP2a CMI loxacilline Recherche du gne mec A

Technique rapide, recommande en cas de diagnostic durgence et ou dinfection grave. (tmoin) Technique de rfrence Obligatoire pour la confirmation des SCN MetiR. Trs sensible, rapide. Pas 13 toujours une expression phnotypique 16

-MH 2% NaCl -0,5 Mc Farland PCR

S.aureus ATCC 29213

Selon technique

RECHERCHE DES MRSA


SCREENING TEST

PHNOTYPES DE RSISTANCE AUX


Mcanisme Phnotype sauvage Phnotype Sensible Erythro
Azithromycine

MACROLIDES
SA (SB) S S S S R S (R) R S Pristina S S S S ? ? S/R S17

Linco Clinda S S R R s/R S S/I/R S S S R s S S S/I/R S

S R R S S S S R

Souche tester

Modification MLSb inductible de la cible MLSb constitutive


S.aureus ATCC 43866

S.aureus ATCC 29213

Tmoin S.aureus ATCC 43300


Screening test

Inactivation enzymatique

L LSa Sa

Efflux
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LSa E

RECHERCHE DES MRSA RECHERCHE DE LA PLP2A

S.AUREUS MLSB INDUCTIBLE

Antagonisme (E-linco)

Souche MRSA +

Souche MRSA -

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S.AUREUS MLSB CONSTITUTIVE

RGLES GNRALES DINTERPRTATION LANTIBIOGRAMME


ANTIBIOTIQUES Btalactamines: Pnicilline G (rare) Oxacilline OBSERVATIONS

DE

Rponse valable pour: pnicilline A, carboxy et urido-pnicilline Rsistance croise toutes les btalactamines Rponse valable pour lazithromycine Rponse valable pour la lincomycine * Rponse valable pour les synergistines Rsistance dexpression faible in vitro, tenir compte du diamtre de la kanamycine Rsistance croise tous les aminosides utiliss en thrapeutique Tout diamtre <17mm est une indication la CMI
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Ery et linco contact

Macrolides: Erythromycine Clindamycine Pristinamycine Aminosides: Amikacine Gentamicine+++ Glycopeptides: Vancomycine


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*: Si phnotype L, rsistance la Lincomycine avec diminution de lactivit de la Clindamycine.

RCAPITULATIF
Mcanismes de rsistance (3)

STAPHYLOCOQUES
ET AMINOSIDES

Mthodes de dtection au laboratoire

b og a e u Antibiogramme minimum (5) Antibiogramme complmentaire (3)

Lecture interprtative
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Meti R Genta R Vanco R

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PHNOTYPES DE RSISTANCE AUX


AMINOSIDES
Phenotype Mcanisme
Kanamycine Amikacine Tobramycine Gentamicine

Inactiv vation enzymatique

Sauvage K KT KTG

S R R R

S S R R

S S S R
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Je vous remercie
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