HAEMOPHILUS ET PASTEURELLA

DR M. TOUKAM FMSB / HGY

OBJECTIFS
Classer les Haemophilus et Pasteurelles Etudier leur pouvoir pathogene Etudier leurs caractres bactriologiques

PLAN
I- Introduction II- Taxonomie III- Haemophilus Generalites Habitat Pouvoir pathogne Caractres bactriologiques Diagnostic biologique IV- Pasteurella Generalites Habitat Pouvoir pathogne Caractres bactriologiques Diagnostic biologique

I- INTRODUCTION
Haemophilus et Pasteurella sont 2 genres de la famille des Pasteurellaceae. Bacilles ou cocco-bacilles Gram ngatif, souvent polymorphes, immobiles, aro-anarobies ou microarophiles, acidifient les sucres, gnralement sans production de gaz, rduisant les nitrates en nitrites.

 temprature optimale de croissance est de

35-37 C. croissance sur milieux complexes contenant des extraits de levure, du srum, du sang ou du sang lys. Pour certaines espces, la croissance ncessite de l'azote organique, des acides amins, des vitamines B, du NAD, de l'hmine ou de la protoporphyrine.

II- TAXONOMIE
Famille: Pasteurellaceae
Genres: Pasteurella

Haemophilus Actinobacillus

GENRES HAEMOPHILUS (16 espces en fonction de lexigence en facteur V ou X)

ESPECES
influenzae para influenzae ducreyi aegypticus haemolyticus AUTRES: aphrophilus, paraphrophilus, segnis

PASTEURELLA

Pasteurella multocida (espce type) Pasteurella canis Pasteurella stomatis Pasteurella dagmatis Pasteurella bettyae

III- HAEMOPHILUS

Generalites
- Les Haemophilus sont des bacilles polymorphes Gram -, - Immobiles, - Aroanarobies facultatifs, - Exigeant pour leur croissance un ou 2 facteurs prsents dans le sang:
Facteur V, thermolabile, constitu de:
NAD (nicotinamide adnine dinuclotide) ou DPN (diphosphate nuclotide) ou coenzyme I NADP (NAD phosphate) ou TPN (triphosphate nuclotide) ou coenzyme II

 Facteur X, thermostable, constitu par lhmine ou hmatine qui est un compos ttrapyrrolique contenant du fer, driv de lhmoglobine et des enzymes de la chaine respiratoire (cytochrome, catalase, peroxydase) Parmi ces espces, seul H. ducreyi peut tre considr comme une bactrie pathogne spcifique, responsable du chancre mou, infection transmission sexuelle.

Espces NAD +hmine

Espces NAD

Espce hmine

Espces non NAD non Hmine

H. Influenzae H. Aegypticus H. haemolyticus

H. Parainfluenzae H. Parahaemolyticus H. Paraphrophilus H. segnis

H.ducreyi

H. Aphrophilus H.actinomycetemcomi tans

HABITAT
Lhabitat naturel des Haemophilus est constitu par les muqueuses des animaux sang chaud(homme, nombreux mammifres et oiseaux). Chez lhomme, 3 cosystmes principaux sont concerns:
Oropharynx, bouche, plaque dentaire Appareil urognital Rectum, intestin

NB: la proportion relative de H parainfluenzae et influenzae suggrerait que la contamination gnitale aurait une origine anale et pharynge par les contacts oro-gnitaux

POUVOIR PATHOGENE
H influenzae

Haemophilus influenzae, jadis appel bacille de Pfeiffer, a t decrit pour la 1re fois par docteur Robert Pfeiffer en 1882 pendant la pandmie de grippe (= influenza). On a longtemps cru qu'il tait le responsable de la grippe, jusqu' ce que l'on mette en vidence en 1933 l'tiologie virale de la grippe. Les souches de H influenzae peuvent possder ou non une capsule.

POUVOIR PATHOGENE (suite)

- H. influenzae fait partie de la flore normale des muqueuses des voies respiratoires suprieures de l'enfant et de l'adulte. - La colonisation dbute trs tt aprs la naissance et va se poursuivre tout au long de la vie. - 40 60% d'enfants peuvent tre porteurs d'H. influenzae. Les souches sont habituellement non capsules. - Le portage de souches capsules est peu frquent, concernant moins de 5% des sujets, adultes ou enfants.

H. influenzae peut aussi coloniser la muqueuse vaginale, source possible de contamination et d'infections gnitales et nonatales.

POUVOIR PATHOGENE (suite)

H. influenzae particulirement souche capsule type b est responsable de manifestations invasives, septicmiques avec diffrentes localisations, mningites, mais aussi piglottite, pneumonie, arthrite, pricardite, cellulite, et d'autres ventuelles localisations plus rares encore. Les autres types capsulaires sont plus rarement impliqus dans les infections invasives.

POUVOIR PATHOGENE (suite)

La forme sans capsule est saprophyte de la sphre ORL et peut tre responsable d'infections locales (otite, sinusite, pharyngite, conjonctivite). Les souches non capsules sont - capables de coloniser le tractus gnital et de donner urtrites, endocervicites et leurs complications locales (salpingite, endomtrite). - responsables d'infections communautaires de la sphre ORL de l'enfant et de l'adulte et de surinfections broncho-pulmonaires de l'adulte (plus rarement de l'enfant lors de diffrentes anomalies, dilatation de bronches, mucoviscidose).

POUVOIR PATHOGENE (suite)

H parainfluenzae

Il reprsente environ 10% de la flore buccale. Il peut tre responsable de: Endocardite Abcs du cerveau, du foie Pneumonies Arthrites Ostomylites Mningites Septicmies NB: H parainfluenzae a galement t isol dans les selles ce qui pourrait expliquer les infections des voies biliaires

POUVOIR PATHOGENE (suite)

H aegypticus Cest lagent de la conjonctivite dans les pays

chauds.
H paraphrophilus, segnis, haemolyticus,

parahaemolyticus Ces espces participent la flore commensale de la cavit buccale et seraient plus impliques dans la plaque dentaire. Ils sont rarement responsables dinfections

POUVOIR PATHOGENE (suite)

H ducreyi Cest lagent du chancre mou, IST qui svit dans la

zone tropicale et subtropicale. Le chancre mou est une ulcration dont la base est souple et le fond purulent. Il est trs douloureux et saccompagne dune adnopathie inguinale douloureuse et tendue( le bubon) Sige: - sillon balano-prpucial chez lhomme - parfois cervicale(difficile dceler) Incubation: une semaine un mois

POUVOIR PATHOGENE (suite)

H aphrophilus

Cest une bactrie commensale de la flore buccale retrouve dans la salive et la plaque dentaire. Elle peut tre responsable de:
Endocardites Abcs du cerveau Mningites Ostomylites vertbrales Arthrites Infections pulmonaires et intra-abdominales

CARACTERES BACTERIOLOGIQUES
Morphologie

Ce sont des petits bacilles gram polymorphes, parfois en coccobacilles, immobiles. %GC: 37-44

CARACTERES BACTERIOLOGIQUES (suite)

Culture
Temprature: 35 37c Aro-anarobies facultatifs Les milieux pour isolement dhaemophilus doivent

contenir les facteurs V et X. le sang frais ne convient pas car le facteur V intraglobulaire ne diffuse pas et surtout quil contient une NADase.

CARACTERES BACTERIOLOGIQUES(suite)
Le sang cuit 75( gelose chocolat) + polyvitex apporte facteurs V et X

CARACTERES BACTERIOLOGIQUES (suite)

FACTEURS DE VIRULENCE
Capsule : de nature polysaccharidique,cest un facteur

de virulence indiscutable. Dautres structures peuvent aussi tre impliqus comme les protines de la paroi, les fimbrae, facteurs dadhsion aux cellules pithliales. Des IgA protases extracellulaires de type I secrts par la bactrie ont t mis en vidence Ces bactries possdent une paroi compose dun lipopolysaccharide parfois responsable dun choc endotoxinique Virulence augmente si Inoculum important

DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE
Le diagnostic biologique va reposer sur le seul diagnostic bactriologique : - direct par mise en vidence de la bactrie aprs examen microscopique et - aprs mise en culture. Il n'y a pas de diagnostic indirect, par srologie, des infections Haemophilus.

DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE (suite)

Prlvement pour recherche H ducreyi

le prlvement est ralis au niveau de la zone de dcollement priphrique avec un couvillon humide. Le grattage { la curette est conseill et si cest possible, il tre utile deffectuer un prlvement du bubon en particulier lorsquil est fistulis

TRANSPORT Si le transport et le dlai de culture doivent dpasser 3 h, il est ncessaire dutiliser des

milieux de transport tels que TGV, portagerm

DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE (suite)

EXAMEN DIRECT
COLORATION/GRAM Ce sont des fins bacilles gramou fins bacilles coloration bipolaire, parfois capsuls. Pour la recherche de H ducreyi, lexamen microscopique seffectue aprs coloration au bleu de mthylne, au giemsa et au gram. Ce sont des bacilles gram extra ou intracellulaires coloration bipolaire disposs en courtes ou longues chanettes.

DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE (suite)

RECHERCHE DANTIGENES CAPSULAIRES

Cette recherche ne concerne que H influenzae srotype b dont la capsule est compose dunits rptes de ribose-ribitol-phosphate. Cet antigne peut tre mis en vidence dans le LCR, hmoculture, les urines et les liquides pleuraux. Les mthodes utilises font appels des tests commerciaux bass sur lagglutination de particules de latex sensibiliss avec des anticorps dirigs contre lantigne capsulaire de type b. Il existe des kits spcialement conus pour la recherche dans le LCR exp: Slidex meningite kit 5 ou pastorex meningitis H influenzae type b

DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE
ISOLEMENT
Milieux de culture

La glose au sang cuit apporte suffisamment dhmine mais doit tre supplment en NAD qui peut tre partiellement dtruit par la cuisson. Le difco (supplment VX), lisovitalex, le polyvitex, lextrait globulaire permettent cette supplmentation. Conditions de culture
Atmosphre humide enrichie en CO2 de 5 10% Temprature optimale 35 37 sauf H ducreyi(33-35) Dure dincubation 18 { 24h sauf certaines souches telles que aegypticus, parasuis (48h) ducreyi (10 jours)

DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE (suite)

Aspects des colonies

Les souches capsules donnent en 18 48h des colonies muqueuses assez grosses, 3mm de diamtre daspect iridescent en transillumination oblique Les souches non capsules donnent des colonies un peu plus petites, gristres, convexes ou plates.

DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE (suite)

ANTIBIOGRAMME

Les diffrentes espces sont habituellement rsistantes aux lincosamines et peu sensibles aux macrolides. H. influenzae est une espce naturellement sensible de nombreux antibiotiques:
-lactamines telles pnicillines (amoxicilline, AMX),

cphalosporines de 3 me gnration (cfotaxime, CTX) Phnicols dont le chloramphnicol (C) Ttracyclines (T) Sulfamide seul (SSS) ou associ (SXT) au trimthoprime (TMP) Fluoroquinolones telle la ciprofloxacine (CIP)

ANTIBIOGRAMME

DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE
SEROLOGIE

Elle nest possible que pour H ducreyi PCR A t appliqu H influenzae. Les amorces utilises donnent des profils assez faciles lire.

PASTEURELLA

Generalites
Les espces de Pasteurelles reconnues pathognes pour l'homme sont : Pasteurella multocida (espce type) Pasteurella canis Pasteurella stomatis Pasteurella dagmatis Pasteurella bettyae

HISTORIQUE
Le nom Pasteurella est adopt en 1897 pour individualiser le genre chez lequel on distingue diffrentes espces en se rfrant l'animal d'o la souche provient. A cette poque, la bactrie, bien que suspecte responsable de manifestations pathologiques chez l'homme, intresse surtout les vtrinaires mais partir de 1920, d'authentiques pasteurelloses humaines sont dcrites, la relation pidmique avec les animaux est perue et le rle des morsures affirm.

HABITAT
Les Pasteurella sont des htes obligatoires des animaux, des vertbrs surtout, chez qui ils se comportent comme des commensaux de la cavit buccale et qu'on isole de la salive. Elles peuvent survivre quelque temps dans le milieu extrieur mais ne s'y dveloppent pas. Chez l'homme le portage latent, pharyng, est possible chez des sujets professionnellement au contact des animaux.

POUVOIR PATHOGENE (suite)

La prsence dune capsule est ncessaire { lexpression complte de la virulence. Les facteurs de virulence et de pathognicit sont: Adhsion Des fimbraes mises en vidence chez les souches adhrentes nexistent pas chez les souches non adhrentes. Cette adhrence augmente avec la dcapsulation des souches et diminue en prsence dacide hyaluronique qui pourrait agir en augmentant les forces de rpulsion entre le matriel capsulaire et la surface cellulaire.

POUVOIR PATHOGENE (suite)

Rsistance la phagocytose

Lactivit antiphagocytaire de la capsule A riche en acide hyaluronique a t mise en vidence Invasion des tissus de lhte Avec production de neuraminidase. Une activit neuraminidasique est dtecte au sein de la famille des pasteurellaceae et pour cetains auteurs, les souches les + virulentes seraient celles qui en produisent le +.

POUVOIR PATHOGENE (suite)

Captation du fer

Elle est dune importance capitale pour lexpression de la virulence de P. multocida. Les mcanismes de captation mis en jeu sont: - Un sidrophore = multocidine - Une protine de haut PM se comportant comme un rcepteur membranaire et prsentant une haute affinit pour le fer li la transferrine bovine. Toxine dermo-ncrotique Elle est produite par certaines souches. Cest une protine intracellulaire libre en phase stationnaire de croissance par la lyse des corps bactriens.

PATHOGENIE
Parmi les pasteurelloses humaines, il convient de distinguer,
les pasteurelloses d'inoculation, secondaires des agressions animales les pasteurelloses systmiques se manifestant sous forme de

bactrimies ou d'atteintes viscrales.

les pasteurelloses d'inoculation Elles surviennent aprs morsure, griffure ou lchage sur plaie prexistante. La pntration est donc cutane, exceptionnellement oculaire. Les lsions sigent, par ordre de frquence, - au membre suprieur surtout mains, poignets, avant bras - aux extrmits infrieures ensuite, - au cou et sur la tte enfin (chez les enfants principalement). Les animaux responsables sont le plus souvent le chat puis le chien.

PATHOGENIE (suite)
les pasteurelloses systmiques = les bactrimies et les atteintes viscrales dues des pasteurelles. Elles sont plus frquemment sur un terrain fragilis : cirrhose thylique, insuffisance hpatique, leucmie, cancer, connectivites, immunodpression. Les bactrimies Pasteurella sont presque toujours secondaires une blessure occasionne ou contamine par un animal et sont parfois associes une atteinte viscrale. Exceptionnellement, elles paraissent primitives, sans notion de porte d'entre.

CARACTERES BACTERIOLOGIQUES
MORPHOLOGIE

Pasteurella multocida est un coccobacille Gram ngatif Immobile Asporul et capsul coloration bipolaire.

CARACTERES BACTERIOLOGIQUES (suite)

CARACTERES CULTURAUX
Temprature :37C (22- 44 C) Poussent sur milieux ordinaires mais est

fortement stimul par adjonction de sang ou de srum Aro-anarobiose facultative Production de H2O2 (catalase) Mise en vidence dune cytochrome oxydase Pour les espces aviaires, une exigence en NAD existe.

CARACTERES BACTERIOLOGIQUES (suite)

Les colonies sont petites, rondes, lisses, bombes et transparentes mais certaines souches d'origine humaine apparaissent parfois muqueuses, grises et mattes.

CARACTERES BACTERIOLOGIQUES (suite)

STRUCTURE ANTIGENIQUE
Antigne capsulaire de nature polysaccharidique, il est troitement li au

LPS ainsi qu{ des PS non antigniques LPS de P multocida est proche de celui des entroB par la prsence de lipide A et dun core oligosaccharidique Antignes membranaires. La structure membranaire prsente aussi des points communs avec celle des enterobacteries. Srotypes Limportance des pasteurelloses a conduit { la mise au point de plusieurs systmes de srotypies dont le typage capsulaire de CARTER qui dcrit 5 types A, B, D, E, F (2 dentre eux sont isols chez lhomme: A et D.)

Le LPS constituant de la membrane externe se comporte comme une endotoxine comme chez tous les bacilles Gram ngatif

DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE
PRELEVEMENTS
La srosit de la plaie, Le pus ganglionnaire, articulaire ou osseux, Le sang par hmoculture L'expectoration.

Ensemencemt

utilisent des milieux riches, solides et liquides. Les colonies se dveloppent sur glose en 24 48 heures.

DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE (suite)

L'identification se fonde sur
la morphologie: coccobacilles coloration

bipolaire Les caractres biochimiques et enzymatiques qui permettent de reconnatre les autres espces du genre et les espces voisines.

DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE (suite)

Identification Catalase + Oxydase + Rduction nitratenitrite Rouge mthyl et VP Gelatine non hydrolyse Pas de LDC Fermentent glucose, galactose, fructose, sorbose, mannose et saccharose Jamais dacidification du rhamnose, inositol, adonitol Pas de production de gaz

DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE (suite)

Le diagnostic srologique repose sur la mise en vidence danticorps anticapsulaires par hmagglutination dhmaties sensibiliss par les polysaccharides capsulaires et danticorps antisomatiques par agglutination de suspensions bactriennes traites par hyaluronidase. Il est utilisable chez l'animal mais pas chez l'homme. Une intradermo-raction la "pasteurelline" (filtrat de culture en bouillon) est un trs bon test diagnostique dans les formes focales ds le 8me jour et pendant plusieurs annes parfois.

ANTIBIOGRAMME
Les bactries du genre Pasteurella sont sensibles in vitro de nombreux antibiotiques : btalactamines, chloramphnicol, cyclines, imidazols, cotrimoxazole, fluoroquinolones. Les macrolides et les aminosides ont une moins bonne activit. Rsistantes aux lincosamines